P504S、P63、CK34βE12、PSA联合检测在前列腺良恶性病变中的表达及应用价值

P504S、P63、CK34βE12、PSA联合检测在前列腺良恶性病变中的表达及应用价值

黄洪欣1辛志峰2姜长青3*

黄洪欣1辛志峰2姜长青3*（1山东青岛公安消防医院山东青岛266016)

(2山东青岛崂山区妇幼保健院山东青岛266067；3山东青岛市立医院山东青岛266011）

【中图分类号】R697+.3【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）02-0045-03

【摘要】目的探讨P504S、P63、CK34βE12、PSA在前列腺良恶性病变中的表达及联合检测的应用价值。方法应用免疫组化（增强型PV6000）对前列腺癌（PC）108例、高级别前列腺上皮内瘤变（HGPIN）10例、低级别前列腺上皮内瘤变（LGPIN）53例、良性前列腺增生（BPH）90例进行P504S、CK34βE/12、P63、PSA联合检测。结果P504s在PC组阳性表达率93.52%，明显高于HGPIN、LGPIN、BPH组（P<0.01）；CK34βE12和P63在PC组阳性表达率均为2.78%，明显低于HGPIN、LGPIN、BPH组（P<0.01）；PSA在4组前列腺病变中均为阳性表达。结论联合检测P504S、CK34βE12、P63、PSA等4种标记物可提高前列腺良恶性疾病诊断和鉴别诊断的准确率。

【关键词】前列腺癌BPHPINP504S34βE12P63PSA

近年来在中国前列腺癌的发病率呈现上升趋势，其诊断虽然主要依赖于标准的HE染色,但实际工作中鉴别前列腺良、恶性病变还是较为困难。前列腺特异抗原(PSA)是目前最常用的前列腺病变标记物，但缺乏特异性。高分子量角蛋白CK34βE12和P63作为基底细胞特异性标记物，是鉴别诊断前列腺良、恶性病变的重要指标。国外研究报道，P504S(α-甲酰基辅酶A-消旋酶)则是新近发现的前列腺癌细胞的阳性标记物[1,2]。本研究选取261例前列腺手术切除及穿刺活检标本进行P504S、PSA与CK34βE12和P63免疫组化联合检测，旨在探讨4种标记物检测在前列腺良、恶性病变诊断与鉴别诊断的应用价值。

1.材料与方法

1.1材料

选取青岛市立医院病理科2007～2011年前列腺手术切除及穿刺活检标本261例，按病变性质分4组：前列腺癌（PC）108例，高级别前列腺上皮内瘤变(HGPIN)10例，低级别前列腺上皮内瘤变(LGPIN)53例，良性前列腺增生(BPH)90例。前列腺癌患者年龄53～91岁，平均72岁。

1.2试剂

即用型兔抗人P504S单克隆抗体工作液、即用型鼠抗人P63、CK34βE12、PSA单克隆抗体工作液、增强型PV6000超敏免疫组化试剂盒均购自北京中衫金桥生物技术有限公司。

1.3方法

所有标本均采用4%的中性福尔马林固定。组织经常规处理，石蜡包埋，4μm连续切片，HE染色，显微镜观察。将石蜡切片常规脱蜡至水后置修复液中高温高压抗原修复，0.3%的H2O2-甲醇液封闭内源性过氧化物酶，一抗4℃过夜，相关二抗，DAB显色,苏木素复染，中性树胶封片。以PBS代替一抗作为阴性对照，P504S、P63、CK34βE12和PSA已知阳性切片作为阳性对照。

1.4Gleason评分方法

PC的HE染色切片在光镜下按Gleason分级标准进行评分，具有2种结构类型的Pca，Gleason评分=主要结构类型(级别)+次要结构类型(级别)，只有1种结构类型的Pca，视为主要结构类型和次要结构类型相同。按Gleason分级评分结果分成两组，2～6分26例，7～10分82例。

1.5结果判断

P504S和PSA阳性表达定位于癌细胞或腺上皮细胞的细胞浆，CK34βE12阳性染色定位于基底细胞的细胞浆，P63阳性染色定位于基底细胞的细胞核。P504S以低倍镜(×100)下能看到胞质出现棕黄色着色为阳性，按染色强度计分：阴性(-)，细胞不着色或背景同阴性对照；弱阳性(+)，低倍镜下能看到浅的棕黄色着色,高于背景颜色，高倍镜下能看到胞质内较少的棕黄色颗粒；阳性(++)，低倍镜下看到胞质内明显的棕黄色颗粒；强阳性(+++)，棕黄色着色颜色深,密度大，非常明显。

1.6统计学分析

采用SPSS17.0版统计软件包进行统计学分析，数据采用χ2检验或Fisher确切概率法，P<0.05为差异有显著性。

2.结果

2.1Gleason评分分值不同的前列腺腺癌及其P504S免疫表达结果

前列腺癌组中按照Gleason分级分为两组，应用卡方检验比较两组的构成比，P=0.353，两组比较无显著性差异(P>0.05)（见表1）。

表1PC组中Gleason评分与P504S表达的关系

2.2P504s在前列腺病变中的表达

P504s在前列腺病变的阳性信号定位于癌细胞或腺上皮细胞的细胞浆。PC与HGPIN、LGPIN、BPH组比较均有统计学意义（P<0.01）。HGPIN与BPH组之间有差异（X2=9.091，P﹤0.05）。（见表2）

表2P504s在前列腺4种病变中的表达

2.3CK34βE12在前列腺病变中的表达

CK34βE12在前列腺病变的阳性信号定位于基底细胞的细胞浆。PC与HGPIN、LGPIN、BPH组比较均有统计学意义（P<0.01）。（见表3）

表3CK34βE12在前列腺4种病变中的表达

2.4P63在前列腺病变中的表达（见表4）

P63在前列腺病变的阳性信号定位于基底细胞的细胞浆。PC与HGPIN、LGPIN、BPH组比较均有统计学意义（P<0.01）。HGPIN与BPH组之间有差异（X2=4.938，P﹤0.05）。LGPIN与BPH组之间有差异性（X2=6.396，P<0.05）

表4P63在前列腺病变中的表达

2.5PSA在前列腺病变中的表达（见表5）

PSA阳性表达定位于癌细胞或腺上皮细胞的细胞浆。各组之间均无差异性（P﹥0.05）。

表5PSA在前列腺病变中的表达

3.讨论

前列腺手术切除及穿刺活检是确诊前列腺癌的重要手段。由于前列腺癌病理诊断需同时具备肿瘤细胞的生长方式、非典型核型、基底细胞缺乏等多种组织学特征，至今还没有一种单独的组织学特征可以充分而又特异性地满足前列腺癌的诊断。前列腺癌诊断时需联合使用更客观、更可靠的肿瘤特异性标记物才可大大提高诊断与鉴别诊断的准确性。

3.1前列腺特异性抗原(prostaticspecificantigen,PSA)是一种包含240个氨基酸的单链糖蛋白,分子量为34kD。PSA是前列腺癌诊断最常用的生物标记物，曾在临床治疗方案的选择、疗效评估与肿瘤复发的预测等方面有过广泛的应用[3]。本实验结果表明PSA在PC、HGPIN、LGPIN、BPH各组阳性表达率高达98.18%--100%，说明PSA作为标记物在前列腺不同病变中缺乏特异性与敏感性。

3.2CK34βE12是分子量为50～68kD的高分子量角蛋白1、5、10、14的单克隆抗体，能特异性标志前列腺腺体的基底细胞，且可证实前列腺癌基底细胞缺失，故该抗体在前列腺癌与前列腺其他病变的鉴别诊断中已被广泛应用[4]。但是有少数良性前列腺病变也可出现基底细胞的缺失，因此，单独采用CK34βE12检测有一定局限性[5]。大多数良性前列腺增生腺泡和低级别PIN腺管周围呈现连续P63分布，高级别PIN中可见p63呈程度不同的间断缺乏，前列腺癌中P63阴性，显示基底细胞几乎消失[6]。研究发现，P63的特异性和敏感度较CK34BE12更胜一筹，在复杂病例中更有诊断优势。本实验结果表明，P63能清晰显示基底细胞存在，大多数良性增生性病变中，P63在导管或腺泡周围呈连续分布，P63在HGPIN、LGPIN和BPH各组中的阳性表达率均高于CK34βE12在各组的阳性表达率，说明P63能较好地显示部分CK34BE12未能标记的基底细胞，与文献报道一致。但有研究报道在前列腺导管腺癌基底细胞的P16标记可以显示灶性阳性。本实验结果显示，在PC组中P63的阳性表达率和CK34βE12都为2.78%。P63与CK34βE12均可清楚显示基底细胞的连续、间断与缺失。另外本研究还发现在BPH组中，CK34βE12和P63的阳性表达率分别为77.77%和92.22%，说明少数良性腺泡或腺泡壁上部分基底细胞缺乏CK34βE12和P63的表达，提示仅CK34βE12和P63阴性,不能作为诊断前列腺癌的确诊指标，这与关于基底细胞缺失并非前列腺癌的特异性变的研究结果一致。因此,需要一种具有高敏感性和高特异性的前列腺癌阳性标记物与之联合使用。

综上所述，在前列腺癌良恶性疾病的诊断与鉴别诊断中，P504S、P63、CK34βE12、PSA联合检测具有重要意义，四种因子能相互补充、相互印证，尤其是穿刺活检的小标本，可提高前列腺疾病病理诊断的准确率，为临床早期发现、早期治疗前列腺癌提供有力的理论依据。但需要指出的是：在前列腺腺癌良恶性疾病的组织病理学诊断及鉴别时，联合检测仍然不能取代HE染色，应以常规HE切片为基础，P504S、CK34βE12和P63、PSA四种标记物免疫组化染色结果为辅助，结合临床资料综合分析，才能做出较为准确的判断。

参考文献

[1]SignorettiS,WaltregnyD,DilksJ,etal.p63isaprostatebasalcellmarkerandisrequiredforprostatedevelopment[J].AmJpathol,2000,157(6):1769-1775.

[2]SemjonowA,DeAngelisG.“Ultrasensitive”prostatespecificAntigen(PSA).

assay:Howlowdowewanttogo.JLabMed,2003,27(1/2):16.

[3]赵红艳,叶明福.前列腺上皮性肿瘤特异性免疫标记的研究进展[J].诊断病理学杂志,2007,14(4):3092312.

[4]王彩红,王晋芬.前列腺癌肿瘤标记物的检测及进展[J].诊断病理学杂志,2007,14(1):68271.

[5]杜洪,李雯,梁颜笑.联合p504S、CK34βE12、p63检测在前列腺良恶性病变鉴别诊断中的应用[J].中国医师进修杂志,2006,29(4):426.

[6]胡志红,程玲,吴萍,等.CK34βE12、p63和P504S联合检测在前列腺肿瘤鉴别诊断中的应用[J].诊断病理学杂志,2005,12(2):1232125.