如何避免EDTA依赖性假性血小板减少

如何避免EDTA依赖性假性血小板减少

钟仕卿

广东省兴宁市人民医院检验科514500钟仕卿

女主管检验师大专研究方向医学检验

【摘要】目的：对乙二胺四乙酸(EDTA)依赖性假性血小板减少症病因进行分析。对于血小板减少而无出血症状的患者，一定要用不同方法进行复查，以防误诊。方法：7例患者均初次抽静脉血化验，用EDTA-K2抗凝血查血常规，所得血小板（PLT）计数值均低于正常值，与临床医师沟通了解到患者均无出血症状，随后七患者均重新采血，分别用不同抗凝剂全血上机复查及手工计数和血涂片瑞-姬氏染色法观察血小板形态。结果：EDTA-K2可导致血小板活化，使血小板形态发生改变，可引起血小板的聚集或发生卫星现象，分析仪不能识别凝集的血小板，导致血小板计数偏低；当血小板聚集成堆与白细胞体积接近时，可被分析仪当作白细胞进行计数，这就造成了血小板假性减少和和白细胞假性增多。结论：EDTA抗凝剂会诱发血小板粘附与聚集引起假性血小板减少症。虽然发生率不高，但应加以重视，对于血小板减少而无出血症状的患者，一定要用不同方法进行复查，以防误诊。对于诊断为EDTA依赖性假性血小板减少症（EDTA-PTAP）的患者要告知以后查血常规时不要使用EDTA盐抗凝，以免造成不必要的检查和治疗。增加患者的痛苦与经济负担等。

【关键词】假性血小板减少症乙二胺四乙酸血小板计数

乙二胺四乙酸(EDTA)能与血液中Ca2+结合生成螯合物，而使Ca2+失去凝血作用，从而阻止血液凝固。EDTA-K2具有对血液标本中的细胞形态和计数影响非常小等优点，国际血液学标准化委员会(ICSH)1993年建议将乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)作为血常规检验的抗凝剂，随着全自动血细胞分析仪的推广使用，EDTA-K2己在临床广泛使用[1]。但有时EDTA盐可以导致血小板发生粘附与聚集，这种凝集物不被溶血素破坏，使全自动血液分析仪无法正确识别，使血小板计数值明显低于实际数值，这种由EDTA盐引起假性血小板减少的现象被称为EDTA依赖性假性血小板减少症(EDTA-dependentpseudothrombocytopenia,PTCP)。对于EDTA-PTCP国内外均有报道，临床发生率约为0.09%~0.21%。当血小板聚集成堆与白细胞体积接近时，可被分析仪当作白细胞进行计数，这就造成了血小板假性减少和和白细胞假性增多。如果上述误差未被及早识别，可能会给临床工作带来很大的困扰，如延误手术、增加不必要的辅助检查、增加患者的痛苦与经济负担等。本院于2009年10月—2014年7月，在血常规检测中发现7例EDTA-PTCP典型病例，现分析如下。

1对象我院7例均初次抽静脉血化验，用EDTA-K2抗凝血查血常规，所得PLT计数值均低于正常值的患者。

2方法

2.1仪器计数法分别同时用紫帽真空管即EDTA-K2抗凝管与蓝帽真空管即内含有枸橼酸钠抗凝剂（平时用于检测凝血功能）的抗凝管抽取静脉血并混匀，按仪器标准操作规程在全自动血细胞分析仪全血模式进行测定，记录PLT数值。

2.2手工计数法采用全国临床检验方法学学术会议及《全国临床检验操作规程》均一致推荐的草酸铵溶血直接计数法，准确吸取手指末梢血20μl加入到0.38ml草酸铵血小板稀释液中充分混匀，待完全溶血后再次混匀，取血小板悬液1滴冲入改良Neubauer计数板内，高倍镜计数血小板数量。

2.3分别取EDTA-K2抗凝血与手指末梢血制作血涂片，经瑞-姬氏染色，在油镜下观察血小板形态。

3讨论

结果7例患者均初次抽静脉血化验，用EDTA-K2抗凝血查血常规，结果PLT计数值均低于正常值，与临床医师沟通了解到患者均无出血症状，随后七患者均重新采血，分别用不同抗凝剂全血上机复查及手工计数，血涂片瑞-姬氏染色。结果：7例患者的手指末梢血的涂片中，血小板散在分布，形态正常，数目较多，未见明显聚集现象。EDTA-K2抗凝血涂片可见血小板聚集现象或与单核细胞、淋巴细胞有相互粘连及被吞噬现象，也可见血小板围绕淋巴细胞呈现卫星现象。EDTA-K2作为血细胞分析的常用抗凝剂有很大的优点，但对有些患者或者健康人的血液的血小板有一定的聚集作用，造成假性血小板减少，分析原因有以下两点：(1)EDTA-K2可使血液发生免疫介导，产生冷抗血小板抗体，使血小板互相发生凝集现象，这种EDTA依赖的冷抗血小板自身抗体还能直接作用于血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa上，同时这种与血小板结合后的自身抗Fc端又可与淋巴细胞或单核细胞膜上Fc受体结合，出现卫星现象。(2)EDTA-K2可导致血小板活化，使血小板形态发生改变，导致血小板膜表面某种隐匿性抗原表位发生构象改变，这些活化的血小板与血浆中的自身抗体结合后，激活了细胞膜中的某些能活化血小板纤维蛋白的原受体的活性物质，促使血小板与纤维蛋白原聚集成团。这两种原因在表象上都表现为血小板的体积增大。目前血液分析仪多采用电阻抗法为原理进行血细胞分类和计数，血细胞为相对非导电性质，悬浮在电解质溶液中的颗粒在通过计数小孔时可引起电阻的变化，从而对血细胞进行计数和体积测定，可见它只是以细胞体积大小来进行测定。由于EDTA-K2可引起血小板的聚集或发生卫星现象，分析仪不能识别凝集的血小板，导致血小板计数偏低，随着这一标本存放时间的延长，所检测出的血小板计数可能会更低。当血小板聚集成堆与白细胞体积接近时，可被分析仪当作白细胞进行计数，这就造成了血小板假性减少和和白细胞假性增多。如果上述误差未被及早识别，可能会给临床工作带来很大的困扰，如延误手术、增加不必要的辅助检查、增加患者的痛苦与经济负担等。EDTA-PTCP可见于正常人，但多数情况下伴某些疾病，如癌症、自身免疫性疾病、肺心病、肝病及一些原因不明的疾病。虽然发生率不高，但应加以重视，对于血小板减少而无出血症状的患者，一定要用不同方法进行复查，以防误诊。对于诊断为EDTA-PTAP的患者要告知以后查血常规时不要使用EDTA盐抗凝，以免造成不必要的检查和治疗。

4参考文献

[1]徐志明，祁慧，李丰平乙二胺四乙酸二钾导致血小板假性减少分析[Ｊ].检验医学与临床，2008，5（9）：539-540

[２]仲腊春；血小板手工计数及血片镜检在血小板分析中的重要性[Ｊ]；国际检验医学杂志；2010年02期