乳腺癌分子病理诊断中检测ERCC2基因多态性的应用分析

乳腺癌分子病理诊断中检测ERCC2基因多态性的应用分析

吴海燕何雄斌胡玉林陈志军

湖南省郴州市第一人民医院423000

【摘要】目的：对乳腺癌分子病理诊断中检测ERCC2基因多态性的应用价值进行分析。方法：以50例乳腺癌患者以及50例无乳腺疾病健康对照组作为研究对象，对ERCC2基因多态性分布与乳腺癌易感性、以及ERCC2基因多态性分布与乳腺癌临床病理特征进行分析。结果：rs238416位点下，两组患者在GA基因型、GA＋AA基因型、以及A基因型的分布上具有显著差异（P＜0.05）。在rs238416位点下，p53蛋白阳性乳腺癌患者GA基因型携带频率显著低于阴性患者（P＜0.05）。结论：rs238416位点基因多态性分布与乳腺癌p53蛋白表达有相关性关系，可通过对ERCC2基因多态性进行检测的方式实现对乳腺癌的早期诊断。

【关键词】乳腺癌；ERCC2；基因多态性；病理诊断

abstract：objective：todetectERCC2genepolymorphisminthemolecularpathologicaldiagnosisofbreastcancerapplicationvalueareanalyzed.Methods：50casesofpatientswithbreastcancerand50casesofmammaryglanddiseasehealthycontrolgroupastheresearchobject，theERCC2genepolymorphismandbreastcancersusceptibilitydistribution，distributionandERCC2genepolymorphismandbreastcancerclinicalpathologicalfeatureswereanalyzed.Results：rs238416loci，thetwogroupsofpatientsintheGAgenotype，GA+AAgenotype，andAgenotypedistributionhadsignificantdifference（P<0.05）.Underrs238416loci，GAgenotypefrequencytocarrythep53proteinpositivebreastcancerpatientswassignificantlylowerthanthenegativepatients（P<0.05）.Conclusion：rs238416locigenepolymorphismdistributionhavecorrelationrelationshipwithp53proteinexpressionofbreastcancer，candetecttheERCC2genepolymorphismbythewayofearlydiagnosisofbreastcancer.

keywords：breastcancer；ERCC2；Geneticpolymorphism；Pathologicaldiagnosis

乳腺癌是我国发病率较高的恶性肿瘤之一，病死率较高，已严重威胁妇女生命安全。几年来，有大量报道[1-2]中均证实ERCC2基因在参与受损DNA核苷酸切除修复中的重要意义，并提示多个位点与乳腺癌易感性有密切关联性。为对乳腺癌分子病理诊断中检测ERCC2基因多态性的应用价值进行分析，本研究中以50例乳腺癌患者以及50例无乳腺疾病健康对照组作为研究对象，将ERCC2基因多态性检测结果对照报告如下：

1资料与方法

1.1一般资料

以我院住院部2015年3月~2015年12月期间收治50例乳腺癌患者以及50例无乳腺疾病健康对照组作为研究对象，分别设置为观察组、对照组。观察组患者均为女性，年龄范围28~60周岁，平均（46.3±2.8）岁；对照组均为女性，年龄范围25~60周岁，平均（45.1±2.1）岁。对比两组受检对象基本资料，未见显著差异（P＞0.05），有可比性。

1.2方法

抽取两组受检对象3.0ml抗凝血样本，根据试剂盒说明书提取外周血样基因组DNA，在-80℃条件下保存备用。筛选HapMap数据库中ERCC2基因型数据，以rs3916840、rs1799793、以及rs238416为分析位点。PCR扩增反应总体积大小为30.0ul，扩增条件为：在95℃条件下预变性反应5.0min，变性反应维持30.0s。rs3916840以及rs1799793在58℃条件下退火处理30.0s，rs238416在50℃条件下退火处理30.0s。然后在72℃条件下延伸20.0s，扩增至32个循环。维持72℃的反应条件延伸10.0min。相应产物应用内切酶进行酶切处理，产物用浓度2.0％琼脂糖凝胶电泳法进行鉴定。rs3916840基因经PCR扩增反应后基因型包括CC基因型、CT基因型、TT基因型、CT＋TT基因型、C基因型、以及T基因型；rs1799793经PCR扩增反应后基因型包括GG基因型、GA基因型、AA基因型、GA＋AA基因型、G基因型、以及A基因型；rs238416经PCR扩增反应后基因型包括GG基因型、GA基因型、AA基因型、GA＋AA基因型、G基因型、以及A基因型。

1.3观察指标

对ERCC2基因多态性分布与乳腺癌易感性、以及ERCC2基因多态性分布与乳腺癌临床病理特征进行分析。其中，ER、PR、以及p53均根据病理切片样本应用免疫组化法进行分析。阳性判断标准分别为：ER、PR根据Allred评分≥3且核阳性细胞数＞10％为判断标准；p53根据核阳性细胞数＞25％为判断标准。

1.4统计学分析

研究数据经Excel表格处理，录入SPSS统计学软件（版本号19.0）中进行分析，计数资料检验方法为x²，计量资料检验方法为t，当P值＜0.05时判定对比有统计学意义。

2结果

2.1ERCC2基因多态性分布与乳腺癌易感性分析

结合表1，两组受检对象在rs3916840以及rs1799793的基因多态性分布方面对比无显著差异（P＞0.05），不具有统计学意义；rs238416位点下，两组患者在GA基因型、GA＋AA基因型、以及A基因型的分布上具有显著差异（P＜0.05），具有统计学意义。

3讨论

本次研究结果显示：rs238416位点下，两组患者在GA基因型、GA＋AA基因型、以及A基因型的分布上具有显著差异（P＜0.05），具有统计学意义。提示该位点的多态性分布与乳腺癌的发生风险密切相关。当缺失杂合突变基因型GA和等位基因A时，乳腺癌患病风险显著升高，且GA作为杂合基因型，缺失该基因会导致rs238416位点内含子增强子的功能降低，影响mRNA转录水平[3]，导致DNA修复功能下降，乳腺癌患病风险增大。除此以外，从病理关系上来看，在rs238416位点下，以GG基因为参照，p53蛋白阳性乳腺癌患者GA基因型携带频率显著低于阴性患者（P＜0.05），具有统计学意义。提示：对于乳腺癌患者而言，在缺失ERCC2rs238416位点GA基因型时，p53蛋白阳性率升高，患者体内DNA损伤情况严重，缺乏主动修复能力，会导致病情的进一步发展与恶化，应引起重视。

综上分析：rs238416位点基因多态性分布与乳腺癌p53蛋白表达有相关性关系，可通过对ERCC2基因多态性进行检测的方式实现对乳腺癌的早期诊断。

参考文献：

[1]霍慧霞，柳晓义，姜丹丹等.乳腺癌与载脂蛋白B基因多态性关系[J].中华实验外科杂志，2012，29（5）：812-814.

[2]张萍，马飞，徐兵河等.微小RNA基因多态与乳腺癌易感性的关系[J].中华肿瘤杂志，2015，（7）：501-507.

[3]陈江华，赵建华，唐金海等.环磷酰胺代谢酶基因多态性与乳腺癌化疗反应相关性的探讨[J].中华肿瘤防治杂志，2012，19（10）：726-730.

[4]王涛，张永东，郭欢等.检测ERCC2基因多态性在乳腺癌分子病理诊断中的应用[J].临床与实验病理学杂志，2015，（3）：277-281.

[5]杨文涛.个体化诊治时代的乳腺癌病理诊断[J].中国癌症杂志，2012，22（7）：556-560.