涎腺外泌体与口腔癌

涎腺外泌体与口腔癌

焦博强1顾姣娜2潘珲*

焦博强1顾姣娜2潘珲*

浙江大学医学院附属口腔医院口腔颌面外科310006

【摘要】目的回顾涎腺外泌体研究的最新进展，从定义，功能，提取及检测方法等方面介绍外泌体。讨论外泌体与口腔癌之间的关系。方法：应用计算机检索PubMed数据库2009-2019年的相关文章，检索词为“salivaryexosomecancer”；同时检索cnki数据库，检索词为“涎腺外泌体与口腔癌”，对资料进行初审，并查看每篇文献后的引文。与本文相关内容纳入，重复文章排除，结果共收集到英文文献24篇，中文并无相关文献，取有代表性文章纳入11篇。综合纳入的文献，对涎腺外泌体及其在口腔癌方面的应用及未来发展前景进行综述。结论：涎腺检测方便，国外已有报道外泌体与癌症有相关，许多外泌体蛋白和微小RNA与口腔癌均有强相关性。

【关键词】涎腺；外泌体；口腔癌

【Abstract】Purpose：thispaperreviewsthelatestresearchprogressofexosomesinsalivaryglands，andintroducesexosomesintermsofdefinition，function，extractionanddetectionmethods.Discusstherelationshipbetweenexosomesandoralcancer.Methods：therelevantarticlesinPubMeddatabasefrom2009to2019weresearchedbycomputerwiththesearchterm"salivaryexosomecancer".Meanwhile，cnkidatabasewassearchedwiththesearchterm"exosomesofsalivaryglandsandoralcancer".Thedatawereinitiallyreviewedandthecitationsaftereacharticlewerereviewed.Thecontentsrelatedtothispaperwereincluded，andtheduplicatearticleswereexcluded.Asaresult，atotalof24Englishliteratureswerecollected，andnorelevantliteratureswerefoundinChinese.11representativearticleswereincluded.Inthisreview，theapplicationandprospectofexosomesinsalivaryglandsinoralcancerwerereviewed.Conclusion：Exosomesofsalivaryglanddetectionisconvenient.Ithasbeenreportedtobeassociatedwithcancer，andmanyexosomeproteinsandmicroRNAarestronglycorrelatedwithoralcancer.

【Keywords】：salivary，exosome，oralcancer

上世纪60年代BonucciE首先与颗粒软骨中观察道直径100nm的囊泡。【1】之后TramsEG将外泌体从细胞过程中独立出来，赋予分泌囊泡的概念。【2】外泌体广泛存在于体液当中，如血、尿、唾液及乳汁等。它是直径约30-200nm的细胞分泌的膜泡，并且含有特定的蛋白质、脂质、核酸和糖合物。外泌体含有一系列与膜相关的高级寡聚蛋白复合物，显示出明显的分子异质性，并通过在内体膜上出芽而产生。【3】

外泌体功能丰富，可以通过蛋白质、核酸等参与细胞间信号传导，与细胞微环境相互作用。细胞囊泡运输在人类发育、内分泌、及癌症等多方面发挥重要功能。外泌体携带的信息如miRNAs可以调节生物发育的各个过程，上调ssc-mir-133b将会导致裸鼠牙胚发育异常。【4】间充质干细胞的外泌体可以减轻胰岛素抵抗，缓解β细胞损伤从而减轻糖尿病。【5】有研究证实在癌症当中外泌体与癌症的进展及代谢有关联。【6】通过测定外泌体含量可以检测肿瘤的生长情况，同时了解疾病治疗疗效。除此之外，外泌体可以治疗多种疾病的手段。

外泌体分泌有以下三种方法：（1）内体膜向内出芽，发育为多泡体，在质膜融合后释放；（2）直接从细胞膜出芽释放；（3）通过在细胞内质膜连接隔室出芽释放。【3】涎腺外泌体可以直接从唾液当中获取，是一种无创的检测方法。提取外泌体的方法有许多种。分离外泌体一般是先使用体液或细胞培养的上清液在2000g下去除坏死细胞，之后在100000g下去除细胞碎片和非外泌体囊泡。【6】密度梯度离心法使用蔗糖等密度培养基，该法为分离外泌体的金标准。使用超过100000g的超高速离心是成本最低的分离方法。化学沉淀法使用聚乙烯乙二醇等培养再通过低速离心与沉淀。此法较为简便，但是纯度较差。超滤法是将样本通过可以过滤不同分子重量或大小的膜来达到分离的目的。该方法可能会损坏外泌体膜，导致生物活性降低。

口腔鳞状细胞癌（OSCC）为口腔颌面部最多见的上皮源性恶性肿瘤，而颌面部血运及淋巴结丰富，这造成了口腔癌容易复发和转移。当恶性肿瘤扩大切除后往往造成面部缺损、畸形，影响进食、语音等功能，严重影响患者的生存质量。肿瘤会分泌癌症相关的外泌体，可以从唾液当中获得并提取，通过一滴唾液便可提供证据，协助疾病的诊断，具有无创的优点并且费用便宜。这些微囊泡在疾病发生及发展中发挥的重要作用。外泌体含有功能蛋白质、信使RNA和微小RNA（miRNA）。肿瘤外泌体与周围微环境作用后可以促进肿瘤生长与侵袭。口腔鳞癌中成纤维细胞外泌体分泌的miR-34a-5p过表达与下游靶点AXL结合通过信号通路促进鳞癌进展及转移。【9】进一步研究该微小RNA可能将作为口腔鳞癌的治疗靶点之一。基于外泌体的信使RNA标志物miR-185已经率先应用于口腔癌的诊断当中。【10】该标志物可以抑制炎症及血管生成，促进细胞凋亡从而延缓口腔白斑发展为癌。通过该生物检测可以预测口腔白斑转化为癌的风险。甚至通过基因修饰可以阻止恶变的发生。基于癌症细胞分泌的外泌体可以促进细胞的迁移，可能为未来癌症治疗提供新的标靶。【9】除了促进癌症侵袭外，有报道证实口腔癌LN1-1细胞的泡外囊泡可以促进淋巴管内皮细胞迁移和形成。其携带的层粘连蛋白-332可能做为OSCC标记物。【10】细胞胞外囊泡（EVs）可以通过人为修改脂质、蛋白质和核酸再输送到目标体内的方法实现许多生物功能，为个性化及精准医疗提供了新的发展方向。这还需要大量的疾病致病因素分析和研究。【11】

结论

外泌体分布于全身，存在于细胞外的体液当中，参与生长、发育、神经、免疫等方方面面。提取外泌体有多种方法。涎腺外泌体做为液体活检的首选之一，具有简单成本低的优势。外泌体的多种成分可以促进口腔病变成为癌，甚至促进癌症生长与侵袭、转移。目前已有许多外泌体蛋白和miRNA与口腔癌有强相关性，这均为口腔癌的检测及治疗提供了新的可能。

参考文献：

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[2].BonucciE.1967.Finestructureofearlycartilagecalcifcation.J.Ultrastruct.Res.20：33–50

[3].D.MichielPegtelandStephenJ.Gould.Exosomes.AnnualReviewofBiochemistry.

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[8].WangL，YinP，WangJ，etal.Deliveryofmesenchymalstemcells-derivedextracellularvesicleswithenrichedmiR-185inhibitsprogressionofOPMD.ArtifCellsNanomedBiotechnol.2019Dec；47（1）：2481-2491.

[9].MengX，JianjunZ，WanjunC，etal.M1-liketumor-associatedmacrophagesactivatedbyexosome-transferredTHBS1promotemalignantmigrationinoralsquamouscellcarcinoma[J].JournalofExperimental&ClinicalCancerResearch，2018，37（1）：143-.

[10].WangSH，LiouGG，LiuSH，etal."Laminingamma2-enrichedextracellularvesiclesoforalsquamouscellcarcinomacellsenhanceinvitrolymphangiogenesisviaintergrinalpha3-dependentuptakebylymphaticendothelialcells."IntJCancer.2019Jun1；144（11）：2795-2810.

[11].TaoSC，GuoSC，ZhangCQ.ModularizedExtracellularVesicles：TheDawnofProspectivePersonalizedandPrecisionMedicine[J].AdvancedScience，2018：1700449.