益气通络胶囊对MCAO模型大鼠再灌注后血浆TXB2、6–K–PGF1α含量及其比值的影响

益气通络胶囊对MCAO模型大鼠再灌注后血浆TXB2、6–K–PGF1α含量及其比值的影响

贠建业魏录翠安晓旭

贠建业魏录翠安晓旭（安阳市中医院河南安阳455000）

【摘要】目的观察研究我院制剂益气通络胶囊对大鼠CRI的保护作用，为该药治疗缺血性中风提供科学的依据。方法采用Longa等线栓法制备大鼠局灶性大脑中动脉阻断（MiddleCerebralarteryocclusion，MCAO）模型。将60只普通级SD大鼠随机分为假手术组（shamgroup）、模型组、阳性对照组、益气通络胶囊高、中、低三个剂量组，分别对各组缺血2h后再灌注6h、24h两个时间点进行神经功能缺损评分，放免法测定血浆TXB2、6–K–PGF1α的含量等。结果益气通络胶囊高、中、低三个剂量组均有显著降低血浆TXB2含量（P<0.01）、升高血浆6–K–PGF1α含量（P<0.01）及改善二者比值的作用（P<0.01）。结论益气通络胶囊可显著降低血浆TXB2的含量，升高血浆6–K–PGF1α的含量，对大鼠CRI具有保护作用。

【关键词】益气通络胶囊脑缺血/再灌注损伤6-酮-前列腺素F1

【中图分类号】R452【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）45-0065-02

1实验材料

1.1实验动物

普通级SD大鼠60只，雄性，体重300±20g，由郑州大学医学院动物实验中心提供，合格证号：医动字第0001645号。

1.2实验药物

益气通络胶囊均由安阳市中医院制剂室提供，其不同组所用中药来源完全相同，制作工艺完全相同，将该药的细药面加入蒸馏水，浓缩成每毫升含0.06g生药的混悬药液。

步长脑心通胶囊[国药准字Z20025001]，0.4g/每粒，由咸阳步长制药有限公司中药厂生产。将该药的细药面加入蒸馏水，浓缩成每毫升含0.06g生药的混悬药液。

益气通络胶囊中等剂量组及步长脑心通组用药量按相当于成人等效剂量的7倍折算。

1.3主要实验试剂、药品

乌拉坦，上海曹杨第二中学化工厂生产，批号：130411。

2%碘酊，广西贵港市峡山制药厂，批号：1307181。

0.9%氯化钠注射液，郑州化学药业有限公司，批号：1304191。

95%乙醇，北京北化精细化学品有限责任公司，批号：130616。

10%水合氯醛，上海白鹤化工厂，批号：12016。

乙二胺四乙酸钠盐（EDTA），西安化学试剂厂，批号：130907。

TXB2、6–K–PGF1α放免试剂盒，北京东亚放免技术研究所提供，批号：20120921。

1.4主要实验仪器及实验用品

岛津AEL—200型电子分析天平，日本岛津公司生产。

HDS—88托盘式电子秤，武汉自动仪表厂生产。

光学显微镜PM—10AD型，OlympusOptical,Co.LTD。

恒温箱WS—216—78，沈阳理化厂生产。

干燥箱DGB/20—002，重庆试验仪器厂生产。

LD4—TA型离心机，北京医用离心机制造厂生产。

932型电热烧灼器，上海医疗器械厂生产。

PE—503型原子吸收分光光度计，上海第三分析仪器厂生产。

CS-9301PC型薄层扫描仪，日本SHIMADZU公司。

2实验方法

2.1动物模型的制备

2.1.1栓线的制备[1]

将直径为0.20mm的钓鱼用尼龙线，长约5cm，在放大镜下把栓线一端放置在距加热器约1mm处，加热30秒，栓线前端烧成椭圆形，使其直径在0.22～0.30mm，后浸入0.1%多聚赖氨酸溶液中10分钟，取出放在60℃烤箱中干燥1小时备用。

2.1.2模型建立

采用改良Longa法制作MACO模型[2]，各组大鼠于术前24小时禁食，12小时禁水。大鼠用10%水合氯醛(0.35ml/100g)腹腔注射麻醉后,仰卧固定,颈部正中偏左切口，钝性分离胸锁乳突肌和胸骨舌骨肌，暴露左侧颈总动脉(commoncarotidartery,CCA)与迷走神经，游离CCA，颈内动脉(internalcarotidartery,ICA)，颈外动脉(externalcarotidartery,ECA),用电凝器将以下ECA分支烧断（甲状腺上动脉、枕动脉），结扎ICA的颅外唯一分支翼鄂动脉(peterygopalatineartery,PPA),在距ECA起始处1cm结扎并电凝ECA主干，用无创动脉夹分别夹闭CCA近心端和ICA远端，在ECA与ICA分叉处置一细线，打一活结，在ECA残端0.5cm处煎一小口，将准备好的栓线经ECA插入ICA，将活结扎紧，松开动脉夹，将栓线顺ICA缓慢插入，直至大脑中动脉(middlecerebralartery,MCA)近端，栓线进入深度约17.5±1.0mm，以阻断该侧MCA的血流供应，生理盐水冲洗，关闭手术切口。切口外留10.0mm左右长的栓线，再灌注时将栓线向外拉出至ICA颅外段即可。假手术组不插栓线，余手术操作同模型组。观察缺血2h后再灌注6h，24h两个时间点的变化。

2.1.3模型判定

栓线插入后出现左侧Horner综合征，左侧瞳孔缩小，麻醉清醒后出现右侧前肢或前后肢瘫痪，即Longa[3]评分为1～3分时认为模型制作成功。如果缺血后规定时间内未出现右侧肢体瘫痪或已死亡，即Longa评分为0分或4分则予以排除。再灌注成功以栓线拔出后ICA、Willis环无血栓形成或蛛网膜下腔出血为标准，否则也排除该标本。

2.2动物分组及给药方法

取普通级SD大鼠60只，随机分为6组，每组10只。

2.2.1动物分组

1)假手术组（shamgroup）:按10ml/kg?d-1。

2)再灌注模型组(ischemia-reperfussion，IRgroup):按10ml/kg?d-1。

3)步长脑心通组（BNT组）:缺血再灌＋BNT，按0.6g/kg?d-1。

4)益气通络胶囊低剂量组(YQTL1组):缺血再灌＋YQTL，按10g/kg?d-1。

5）益气通络胶囊中等剂量组(YQTL2组):缺血再灌＋YQTL，按20g/kg?d-1。

6）益气通络胶囊高剂量组(YQTL3组)：缺血再灌＋YQTL，按40g/kg?d-1。

2.2.2给药方法

SHAM组、IR组于术前5天给予生理盐水灌胃；BNT组、YQTL1组、YQTL2组、YQTL3组于术前5天给予浓缩药液灌胃，最后一次给药均在手术前1h进行。IR组、BNT组、YQTL1组、YQTL2组、YQTL3组于缺血2h，再灌注24h后处死。SHAM组于术后同时处死。

3血浆TXB2、6–K–PGF1α的测定

于再灌注后24h，处死前腹主动脉取血，制备血浆，采用东亚免疫技术研究所TXB2、6–K–PGF1α放免药盒，按说明操作。通过TXB2、6–K–PGF1α来间接反映TXA2、PGI2的含量及比值变化。单位以pg?ml-1表示。

4统计学处理

数据在计算机上，用SPSS13.0forwindows统计分析软件处理。计量资料，所有数据以均数（-x）±标准差（s）表示，组间比较采用方差检验及单因素方差分析LSD法；计数资料用秩和检验。

5对大鼠MCAO模型再灌注后血浆TXB2、6–K–PGF1α含量及其比值的影响

表1血浆中TXB2、6–K–PGF1α含量及其比值的变化

（x-±s,n=10）

组别剂量(g?kg-1)TXB2

（pg?ml-1）6–K–PGF1α（pg?ml-1）TXB2/6–K–PGF1

SHAM-205.55±16.38△#206.71±10.56△#1.00±0.09△#

IR-585.21±27.12*#71.14±10.86*#8.43±1.55*#

BNT0.6g/kg352.31±26.76*△126.16±13.56*△2.83±0.47*△

QHLS110g/kg512.88±22.92*△#96.42±13.17*△#5.39±0.66*△#

QHLS220g/kg368.01±22.25*△111.2±13.86*△3.35±0.45*△

QHLS340g/kg208.60±20.26△#142.63±18.71*△1.48±0.20*△#

注：与SHAM组比较：*P<0.01；与IR组比较：△P<0.01；

与BNT组比较：#P<0.01

表2结果表明：①与假手术组比较：YQTL3组在血浆TXB2含量上无显著差异（P>0.05），余各组均有显著差异（P<0.01）；各组在血浆6-K-PGF1α含量及二者比值上均有显著差别（P<0.01）。②与模型组比较：各组在TXB2、6-K-PGF1α含量及其比值方面均有显著差异（P<0.01）。③与BNT组比较：在血浆TXB2含量变化上QHLS2组之间无显著差异（P>0.05），余各组比较均有显著差别（P<0.01）；在血浆6–K–PGF1α含量方面，YQTL2组、YQTL3组与对照组之间均无明显差别（P>0.05），余三组与对照组间均有显著差异（P<0.01）；在二者比值上除YQTL2组之间无显著差异（P>0.05），余各组与对照组间均有明显差异（P<0.01）。④与YQTL2组比较：YQTL3组在三方面之间均有显著差异（P<0.01）。

6讨论

本实验对CRI大鼠血浆TXB2和6-K-PGF1α含量及其比值进行了观察研究，发现益气通络胶囊三个剂量组均有明显降低血浆TXB2含量，升高血浆6–K–PGF1α含量及改善二者比值的作用。血浆TXB2和6–K–PGF1α是TXA2和PGI2两种不稳定生物活性物质转变而来的较稳定的代谢产物。PGI2是已知自然存在的最强的血小板聚集抑制剂，是主要由血管壁和中性白细胞合成和释放的一种重要的舒血管物质。正常情况下PGI2在体内合成量很低，又极不稳定，很容易被迅速水解成6-K-PGF1α。前列腺素的体内过氧化物在血小板中生成TXA2，TXA2有收缩血管和促进血小板聚集的作用，是体内PGI2产生的拮抗剂，它在体内的半衰期仅为0.5min，释放出来后即迅速被水解为无活性的较稳定代谢物TXB2。因此通常以测定血浆6-K-PGF1α与TXB2的含量来间接反映PGI2和TXA2在体内的合成与代谢状况。在正常情况下，TXA2和PGI2在体内保持一定的平衡，这两种生物活性物质的相对平衡在维护血管张力、血管壁完整性以及调节血小板功能等方面，起着重要的作用。脑缺血再灌注时脑组织细胞内Ca2+浓度升高，释放出ADP、5-HT和儿茶酚胺等生物活性物质，刺激血小板中花生四烯酸活性代谢产物TXA2大量生成，释放入血，而在花生四烯酸代谢初期，伴有自由基产生，通过对PGI2合成过程中酶系影响，使PGI2合成减少，TXA2和PGI2的平衡遭到破坏，TXA2/PGI2比值增高，TXA2的作用相对于PGI2的作用明显增强，从而引起血小板聚集、脑血管痉挛和血管通透性增加，加重脑缺血和脑水肿形成。研究表明益气通络胶囊能够使血浆TXA2的含量降低，PGI2的含量升高，有明显改善TXA2/PGI2比值，维持二者平衡的作用。从而证明益气通络胶囊具有防治血小板聚集、脑血管痉挛及改善循环，减轻脑缺血和脑水肿，防治再灌注损伤的作用，值得临床进一步研究。

参考文献

[1]BelayevL,AlonsoOF,BustoR,etal.Middlecerebralarteryocclusionintheratbyintraluminalsuture:neurologicalandpathologicalevalutionofanimprovedmodel[J].Stroke,1996,27(9):1616-1623.

[2]LongaEZ,WeinsteinPR,CarlsonS,etal.Reversiblemiddlecerebralarteryocclusionwithoutcranicctomyinrars[J].Stroke,1989,20(1):84-91.

[3]刘小光，徐理纳.一种能评价溶栓和抗栓药的大鼠大脑中动脉血栓模型[J]．药学学报，1995，30(9)：662-667.