转化生长因子β1（TGF-β1）在梗阻性黄疸大鼠

转化生长因子β1（TGF-β1）在梗阻性黄疸大鼠

韩云秦伟王江李晓峰杨立平

韩云秦伟王江李晓峰杨立平

（青海大学附属医院腹部腔镜外科青海西宁810001)

【摘要】目的：探讨TGF-β1在梗阻性黄疸大鼠胆道外引流术后胆总管中的表达。方法：监测对照组(假手术组)、梗阻性黄疸大鼠术后3天、6天、9天胆道外引流2天后共计3个时问点取大鼠梗阻段胆管转化生长因子β1在胆道损伤引流后不同时期的表达强度。结果：胆总管完全梗阻的情况下，胆道外引流进行的越早胆管壁的TGF—β1表达量下降的越快。结论：胆道损伤梗阻后，如不及时行手术外引流干预，胆道损伤程度会逐渐加重，可能导致胆道不可逆损害。

【关键词】TGF-β1梗阻性黄疸胆道外引流

【中图分类号】R329.218【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2014）01-0033-02

【Abstract】Objective：ExplorethebiliaryobstructivejaundiceinratsafterbileductdrainageintheexpressionTGF-β1.Methods：Monitoringthecontrolgroup(shamgroup),postoperativeobstructivejaundicerats3days,6days,9daystotalexternalbiliarydrainagefor2daystotakethreepointswhenaskedratbileductobstructionsegmentoftransforminggrowthfactorβ1inthedrainageofbileductinjurytheexpressionofdifferentperiods.Results：Completeobstructionofthecommonbileductcase,TGF-β1expressionofbiliarydrainageperformedsoonerthefasterdeclineinthebileductwall.Conclusions：Aftertheobstructionofbileductinjury,ifnottimelysurgicaldrainagelineoutsideintervention,bileductinjurywillgraduallyincrease,mayleadtoirreversibledamagetothebiliarytract.

【Keywords】Transforminggrowthfactorβ1ObstructivejaundiceBiliarydrainage

TGF-β1是具有多种生物学功能的细胞因子，是目前已知与瘢痕形成关系最密切、最具代表性的生长因子[1]。近年来随着对TGF-β1研究的逐步深入，胆道损伤组织缺血缺氧可造成TGF-β1的高表达。本实验通过建立大鼠梗阻性黄疸模型以及黄疸后胆道外引流，动态观察TGF-β1在梗阻性黄疸行胆道外引流后胆管壁中的表达，为术前治疗外科黄疸提供理论依据，并指导外科黄疸患者在手术前减黄能够达到做手术的最佳时机与条件。

一、材料与方法

1材料选择健康雄性SD大白鼠90只，体重180-220g，由青海省地方病预防控制所提供。

2方法

2.1动物模型的制作

选取90只健康雄性SD大鼠随机分成6组，每组各15只（对照组，术后3d、6d、9d，实验组各组行胆道外引流2天）。实验组及对照组均术前晚禁饮食，大鼠均采用苯巴比妥钠50mg/kg腹腔注射麻醉后，固定于手术台上备皮，腹部碘伏消毒，无菌条件下经剑突下正中小切口2cm进腹，提出十二指肠寻及胆总管，在近十二指肠处游离一段长约1cm总管。实验组远端胆总管结扎并切断，近端胆总管插管后结扎固定管道，插管后将胆道引流管引出体外并完全夹闭。对照组游离出胆总管，但不予切断。两组均3-0号丝线间断缝合关闭腹腔。术后均常规喂养。

2.2标本的采集及胆总管的免疫组化检测TGF-β1。

对照组于术后3d，6d，9d，实验组于胆总管夹闭术后3d，6d，9d各组行胆道外引流2天后，采用脱颈法分别处死实验动物。剪取近端肝外扩张胆总管组织1cm,包埋制成蜡块,沿胆总管横切面切片,制成厚度5μm的连续切片,分别行HE染色和免疫组织化学染色。采用Envision法,第一抗体:TGF-β1多克隆抗体购于Abcam公司(美国),第二抗体:Chemmateenvision购于Genetech公司。染色步骤：石蜡切片脱蜡和水化后，用PBS（ph7.4）冲洗三次（3×3′）。高温高压抗原修复。甩去PBS，每张切片加一滴或50ul一抗，4℃过夜。PBS冲洗3×5′。甩去PBS液，每张切片加一滴或50ul二抗，室温下孵育30min-1hour。PBS冲洗3×3′。甩去PBS液，每张切片加一滴或50ulDAB显色液，3-5min′。甩去PBS液，显微镜下观察3-10min，阳性为棕色或红色。冲洗，苏木素复染，脱水，透明，封片，观察。TGF-β1为细胞质着色，染色阳性以细胞质呈棕色颗粒状染色为标准，且着色明显高于背景或背景不着色而细胞着色者为阳性细胞染色。按切片中细胞染色强度记分:0分为细胞无染色，1分为染色呈浅黄色，2分为棕黄色，3分为褐色；再按切片中显色细胞所占比例记分:每片随机观察5个具有代表性的高倍视野，计数500个细胞中染色阳性细胞数，0分为无阳性染色细胞，1分为染色细胞<30%，2分为30%-70%，3分为>70%。每张切片细胞染色积分=强度记分×比例记分。按积分高低分为4级:0分为阴性(-)，大于1分为阳性，其中以1-3分为弱阳性(+)，4-6分为阳性(++)，7-9分为强阳性(+++)。

3统计学处理

应用SPSS13.0统计软件处理数据，计量资料以mean±SD表示。采用单因素方差分析、χ2检验、直线相关回归分析，以P<0.05为差异有统计学意义，P<0.01为差异有显著性。

二、结果

1一般状态

胆总管结扎24h后大鼠尿液颜色开始变黄，2-3日时全身皮毛开始转黄，进食量逐渐减少。经胆道引流后尿液及皮毛颜色开始转浅。实验过程中实验组内共有6只意外死亡，对照组无死亡。

2免疫组化观察阻塞不同时间并引流后的胆道组织内TGF-β1的表达光度

镜下可见实验组大鼠的胆道有大量的阳性染色细胞，主要为中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞等炎细胞，并有极少量的成纤维细胞阳性染色，而某些阳性染色炎细胞周围基质中亦呈有意义的阳性染色，阳性细胞主要分布于黏膜层、黏膜下层、胆管腺体及肉芽组织中，多呈密集分布，纤维层中亦有散在分布。定量测定的TGF-β1阳性区域的光度及胆管壁炎症水肿程度均数的相对值，见下表。各组TGF-β1光度及水肿程度均数的相对值比较均有显著性差异(P<0.05)。各组间TGF-β1光度与对照组比较有显著性差异(P<0.05)。

三、讨论

梗阻性黄疸是肝、胆、胰外科疾病中较常见的一种临床表现,又称为外科黄疸，梗黄病人外科治疗并发症发生率和死亡率较高,据报道分别为40%-60%、15%-25%；目前术前减黄多采用PTCD及ENBD，该法一定程度上减轻了黄疸的程度，但容易发生电解质紊乱及酸碱失衡，且上述方法对个别肝细胞损害严重的黄疸病人减黄效果较差。胆管损伤是胆道外科最为严重的并发症之一。因其特有的解剖位置和形态结构，故胆管损伤处理后常有较多并发症[2]。目前对于胆管损伤的处理争议颇多，特别是针对无胆漏、术后出现黄疸才发现的梗阻性胆管损伤[3.4]。鉴于此，我们测定不同时期胆管壁TGF-β1表达光度来推断出胆管壁的病理变化过程以探讨胆管损伤后的最佳修复时机。本实验研究显示：随着时间的推移，TGF-β1在梗阻性黄疸大鼠胆总管中的表达呈逐渐增加趋势，而对照组TGF-β1在梗阻性黄疸大鼠胆总管中的表达无明显改变。从上述胆道壁TGF-β1的表达量的变化趋势可以推断出：梗阻性黄疸如果产生不及时手术干预外引流，胆道水肿程度逐渐加重，在加上胆道壁的瘢痕增生，到后期可能产生不可逆的损害。因此当我们对梗阻性黄疸诊断明确后，越早进行手术干预，效果越好。总之，胆道在损伤后的炎症及瘢痕增生对胆道壁的影响对临床上手术进行干预的时机选择有重要的意义[5]。

参考文献

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