抗CD134抗体封闭肝移植术后急性排斥反应的实验研究

抗CD134抗体封闭肝移植术后急性排斥反应的实验研究

胡曼丽1范恩学2孙海侠3王焕丽2

胡曼丽1范恩学2孙海侠3王焕丽2

（1吉林长春医学高等专科学校130031;2吉林大学第二医院130041;3吉林大学第一医院130021）

【中图分类号】R446.1【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2011)15-0203-01

【摘要】目的研究抗CD134抗体封闭肝移植术后急性排斥反应在免疫耐受中的作用。方法通过抗CD134抗体抑制共刺激途径，研究排斥反应出现免疫耐受的情况。结果空白对照组：SD对Wistar组存活时间因有排斥反应致存活时间短，平均7±2.3天；移植治疗对照组：抗CD134组肝移植因未见明显的排斥反应，存活时间长，平均12±2.5天,有统计学差异。结论抗CD134抗体可以诱导免疫耐受的产生。

【关键词】共刺激分子肝移植急性排斥反应抗CD134抗体免疫耐受

目前，免疫耐受成为解决排斥反应重要课题之一，而重要机理就是封闭CD134，达到抑制共同刺激分子途径，使病人长期对移植排斥无反应而终生存活。

1材料与方法

1.1抗OX抗体（抗CD134）基因工程抗体来源我们从美国SIGMA公司引进抗CD134基因工程抗体1000mg/ml，供应课题应用。

1.2实验分组选取MHC（组织相容复合体）完全不匹配的雄性SD大鼠（供体）、8-10周龄、体重200-240g。雄性wistar大鼠（供体）、8-12周龄、体重200-240g。由吉林大学实验动物（清洁级动物）提供，随机分成2组，每组20只，供肝脏移植用。

本实验分为2组。分别于3天、6天、9天、12天、15天、20天给药：SD+wistar对照组腹腔注射生理盐水；SD+wistar治疗组注射抗大鼠CD134抗体0.5mg/只。

1.3大鼠肝脏移植术式采用腹腔原位肝脏移植法。该法由课题组负责人张兴义教授创立，该实验方法论文Zhang-xing-yiTransplamtation[2000:69（1）：3-10]。该论文被SCI收录。大鼠麻醉采用30mg/kg戊巴比妥腹腔注射。麻醉生效后，分别切除受体肝脏，用7-OProleme-连续端端吻合肝脏上下腔静脉（IVC），用套管法吻合门静脉（PV），胆管重建采用Stent端端吻合法。移植肝脏冷血时间为30min之内。移植手术是否成功判断标准为术后关腹前观察移植肝脏血运情况。完全血运且无渗血为移植模型成功。

1.4HE染色及免疫组化染色

1.4.1HE染色方法切取移植的肝脏组织，石腊切片脱蜡和水化后蒸气水洗；哈瑞氏苏木精浅染核5分钟；自来水冲洗；1%盐酸酒精分化—自来水冲洗；0.1%弱氨水返蓝—自来水充分冲洗—蒸气水洗；伊红染,15分钟；常规脱水,透明,封片。常规切片，HE染色镜下观察。

1.4.2免疫组化制备，（SABC法）抗大鼠IL-a、TNF、IFN抗体均购于美国SIGMA公司，按实验说明书进行。

2结果

2.1抗大鼠IL-a、TNF、IFN抗体均购于美国SIGMA公司，按实验使用说明书进行。一抗的工作稀释度均为1∶400，为阴性对照。将目镜配上10×10计数格，在高倍镜下随机选择4个视野，计数4个视野的平均阳性细胞数。细胞浆内出现棕黄色颗粒为阳性，分别表示如下：棕黄色－+++，黄色－++，淡黄色－+，无色为阴性,表示计量分析将组化片扫描图像输入计算机，采用计算机图像分析软件计数浸润的炎症细胞数量。空白对照组未出现；抗CD134抗体治疗组较多，两组间统计学有显著差异。

2.22组肝移植后大鼠存活时间（天）空白对照组：SD对Wistar组存活时间因有排斥反应致存活时间短，平均7±2.3天；移植治疗对照组：抗CD134组肝移植因未见明显的排斥反应，存活时间长，平均12±2.5天。有统计学差异。

3讨论

在研究抑制排斥反应中有许多诱导耐受的方案，其中有些能使移植物在鼠类受体长期存活，至今无一个能达到免疫抑制的程度。因此，耐受诱导方案的研究成为重要内容之一。

本研究建立肝移植动物模型，分2组，分别给生理盐水对照和抗CD134抗体治疗组，结果表明：空白对照组：SD对Wistar组存活时间因有排斥反应致存活时间短；移植治疗对照组：抗CD134组未见明显的排斥反应，存活时间长，两组间抑制排斥反应有差异。

新的共刺激分子的认识和定性导致了移植免疫领域的研究者再次改写了T细胞激活的双信号模式。T细胞的完全激活在机理上更为复杂，可能需要几种共刺激信号途径的相互作用。这些信号（正性或负性）及其表达的方式（空间或时间）各不相同，反映出它们在介导T细胞应答中的不同作用。尽管各条共刺激信号途径的相互作用存在其自身复杂性，正如CTLA4-Ig在II期临床研究中的成功表现，选择性单个分子的阻断仍然是建立免疫耐受有效的策略之一。

参考文献

[1]LarsenC,ElwoodE,AlexanderD,etal.Long-termacceptanceofskinandcardiacallograftsafterblockingCD40andCD28pathways.Nature，1996，381(6581):434.

[2]王燃燃,彭道泉,赵水平.冠心病相关的炎症新指标OX40L.中华心血管病杂志,2006,34:1110-1112.(注：基金项目：吉林省科技厅课题.编号200705259)s