广州地区地贫携带人群基因突变类型分析

广州地区地贫携带人群基因突变类型分析

唐盈何聚莲卢航林佩萱吴伟雄

唐盈何聚莲卢航林佩萱吴伟雄

（广州市人口和计划生育技术服务指导所广东广州510410）

【摘要】目的：研究广州地区地贫携带人群地中海贫血基因突变类型和频率，指导地中海贫血的产前诊断。方法：通过检测育龄夫妇外周血平均红细胞体积、平均红细胞血红蛋白含量和血红蛋白电泳初步筛查地贫阳性人群，GAP-PCR和反向斑点膜杂交技术（Reversedotblot,RDB）进行α、β地中海贫血基因诊断。结果：1249例初筛地贫阳性者确诊为地贫携带者为1031例，其中α地贫700例，阳性率为7.80％；β地贫288例，阳性率为3.21％；α复合β地贫43例，阳性率为0.48％。结论：广州地区α、β地贫基因型分布符合广东省的基本特点，以--SEA和CD41-42基因型最常见，地中海贫血发生率较高，应加强育龄人群产前基因诊断和遗传咨询等工作，降低出生缺陷。

【关键词】地中海贫血基因型基因诊断

【中图分类号】R394【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2013）21-0393-02

地中海贫血是世界上最常见且发病率最高的单基因遗传病之一，我国长江以南的各地区是此病的高发区，尤以广东、广西、海南为甚。广州是广东政治、经济、文化交流中心，人口流动性大、遗传背景复杂导致地贫基因缺陷类型繁多，已成为当前影响出生人口素质的因素之一。因此，调查本地区地贫基因携带以及基因突变频率具有重要意义。本课题对2011年1月至2012年12月我所收集的地中海贫血阳性人群进行地中海贫血基因诊断，统计分析其基因类型及构成，总结如下：

1材料与方法

1.1研究对象：收集2011年1月至2012年12月广州地区育龄夫妇血液共8976份，经血液常规初筛阳性人群1249份，经地贫基因明确诊断的样本共计1031例，地贫总携带率为11.49％。

1.2方法：

1.2.1血细胞检测采用日本SYSMEXXS-1000i血液分析仪检测血常规，平均红细胞压积MCV<83fl和／或平均血红蛋白含量或MCH<27pg，为地贫初筛阳性指标。

1.2.2高效液相色谱分析（HPLC）采用美国BIORADVariantⅡ高效液相色谱仪进行血红蛋白电泳分析，HbA2<2.5％，怀疑为α地贫基因携带者，进行α地贫基因诊断；HbA2>3.5％或HbF＞2.3％，高度怀疑为β地贫基因携带者，进行β地贫基因诊断。

1.2.3地贫基因诊断采用深圳益生堂生物公司的检测试剂盒，用Gap-PCR（跨越断裂点的PCR技术）筛查中国人群已知的3种α-地贫常见缺失型突变:--SEA∕、-α3.7∕、-α4.2∕；用RDB-PCR筛查3种已知的α-地贫非缺失突变:αWS、αQS、αCS。采用RDB-PCR法检测β-地贫常见17种突变，即中国人群常见8个位点CD41-42(-TCTT)、IVS-2-654(C-T)、CD17(A-T)、-28(A-G)、CD26(G-A)、CD71-72(+A)、CD43(G-T)、-29(A-G)和9个少见位点突变CD14-15(+G)、CD27-28(+C)、-32(C-A)、-30(T-C)、IVS-1-1(G-T)、IVS-1-5(G-C)、CD31(-C)、起始密码子Int、CAP+40-43。

1.2.4统计学方法：数据经Excel2003分类处理后利用SPSS13.0统计软件进行分析。

2结果

2.1血液筛查结果广州市育龄夫妇血液共8976份，经血常规筛查疑似地贫人群1249例，经地贫基因明确诊断的共1031例，地贫总携带率为11.49％；其中α地贫700例，β地贫288例，α合并β地贫43例，筛查总阳性率为82.54％（1031/1249）。

2.2α地贫基因诊断结果检出α地中海贫血700例，基因突变频率为67.90％（700/1031），其中包括--SEA/αα缺失496例（70.86％），-α3.7/αα缺失106例（15.14％），-α4.2/αα56例（8.0％），-α3.7/--SEA9例（1.29％），-α4.2/--SEA2例（0.29％），-α3.7/-α4.21例（0.14％），-α3.7/-α3.73例（0.43％）；α点突变25例，其中ααQS/αα19例（2.71％），ααCS/αα4例（0.57％），ααWS/αα2例（0.29％）；α缺失复合点突变ααQS/--SEA2例（0.29％）。

2.3β地贫基因诊断结果288例β地贫中，共检出11种基因突变类型，其中以CD41-42基因类型最常见，CD41-42、IVS-2-654、-28、CD174种基因型最为常见，占β地贫91.32％。

表1广州地区育龄人群β及α复合β地贫基因类型及构成比

2.443例α/β复合杂合子地贫患者中以--SEA/αα/CD41-42基因型最多，占25.58％，发现1例少见的α双重杂合子--SEA/-α4.2复合-28Nβ地贫患者。各β及α复合β地贫基因型构成见表1。

3讨论

地中海贫血是一组严重威胁人类健康的常染色体隐形遗传病，它是由于珠蛋白基因突变，导致珠蛋白合成数量不足或缺失引起的溶血性贫血[1]。根据缺失或合成减少的珠蛋白链的种类不同，地中海贫血可分为α、β、γ、δ等不同类型，以α和β地贫最常见。α地贫主要分为缺失型和非缺失型，非缺失型α-地贫主要是由于珠蛋白基因的点突变或少数几个碱基的改变，中国人群中常见的有αCS、αQS和αWS三种，其基因诊断与β地贫诊断方法相似。

据统计，广东省人群中α和β地贫总的基因携带率高达11.07％[2]，其中α地贫杂合子的发生率为8.53％，β地贫携带者为2.54％。本研究中，对广州市8976例育龄人群进行血常规筛查，检出疑似地贫人群1249例，经地贫基因确诊共1031例，地贫总携带率为11.49％；其中α地贫700例，α-地贫携带率为7.80％，以标准型东南亚缺失型--SEA/αα杂合子为主，占70.86％，其次是静止型-α3.7/αα占15.14％；α点突变检出25例，占3.57％；缺失型和点突变HbH病共12例，占α-地中海贫血的1.71％。

目前,中国人群中已发现了30余种β珠蛋白基因点突变[3]，本次研究共发现11种β-地中海贫血基因突变类型，β地贫携带率为3.21％，略高于其他地区[4],说明β地贫基因异质性大，不同地域存在分布不同的差异;CD41-42、IVS-2-654、-28和CD17是本地区β-地中海贫血基因的主要类型，共占91.32％，与广东东莞报道[4]的分布情况一致。另外,检出少见β类型基因型CD14-15(+G)1例，CD14-15(+G)于1988年首次报道，其分子基础为读码框移位突变[5]。α复合β地贫43例，α/β地贫正常人群携带率为0.48％，其中--SEA/αα/CD41-42、--SEA/αα/IVS-2-654、-α3.7/αα/CD41-42基因型最多，占48.84％，本次调查发现1例α双重杂合子--SEA/-α4.2复合β杂合子-28N的地贫患者。

研究表明广州地区地中海贫血基因分布基本符合广东省地贫基因型分布特点,由于β地贫具有较高的基因异质性，不同地区及不同种族人群基因突变类型排序会有所不同。如果夫妻双方均为同型地贫基因携带者，其后代有1/4的几率为中间或中型地贫患儿[6]。而重症α地贫儿的4个α基因完全缺失，常为死胎或早产死亡。重症β地贫患儿虽出生时正常，但贫血会逐渐加重尚无有效的治疗方式。因此，做好育龄人群的地贫筛查和基因诊断，为指导优生优育、有效预防该病患儿的出生具有重要意义。

参考文献

[1]XUXiang-min.GuidelinesforThalassemiaPreventionandControlProgramme[M].People’sMilitaryMedicalPress,2011.2-38

[2]杜传书.地中海贫血研究的现状与未来[J].中华医学遗传学杂志，1996,13（5）:257-258

[3]陆国辉，徐湘民主编临床遗传咨询(2007)．北京北京大学医学出版社

[4]彭兰芬，汤惠华,付文金，等.东莞市地中海贫血基因类型与异常血红蛋白种类调查分析.检验医学与临床,2011,8(2):142-144

[5]张俊武，龙桂芳.血红蛋白与血红蛋白病[M].南宁：广西科学技术出版社，2003:228-229.

[6]NajmabadiH,GhamariA,SahebjamF,etal.Fourteen-yearexperienceofprenataldiagnosisofthalassemiainIran[J].CommunityGenet,2006,9(2):93-97.

广东省人口计生委科研基金资助（2010307）