熊胆粉在麝香通心滴丸抗动脉粥样硬化中的作用研究汤小兵

熊胆粉在麝香通心滴丸抗动脉粥样硬化中的作用研究汤小兵

汤小兵

益阳市南县茅草街镇中心卫生院药剂科湖南益阳413201

【摘要】目的：探讨并分析熊胆口服液和麝香通心滴丸对抗动脉粥样硬化中的作用和临床疗效，为研究熊胆粉在麝香通心滴丸抗动脉粥样硬化中的作用提供实验数据。方法：采用载体蛋白E基因敲除的小鼠60只，结合高脂饮食复制动脉粥样硬化动物模型（模型组），将模型组随机分为4组，分别灌胃给药熊胆粉、麝香通心滴丸、麝香通心滴丸去熊胆粉（拆方组）、生理盐水。另取15只C57BL/6小鼠作为正常对照组，灌胃给药相同剂量生理盐水。HE染色法观察对主动脉动脉粥样硬化斑块形成的干预作用。生化法测定血清中谷胱甘肽（GSH）含量、血清超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白（HDL）及低密度脂蛋白（LDL）水平。PCR检测主动脉miR-20、miR-21、miR-126、miR-155表达。结果：生理盐水组与正常对照组对比，模型组斑块损伤面积显著增加（Ｐ＜0.01），MDA升高（Ｐ＜0.01），SOD和GSH明显下降（Ｐ＜0.01）。血清TG、TC和LDL均显著升高（Ｐ＜0.01），HDL明显下降（Ｐ＜0.01），主动脉miR-21、miR-126、miR-155表达上升。miR-20表达下降。；与生理盐水组对比，熊胆粉组、麝香通心滴丸组和拆方组斑块损伤面积均显著减小（Ｐ＜0.05），麝香通心滴丸组作用优于拆方组；MDA明显下降（Ｐ＜0.01），SOD和GSH显著升高（Ｐ＜0.01）。血清TG、TC均显著下降（Ｐ＜0.01），HDL明显上升（Ｐ＜0.01），麝香通心滴丸组作用优于拆方组；熊胆粉组LDL水平显著下降（Ｐ＜0.01），熊胆粉组作用优于拆方组。主动脉miR-21、miR-126、miR-155表达下调结论：熊胆粉在麝香通心滴丸抗动脉粥样硬化作用中具有突出贡献，在调节炎症反应、氧化应激反应、降低LDL水平、调节microRNA表达方面起重要作用。

【关键词】熊胆粉；动脉粥样硬化；麝香通心滴丸；血脂

动脉粥样硬化（AS）是一种血管慢性炎症病变，是诱发冠心病、脑卒中和外周血管病的主要原因，其发病率和病死率在世界范围内都居于前列。脂质代谢障碍为动脉粥样硬化的病变基础，病变表现为从内膜开始积聚局部脂质和糖类，接着增生纤维组织及钙质沉着，累及动脉中层，逐渐出现蜕变和钙化。动脉内脂质积聚，使得动脉壁增厚变硬、血管狭窄，斑块内出血、斑块破裂，病变发展会阻塞动脉腔，动脉供应的组织或器官缺血或坏死[1]。麝香通心滴丸，具有芳香益气通脉、活血化瘀止痛，清热解毒等功效，在冠心病的治疗中有良好的临床应用基础[2，3]。本文旨在研究熊胆粉在麝香通心滴丸抗动脉硬化中的作用及机制，现将结果报道如下：

1资料与方法

1.1动物

载脂蛋白E基因敲除（ApoE-/一）小鼠60只，C57BL/6小鼠15只，8周龄（北京维通利华实验动物有限公司提供）。ApoE-/一小鼠采用高脂饲料喂养，C57BL/6采用常规饲料喂养。

1.2药物及试剂

麝香通心滴丸全方药用浸膏、麝香通心滴丸去熊胆粉浸膏、熊胆粉（内蒙古康恩贝药业有限公司）所有药物均溶于生理盐水，分别稀释为浓度20mg/kg、20mg/kg、0.22mg/kg。血脂检测试剂盒、谷胱甘肽（GSH）含量、血清超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）生化试剂盒，血脂检测试剂均购自上海铭博生物科技有限公司；总核酸分离试剂盒（美国MPBIO公司）逆转录试剂盒（德国QIAGEN公司）

1.3方法

60只8周龄ApoE-/一小鼠随机分为4组，每组15只：分别为麝香通心滴丸组（全方组）、拆方组、熊胆粉组及生理盐水组，均给予高脂饮食（含有15%猪油，2%胆固醇、0.05%胆酸）。C57BL/6小鼠15只为正常组，常规饲料喂养。模型组组分别灌胃给药麝香通心滴丸水溶液、拆方水溶液熊胆粉水溶液、生理盐水0.2mL，正常对照组灌胃给药0.2mL生理盐水。每天给药一次，连续8周。

1.4动物处理

连续给药８周后，各组小鼠眶周静脉丛采血后处死，并分离主动脉，将主动脉弓垂直向上，OCT包埋，干冰速冻后，再转入-80℃冰箱，然后制成5μｍ切片，HE染色，观察病例形态学变化。

1.5血清血脂水平检测

血清中谷胱甘肽（GSH）含量、血清超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白（HDL）及低密度脂蛋白（LDL）水平测定，均采用生化法，按照试剂盒说明书步骤要求操作。

1.3microRNA表达水平检测

用总核酸分离试剂盒严格按说明方法提取胸主动脉的总ＲＮＡ，再用PCR定量测试仪进行逆转录，得到cDNA，再采用RT-PCR法检测miR-20、miR-21、miR-126、miR-155的表达。

1.4统计学处理

对文中所得数据进行统计学处理，采用SPSS18.0统计软件进行分析，数据以均数±标准差（ｘ±ｓ）表示，多组比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD检验，P＜0.05为有统计学意义。

2结果

2.1HE染色结果

正常对照组C57BL/6小鼠主动脉内膜上观察不到斑块形成，生理盐水组与正常对照组相比，形成的斑块显著增多（Ｐ＜0.01）；麝香通心滴丸组、拆方组、熊胆粉组斑块均比生理盐水组形成的面积小，经过量化后的计算各组与生理盐水组斑块的相对面积，麝香通心滴丸组、拆方组、熊胆粉组分别为0.036、0.039、0.028（Ｐ＜0.01）。均具有统计学意义，其中熊胆粉组影响主动脉斑块影响作用最明显。

2.2小鼠血清中血脂水平情况

生理盐水组与正常对照组对比，血清TC、TG和LDL均显著升高（Ｐ＜0.01），HDL明显下降（Ｐ＜0.01）；与生理盐水组对比，血清TG水平显著下降（Ｐ＜0.01），熊胆粉组作用优于拆方组；麝香通心滴丸组作用优于拆方组；血清TC水平显著下降，HDL明显上升（Ｐ＜0.01），麝香通心滴丸组作用优于拆方组；LDL水平显著下降（Ｐ＜0.01），熊胆粉组作用优于拆方组。P＜0.05，具有统计学意义。见表1。

3.讨论

血脂异常与动脉粥样硬化密切相关，干预和调节脂质异常可有效预防动脉粥样硬化及其所致心、脑血管并发症的发生发展。动脉粥样硬化在中医上属于痰热型，使用调节脂质代谢、抗炎、抗氧化、保护血管内皮细胞等作用的中药[8，10]，对血脂异常具有良好的临床防治效果。麝香通心滴丸的主要成分包括君药麝香和蟾酥，臣药人参茎叶总皂苷和丹参、佐药牛黄和熊胆粉及使药冰片。研究表明麝香通心滴丸能显著稳定动脉粥样易损斑块。其中人工牛黄和熊胆为佐药，清心解毒、化痰开窍[9]。试验数据显示，熊胆粉在协助麝香同心滴丸调节血脂的过程中有明显的降血脂和抗凝效果，并且能够干预斑块的形成，稳定斑块，减少血管狭窄现象，对心肌细胞缺氧性损伤具有保护作用。microRNA与许多疾病的发病过程相关，包括心血管疾病。研究表明AS相关炎症和氧化应激过程反应中有多种microRNA的参与。miR-21通过Toll样受体４－核因子KB途径途径抑制由脂多糖诱导巨噬细胞的炎症反应；miR-126能够正向调节肥大细胞的增殖和细胞因子的释放。miR-155能特异性的表达在动脉粥样硬化斑块和巨噬细胞上，直接抑制BCL６的表达，在促进动脉粥样硬化中起重要作用。通过抑制转录因子AML-１的表达，随之导致巨噬细胞集落刺激因子受体的下调，从而抑制单核细胞的分化。熊胆粉组、麝香通心滴丸组和拆方组均能使miR-21、miR-126、miR-155的表达，说明其通过miR-21、miR-126、miR-155的表达调节AS相关炎症和氧化应激过程而达到抑制AS的作用。与生理盐水组对比，熊胆粉组、麝香通心滴丸组和拆方组miR-20表达均上升（Ｐ＜0.01），熊胆粉组上升作用高于拆方组，说明了熊胆在调节miR-20表达，对抗AS中起到了重要作用。血脂水平异常是导致动脉粥样硬化的重要原因，研究发现LDL-C水平与AS的发生呈正相关，LDL可以通过apoB100与细胞外基质相互作用沉积在动脉内膜下形成粥样硬化斑块。血浆HDL水平与动脉粥样样硬化性心血管疾病的风险成反比关系要抑制AS的发展就要升高血浆中LDL水平，降低LDL水平。

参考文献：

[1]罗俊，王淑珍.颈动脉粥样硬化与心血管疾病的关系[J].心血管病学进展，2011，3（32-2）：2

[2]王怡，牛子长，何斌，等.麝香通心滴丸对稳定动脉粥样硬化斑块的机制研究[J].中西医结合心脑血管病杂志，2011，9（9）：1083-1086

[3]张贵峰，赖永新.麝香通心滴丸治疗冠心病心绞痛气虚血瘀症的临床疗效[J].现代诊断与治疗，2015，26（5）：994-995

[4]李争，杜鸿瑶.颈动脉内膜中膜厚度相关因素的研究进展[J].中国动脉硬化杂志，2012，20（11）：1051-1056

[5]陶敏，赵文静，旺建伟.熊胆粉的药理作用及临床应用研究进展[J].中医药信息，2013，30（3）：153－155

[6]贾燕珺.小檗碱的抗动脉粥样硬化作用及其机制[J].中国动脉硬化杂志，2013，4（21）：364-368.

[7]蒋茯苓，于睿.几种常用中药抗动脉粥样硬化作用[J].辽宁中医药大学学报，2014，16（2）：149-151

[8]李明.中药降血脂作用机制的研究进展[J].实用心脑肺血管病杂志，2013，21（1）：4-5.

[9]熊敏琪，贾成林，崔金刚等.熊胆粉在麝香通心滴丸抗动脉粥样硬化中的作用机制研究.中国中西医结合杂志，2015，35（9）：1083-1089

[10]张鑫，王连志，苏显红.中药复方制剂治疗冠状动脉粥样硬化炎症的临床观察[J].中华中医药学刊，2012，29（12）：2684.