补肾活血方治疗原发性骨质疏松症的实验研究

补肾活血方治疗原发性骨质疏松症的实验研究

李学朋1孟照明2孟兆亮2

李学朋1孟照明2孟兆亮2

(1泰安市中医医院山东泰安271000)

(2新泰孟氏骨科研究所山东新泰271224)

【摘要】试通过对去卵巢大鼠不同时期骨质疏松相关指标的检测,为补肾活血方治疗骨质疏松症提供实验依据"将雌性大鼠90只随机分为6组(假手术组、预防组、模型组、大剂量组、小剂量组、雌二醇组),分别于造模后和3、6个月检测体重、子宫重量、血清钙磷及碱性磷酸酶、骨钙磷含量、骨密度，并进行统计学分析。结果显示模型组体重明显高于正常对照组,子宫重量明显低于正常对照组,模型组骨钙磷含量、骨密度明显低于正常对照组,表明补肾活血方对骨质疏松有明显预防治疗作用。

【关键词】骨质疏松症中医药疗法补肾壮骨药效学骨钙骨磷骨密度实验研究

【中图分类号】R242【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2012）06-0067-02

骨质疏松症是目前随着人口老龄化而增长并且逐渐危及到人们健康的一种疾病。为此,我们通过建立动物实验模型,对去卵巢大鼠不同时期骨质疏松相关指标进行检测,以期探讨补肾活血方对骨质疏松症的治疗预防作用。

1材料和方法

1.1药品与仪器①苯甲酸雌二醇注射液:上海第九制药厂生产,批号110501。②中药补肾活血方:由孟氏骨科研究所自拟方。③戊巴比妥:上海试剂厂生产,批号990301。④青霉素:山东鲁抗制药厂生产,批号110514。⑤链霉素:山东鲁抗制药厂生产,批号110514。⑥Ca﹑P及碱性磷酸酶检测试剂盒:购自东欧生物有限公司(批号11052801)和北京中山生物有限公司(批号110321)。⑦AA2670型原子吸收分光光度计:日本岛津。⑧日立200型紫外可见分光光度计:日本日立。722分光光度计,上海医疗器械厂生产。TN2100B型扭力天平,上海第二天平仪器厂生产。

1.2动物分组及实验方法雌性大鼠90只,体重238.8±28.6g,由山东医科大学实验动物中心提供,随机分为6组,用戊巴比妥(40mg/kg)麻醉后,无菌条件下从腰椎两旁切口进入腰腹背侧,完整摘除卵巢后,仔细止血,逐层缝合,作为切除卵巢组,即模型组。其余10只同法进入腹腔后,切除一段小肠系膜,止血缝合,作为假手术组。手术后常规双抗治疗3天,其中一组为补肾活血方预防组,按514mg/kg体重灌胃给药,12周后将OVX组成活大鼠随机分为4组。补肾活血方大剂量组2570mg/kg,小剂量组514mg/kg体重灌胃给药,每天1次,模型组雌二醇4mg/kg腹腔注射,每周2次,其余每天等量蒸馏水灌胃1次。各组大鼠分笼饲养,提取标准大鼠饮料喂养,自由饮用自来水。

1.3观察指标①组织学观察:12周后,将预防组和模型组各10只动物,颈静脉采血后处死大鼠。其余动物颈静脉采血后分组进行实验。24周后,动物处理同上"处死大鼠后,分离左右两侧股骨,左侧股骨置-20度冰箱保存,右侧股骨10%福尔巴林中固定,脱钙!常规脱水!浸蜡,包埋5um厚骨组织切片,HE染色,光镜观察。②骨钙、磷元素的含量测定:将上述灰化后的样品先用浓HNO31ml溶解后加水3ml,转移置100ml容量瓶中加三重蒸馏水定容,即得样品溶液。以EDTA终合滴定法(钙指标剂)测定钙,以磷钼酸法测定磷。③血钙、血磷及碱性磷酸酶的含量测定:大鼠采血后,分离血清,采用MTB比色法测定上述指标,方法按照试剂盒操作。

1.4数据处理实验数据用均数±标准差表示,组间差异比较采用t检验。

2结果

2.1补肾活血方对大鼠体重的影响如表1、2所示,实验3个月时补肾活血方预防组大鼠体重增长率与假手术组比较未见明显差异(P>0.05),预防组体重增长率高于假手术组低于模型组,与模型组比较体重明显低于模型组(P<0.05)。实验6个月时,补肾活血方大!小剂量组体重增长率明显低于模型组(P<0.05),补肾活血方大剂量组大鼠体重增长率与雌二醇组比较未见明显差异(P>0.05),模型组体重增长率与假手术组比较差异(P<0.01)。

表1实验前及实验三个月后大鼠体重情况（x-±S）

表2实验前及实验六个月后大鼠体重情况（x-±S）

2.2补肾活血方对大鼠子宫重量的影响如表3、4所示,实验3个月时补肾活血方实验3个月时预防组大鼠子宫重量明显低于假手术组(P<0.01)高于模型组(P<0.05)。实验6个月时,补肾活血方大、小剂量组及雌二醇组大鼠子宫重量明显低于假手术组(P<0.01),明显高于模型组(P<0.05)。均有显著性差异。

2.3补肾活血方对大鼠血清钙、磷、碱性磷酸酶的影响见表5、6。

2.4补肾活血方对大鼠骨钙、骨磷的影响如表7、8所示,实验3个月时,补肾活血方预防组骨钙含量明显高于模型组(P<0.01),接近假手术组。骨磷的含量明显低于模型组(P<0.05)。实验6个月时,补肾活血方大小剂量组及雌二醇组骨钙含量明显高于模型组(P<0.01)。

2.5补肾活血方对大鼠骨组织的形态学改变如表9所示,①正常对照组:骨组织结构正常,皮质形态及密度正常,骨小梁数量及密度均未见明显异常(附图A、B)。②模型组:皮质变薄,密度变低,骨小梁变窄!数量明显变少(附图C、D)。③补肾活血方大、小剂量组:骨皮质轻度变薄,密度未见明显降低,骨小梁轻度变窄,数量略有减少,但明显轻于模型组。④雌二醇组:骨皮质未见明显变薄,密度未见明显降低,骨小梁轻度变窄,数量略有减少,与补肾活血方大!小剂量组的改变基本接近。补肾活血方大、小剂量组与模型组比较股骨皮质的厚度!皮质的面积及髓腔的面积差异明显(P<0.05),有显著性意义。

表9补肾活血方对股骨皮质厚度、皮质面积、髓腔面积的影响（x-±S）

*与模型组比较P<0.05。

3讨论

补肾活血方对去卵巢大鼠体重增长有一定的抑制作用,与模型组比较体重增长率明显低于去卵巢组,预防组作用尤为明显;对去卵巢大鼠子宫重量的降低有一定的抑制作用,与模型组比较子宫重量明显增高,预防组也有相同的作用;对去卵巢大鼠血清钙!磷及碱性磷酸酶有一定的影响;对去卵巢大鼠骨钙!骨磷的含量作用明显,骨钙含量明显高于模型组,均有非常显著的意义,骨磷有升高的趋势但无显著性;对大鼠骨组织的形态学有明显影响,与模型组比较骨密度增高,骨皮质厚度及面积的差别有显著性髓腔面积小于模型组,差别有显著性,预防组也有相同的作用。

综合历来的研究,西医认为,绝经后骨质疏松的发生多因内分泌功能紊乱,垂体-肾上腺轴功能亢进,血清皮质醇分泌增加,雌激素缺乏,导致骨代谢平衡失调所致[1]。中医认为骨质疏松归属于骨痿范畴。认为骨质疏松的病因病机主要是肾亏脾虚[2]。其中肾亏是本病的主要病机。肾为先天之本，肾主骨生髓，骨的生长发育强劲与衰弱与肾精的盛衰有关。脾为后天之本,脾为生化之源，肾精依赖脾精的补充，若脾虚,脾不运化,脾精不足则肾精乏源,骨骼失养终致骨质疏松。因此,补脾强肾是治疗骨质疏松的治则。

现已有大量研究证实,补肾中药可通过其雌激素替代作用对垂体肾上腺功能[1],对骨组织中雌激素受体及骨保护素进行干预[3],从而起到防治绝经后骨质疏松发生的作用。我们正是在中西医理论研究的指导下,结合动物实验及临床实践,以滋补肾阴!温补肾阳!强筋壮骨为治疗原则,佐以益气健脾、活血通络的药物,采用中药补肾活血方进行临床治疗,经过十几年的临床应用,并在应用中不断改进和完善,取得了较好的疗效。

由此可见,补肾活血方对于骨质疏松症有明显的预防作用及显著的治疗作用,是一种具有广泛开发前景的药物,为中医中药治疗骨质疏松症开辟了一条新思路。

参考文献

[1]林燕萍,周瑞祥,冯建华,等.健骨颗粒对骨质疏松模型大鼠垂体-肾上腺轴的影响〔J〕中医骨伤,2009,17(1):19.

[2]张波,刘向前,姚共和.原发性骨质疏松症肾虚髓亏证与骨密度相关性分析〔J〕中医正骨,2009,16(10):9.

[3]杨召,杨华,姚振强,等.补肾中药对去卵巢大鼠骨组织ER.OPG表达的促进作用〔J〕.中医正骨,2010,16(3):3.