放置时间对免疫荧光干式定量法测定超敏CRP的影响

放置时间对免疫荧光干式定量法测定超敏CRP的影响

黎宇龙庭燕杨况甜

（广西柳州市工人医院检验科广西柳州545005）

【摘要】目的：观察放置时间对免疫荧光法测定超敏CRP的影响状况。方法：选取来我院200例确诊为各类感染性疾病患者的血标本，使用免疫荧光分析仪测定在加入血样本后的同一测试板在4个不同时间点超敏CRP的结果，比较3个不同放置时间测试组的超敏CRP检测结果与对照组之间的差异。结果：试验1、2组的CRP检测结果分别与对照组比较，差异均无统计学意义(P>0.05)；试验3组的CRP与对照组比较，差异显著(P<0.05)。结论：放置时间可对免疫荧光法测定超敏CRP造成一定的影响，这种影响会随着放置时间的延长，而逐渐显现，应按实验要求及时测定。

【关键词】放置时间；免疫荧光干式定量法；测定；超敏CRP

【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2018）09-0065-02

C反应蛋白（CRP）是机体受到病菌入侵或组织损伤等炎症性刺激时肝细胞合成的急性时相反应蛋白。因此，CRP的检测可用于临床对机体感染、组织伤害和炎性疾病的评价，也可为各种疾病的诊断、治疗和监控提供依据[1]。在日常的工作中会发现有部分标本的测定结果与实际情况不符，究其原因发现这些标本是由于工作量的原因未能将检测反应板按规定的时间及时放入仪器检测，而放置时间是否会对测定结果造成影响，就这一问题来做次实验，观察放置时间对免疫荧光法测定CRP的影响状况。

1.材料与方法

1.1标本

选取2017年7月至2017年8月间来我院住院经诊断为各类感染性疾病的患者200例作为研究对象，包括自身免疫性疾病，心力衰竭，肺炎，支气管炎，急性胰腺炎，尿路感染，手术，创伤患者，冠心病等疾病，要求标本无溶血，脂血，黄疸等现象。

1.2仪器与试剂

韩国BoditechMEDInc公司生产的i-CHROMAReader免疫荧光分析仪，韩国BodiTechMedIncorporatedC反应蛋白检测试剂盒。

1.3方法

每天收集符合要求的患者血标本，并按照实验要求进行测定并记录好数据，每天每个标本均重复测定4次，将加好检测混合样本的反应板按照标准操作要求室温放置3分钟测定为对照组，记录数据；再将检测好的反应板继续室温放置至5分钟测定为试验1组，记录数据；室温放置至10分钟测定为试验2组，记录数据；室温放置至30分钟测定为试验3组，记录数据。用i-CHROMAReader免疫荧光分析仪检测CRP的浓度，计算并比较实验各组与对照组的差异。以上所有操作均严格按照厂家提供的试剂盒说明书进行操做。

1.4统计学方法

使用SPSS11.0进行处理，C反应蛋白含量以均数±标准差表示，组间采用t检验，以P＜0.05为差异显著。

2.结果

同一测试板在不同的4个时间点测定结果之间的比较，如表1所示。试验1、2组的CRP检测结果分别与对照组比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）；试验3组的CRP与对照组比较，差异显著（P＜0.05）。

3.讨论

临床检测超敏CRP常用的方法有免疫散射比浊法，免疫透射比浊法，干式定量免疫荧光法等[2-3]。免疫散射比浊法与免疫透射比浊法均具有较好的准确性和重复性，比较适合用于大型全自动生化分析仪进行批量检测，但这两种方法也存在检测所需的血量要足够才能确保其准确性，检测需要一定的反应时间，只能局限在实验室内操作，不能随时随地检测诊断的急救需求。而免疫荧光法因具有用血量少，反应时间快速，操作简便，仪器小巧，可移动携带的特点使其运用于急诊的急救需求。尤其是将干式定量免疫荧光法检测超敏CRP应用在某些危急重病患者的救助上，缩短了检验结果的等待时间[4]。

然而对于需要做大量急救标本的实验室而言，标本排序的囤积，导致部分标本因等候而未能及时检测，使得结果的准确性不得而知。放置时间是否会影响免疫荧光法检测超敏CRP的结果？通过实验数据可以看出，试验1、2组的CRP检测结果分别与对照组比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）；试验3组的CRP与对照组比较，差异显著（P＜0.05）。C反应蛋白的测定值随着放置时间的延长而呈现下降的局势。分析其原因可以先从原理上分析，免疫荧光法测定超敏CRP的原理是将检测缓冲液与血液样本在检测瓶中混合，缓冲液中的CRP抗体和血液样本中的CRP抗原形成抗原抗体复合物，当混合样本加到反应板上经渗透作用扩散至硝化纤维基质的测试带上，测试带上的抗CRP抗体会捕获该复合物。因此，血液样本中含有的CRP越多，测试带上的复合物积聚得越多，信号就越大。荧光抗体的信号强度反应了CRP被捕获的数量，经过i-CHROMAReader免疫荧光分析仪色处理，就能够反应出血液样本中的CRP浓度。而在整个反应体系过程中，荧光强度会因外界物质的干扰，而导致荧光强度的不断减弱；此外，荧光能量的不断释放会随着放置时间的延长而逐渐减弱甚至消失，最终导致仪器接收到的荧光信号减弱，呈现出血液样本中的CRP结果也会逐渐降低的结果。

总之，放置时间过长可对免疫荧光法测定超敏CRP造成影响，因此为了确保实验室发送的数据准确可靠，检验科应加派人手，加装仪器数量或合理分流调配相关门急诊超敏CRP标本等方法解决标本多，仪器少，标本不能及时处理的问题。

【参考文献】

[1]张亚兰,王建利,王静利,等.免疫荧光法与免疫散射比浊法测定超敏C反应蛋白的相关性及其在感染中的重要意义[J].山西医药杂志,2015,44,20:2360-2361.

[2]刘建康,万敏才,李耀军.2种方法检测C-反应蛋白结果的比对分析[J].中国伤残医学2014,22(12):179-180.

[3]冯晖,赵进,马晶.3种C反应蛋白检测方法的比较[J].国际检验医学杂志,2014,35(11):1470-1470.

[4]梁丹荔.C反应蛋白方法学相关性分析[J].检验医学与临床,2013,10(2):214-215.