红花对大鼠口腔粘膜下纤维性变的作用及机制*

红花对大鼠口腔粘膜下纤维性变的作用及机制*

郑钰1谢志达2何斌3伏辉通讯作者

(1.长沙医学院2015级本科口腔医学1班湖南长沙410219)

(2.长沙医学院基础医学院人体解剖学教研室湖南长沙410219)

基金项目：长沙医学院大学生研究性学习和创新性实验资助项目（长医教【2017】18号）

通讯作者简介：伏辉，男，(1980-)，实验师，研究方向：临床应用解剖学研究。

作者简介：郑钰，女，(1995-),长沙医学院口腔学院2015级本科在读—。

【摘要】：目的探讨红花对大鼠口腔粘膜下纤维性变（OSF）的治疗作用及对颊黏膜转化生长因子（TGF-β1）表达的影响。方法取32只大鼠分为4组（正常组，对照组，低剂量组，高剂量组），每组8只。除正常组以外其他三组均在槟榔提取液（ANE）刺激下形成OSF模型，观察不同浓度红花注射液的治疗效果。检测TGF-β1的相对灰度值。结果红花可有效缓解OSF症状。OSF大鼠颊黏膜TGF-β1相对灰度值较正常组有明显差异（P<0.01）；经红花治疗后，高、低剂量组中TGF-β1有明显降低，尤其是高剂量组，低于模型对照组（P<0.05）。结论红花注射液可降低OSF大鼠颊黏膜中TGF-β1的表达，这可能是红花治疗OSF的机理之一。

【关键词】：红花大鼠OSFTGF-β1

OSF为癌前状态，病因不明，主要表现是张口受限[1]。传统中医学认为，OSF为血瘀所致，而红花具有活血化瘀的作用，因此被运用于组织纤维化治疗[2]，但是红花治疗OSF的现代医学机制尚未被明确阐明。本实验通过对OSF大鼠注射红花注射液，观察红花对OSF的治疗效果和血清中TGF-β1的含量，探索红花对OSF的治疗机制。

[].材料和方法

1.1实验动物32只健康雌性SD大鼠，体重（200±20）g，长沙医学院实验动物中心提供。

1.2实验药物干槟榔粉2kg，加入10%氨水1.5L、乙醚6L，充分混合后4℃下静置24h。过滤后水浴去除氨水和乙醚，60℃烤干成粉，将粉末制成10mg/ml（ANE）。红花500g

1.3试剂与设备兔抗TGF-β1，羊抗IgG购自武汉博士德生物工程有限公司；Olympus显微镜，南京贝登生物科技有限公司。

1.4OSF模型制备方法取24只SD大鼠，乙醚麻醉，在双侧颊黏膜注入ANE0.4ml，并在其上涂布ANE，持续30S，禁食禁饮2h，两天一次。持续12周，如口腔黏膜发白发硬，张口受限，则造模成功。

1.5给药方法将24只OSF大鼠分为对照组、低剂量组、高剂量组。分别按照0.625g、2.5g生药·kg-1给低高剂量组注射红花注射液，对照组不做干预持续6周。

1.6组织制备将大鼠麻醉，取颊粘膜用4%多聚甲醛磷酸缓冲液浸泡2h后放入30%蔗糖溶液中浸泡，取出做冷冻切片。先以室温3%H2O2去离子水湿盒孵育10min，再以3%羊血清封闭30min，加入兔抗TGF-β1抗体4℃过夜。滴加生物素标记的羊抗IgG1h，取出后PBS冲洗，进行ABC染色和DAB显色。脱水封片。

1.7切片分析使用Motic彩色分析系统分析TGF-β1免疫组化染色结果，检测黏膜上皮免疫阳性细胞的平均灰度值和背灰度值，求出平均灰度值。

1.8统计学处理所有数据均以x±s表示，采用SPSS12.0处理，组间比较用t检验。

2.实验结果

正常组与与对照组，大鼠颊黏膜中TGF-β1的相对灰度差异明显，具有统计学意义（p<0.05）,高、低剂量组与对照组相比，差异具有统计学意义（p<0.05）。高剂量组与低剂量组对比有统计学意义（p<0.05）见表1

3.讨论

OSF为癌前状态，患者口腔黏膜变白，张口受限。主要病理变化为结缔组织发生纤维性变，胶原纤维堆积[2]。祖国医学认为[3]，OSF主要是湿热邪毒淤积局部，引起局部气血不畅，日久气滞血瘀而成。而红花具有活血化瘀、抗炎、抗血栓等作用，被运用于组织纤维化治疗[4]。现代医学认为[5]，OSF的病理变化结缔组织纤维化与细胞因子密切相关，细胞因子作为重要介质能调节成纤维细胞功能，从而形成大量的胶原纤维，最终导致OSF。其中以TGF-β1与OSF最为密切[6]。

本实验以大鼠为实验对象，重要研究不同浓度红花注射液对OSF大鼠颊黏膜TGF-β1表达的影响。本次实验结果显示，OSF大鼠颊黏膜TGF-β1相对灰度值较正常组显著升高，有显著差异（p<0.01），说明了TGF-β1参与了OSF的发生、发展。在对大鼠用红花进行治疗之后，高剂量组和模型组对照颊黏膜中TGF-β1相对灰度值明显降低（p<0.05），低剂量组相对于模型组TGF-β1相对灰度值有所降低，但无统计学意义（p>0.05）。提示红花对OSF有一定的防治效果。

综上所述，红花可以有效干扰OSF大鼠颊黏膜TGF-β1的表达，减缓纤维母细胞的繁殖速度，减少胶原和纤维粘连蛋白的合成，从而减少胶原纤维的堆积，这可能是其抗纤维性变的机制之一。

参考文献

[1]于世凤.口腔组织病理学[M].北京:人民卫生出版社,2012.233.

[2]谭劲,周小青.口腔黏膜下纤维化中西医研究进展[J]．世界最新医学信息文摘.2016.16(14):31-33.

[3]吴颖芳，彭解英．中西医结合治疗OSF的疗效[J].中南大学学报．2010,3(54):358-363.

[4]汪宏雷.红花的药理作用[J].中医药临床杂志．2014，16(5):519-520.

[5]刘德裕,翦新春,徐普,等.OSF中碱性成纤维细胞生长因子和CD34的表达及意义[J].中国现代医学杂志．2015,25(29):7-11.

[6]胡谋波,郑雪嘉,梁娟等.中药红花抗纤维化机制研究进展[J].湖北民族学院学报.2016,33[1]:66-67.

[7]李霞.细胞因子与口腔粘膜下纤维性变[J].国外医学口腔医学分册.2002,29(2):92-94.