大鼠大网膜肝片移植的实验研究

大鼠大网膜肝片移植的实验研究

许桂祥1刘智伦1周世龙1徐硕1王琳1许准2

许桂祥1刘智伦1周世龙1徐硕1王琳1许准2薛冰川2张桂欣1(1青岛阜外心血管病医院普外科山东青岛266034；2山西医科大学第三医院山西太原030053)

【摘要】目的研究自体肝片大网膜移植后，肝片生长情况，为肝脏外科临床及实验研究提供理论依据。方法Wistar大鼠20只,随机分为4组,5只大鼠均左外肝叶切除自体肝片大网膜移植，分别于术后3、7、14、21d分批处死动物。肉眼观察移植物颜色、大小及粘连情况，HE法染色,常规光镜观察移植肝片在不同时期的组织学特点。结果自体肝片移植术后3d即有血管从移植肝片周围大网膜向肝片内伸展，伴肝细胞凝固性坏死，随时间推移肝片进一步坏死至消失。结论自体肝片大网膜内移植是简便的肝移植方法，但其存活性有待进一步深入研究。

【关键词】肝脏自体移植大鼠

20世纪30年代Cameron和Oakley已开始了肝碎片在自体大网膜移植的基础实验。科学家们试图异位移植肝碎片，但大多数病例肝组织在数日或数周内即退化或消失，笔者查阅相关文献，不曾找到相关实验资料和文献报道。因此，本实验是一探索性实验。以大鼠为研究对象进行自体肝片大网膜移植,在不同时间观察移植肝片的存活情况。

1材料和方法

雌性Wistar大鼠20只,体重200～250g,购自青岛大学医学院动物实验中心。随机分为移植3d组(A组)、移植1周组(B组)、移植2周组(C组)、移植3周组(D组,以上4组均n=5)。

移植动物模型制作:在以0.3ml/100g的10%水合氯醛腹腔注射麻醉下,取上腹正中切口,切下鼠肝左外叶浸于含肝素钠25IU/ml的4度乳酸林格液10ml中,沿肝脏表面切制成厚为0.3cm、边长为0.5cm的长方体形无被膜的肝片4片,生理盐水冲洗干净后移植于大网膜2层间,固定1针，用未移植肝片的大网膜继续包埋移植的肝片，适当间断缝合固定，使肝片和大网膜有效压容。移植后单独隔离喂养3d,每日肌注青霉素8万单位/只，然后群居饲养。检测指标:于术后3d、1、2、3周(每组只数n=5)分批处死动物,进行下列检测:①肉眼观察移植物颜色、大小及粘连情况。②HE法染色,常规光镜观察移植肝片在不同时期的组织学特点。

2结果

大鼠大网膜移植肝片大体形态学观察结果见表1。

表1肝片移植大鼠大网膜大体形态学观察

A组粘连的1例为网膜与肝脏粘连，1例为网膜与腹壁粘连，2例为网膜与肠粘连。B组粘连的2例中全部为网膜与肠粘连。常规光镜检查：A组结构散乱，大片坏死肝细胞，与大网膜交接处散在新生毛细血管，肝片中央出现坏死区，肝片周边出现少量粒细胞、巨噬细胞及其他细胞。B组：肝细胞全部坏死，中心坏死区进一步扩大，大范围出现边缘有迁移的粒细胞、巨噬细胞及其他细胞。C组：无存活的肝细胞，肝细胞凝固性坏死。

3附图

4讨论

大网膜具有丰富的血管网和再血管化功能,当其与其它组织接触后6小时,即开始有毛细血管生长,并与其它组织发生纤维素粘连,24小时内两者之间的粘连逐渐致密,至48～72小时,可见肉芽组织生长[1]。实验预期结果应是随着时间的推移，“肝片血管化”进程日臻完善，即大网膜周围血管长入移植的肝片的密度变大，而此实验出现的事实是肝片不能存活，其原因有待进一步探讨。

笔者分析原因可能有：

一、麻醉问题，水合氯醛在肝脏中代谢，有肝毒性，腹腔注射麻醉，移植的肝片首当其冲，而且其解毒功能相当脆弱，10%的水合氯醛可能直接使移植的肝片致死；

二、在切取移植肝片过程中，缺血冷灌注致使肝细胞受损，从结扎肝左外叶根部到置于含肝素钠25IU/ml的4度乳酸林格液10ml中,沿肝脏表面切制成厚为0.3cm、边长为0.5cm的长方体形无被膜的肝片4片,再到生理盐水冲洗干净后移植于大网膜2层间,固定1针，整个过程耗时约6～8分钟，势必产生大量的氧自由基等损伤肝细胞的因子，即移植的肝细胞是受损伤的肝细胞；

三、固定一针的问题，幕丝线贯穿移植肝片中央，使大网膜与其充分压容，一方面影响包埋肝片的大网膜血管，另一方面是异物，有可能引起免疫排斥反应，严重的炎症反应会使肝片存活环境进一步恶化；

四、移植土壤的问题，大网膜富有大量巨噬细胞，誉有“游走警察”之称，不管从C、D两组粘连例数，还是从开腹肉眼观察到大网膜及腹腔异常光滑来看，大网膜的自净能力确实很强，连固定肝片的幕丝线都消失，大网膜对移植的肝片有无消化吞噬作用，是一个问题。

五、移植肝片在移植到大网膜后，靠组织液存活，与大网膜交界处的肝细胞能存活，肝片的中央因缺乏足够营养而坏死，这与从常规光镜检查下A组结构散乱，大片坏死肝细胞，与大网膜交接处散在新生毛细血管，肝片中央出现奶酪样坏死区，肝片周边出现少量粒细胞、巨噬细胞及其他细胞，即肝细胞缺血凝固性坏死，大致是相吻合的；也就是说移植的肝片太厚，周围大网膜血管长入肝片过程相对滞后，本实验肝片厚度为0.3mm，而即使肝片两面血管同时相对生长，中央部分肝细胞获得血液供应得等很长一段时间，而此时间段肝细胞已发生坏死；

六、移植的肝片分泌胆汁，导致胆汁性腹膜炎，尽管带蒂大网膜可以吸收少量胆汁[2]，但是蓄积量的胆汁对肝片的存活亦是挑战；

七、肝脏有门静脉和肝动脉两套血供，肝细胞是浸于富营养化的静脉血和富氧化的动脉血里发挥其应有的功能。肝细胞存生的环境要求很高，而大网膜显然满足不了其高要求，即肝细胞的高敏感性导致其死亡。

以上七点是笔者经过认真分析，并查阅相关资料得出来的，要证实得需要大量的实验论据。大网膜是腹膜形成的重要结构,内含大量的巨噬细胞,具有丰富的血管网及淋巴组织,易与其它组织粘连形成侧支循环。从常规光镜的观察结果来看，第五种原因占的比重似乎更大一些，大网膜与肝片表面粘连，交接处散在毛细血管，肝片中央缺乏足够营养与氧而发生凝固性坏死，大网膜的巨噬细胞等将坏死的组织清除，进而引发新一轮的炎症反应。三天组的大网膜与肝被膜、肠粘连，粘连比例占到80%，一周组，粘连比例下降至40%，而二、三周组无一例发生粘连，大网膜和腹腔异常光滑，足见大网膜的净化能力强大。

参考文献

[1]裴元民,曾庆旺,马秀霞.大网膜的临床应用进展[J].中原医刊,2000,27（5）：33-34.

[2]朱文钿,彭立基.带蒂大网膜在严重肝外伤中的作用[J].中国现代医学杂志，2000,10（10）:92-93.