高效液相色谱法测定复方甲硝唑乳膏中甲硝唑的含量

高效液相色谱法测定复方甲硝唑乳膏中甲硝唑的含量

许芬芳

许芬芳（福建医科大学附属第一医院药剂科350005）

【摘要】目的建立高效液相色谱法测定复方甲硝唑乳膏中甲硝唑的含量。方法采用HypersilGOLDC18(250×4.6mm5μm)，流动相为甲醇—水（35：65），检测波长为320nm，流速为1.0mL?min-1[1]。结果甲硝唑线性范围为10.0μg/ml～80.0μg/ml（r=0.9985）,平均回收率99.92%，RSD为0.18%（n=9）。结论该法简便、准确、结果可靠，可用于测定复方甲硝唑乳膏中甲硝唑的含量。

【关键词】高效液相色谱法复方甲硝唑乳膏甲硝唑含量测定

【中图分类号】R927.2【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2013）31-0118-02

【Abstract】PurposeToSetUpAHPLCMethodForDeterminatingTheContentsOfCompoundmetronidazolecream,PerfectTheStateFoodAndDrugAdministrationStandards..MethodsAdoptHypersilGOLDC18(250×4.6mm5μm),MovingphaseIsmethanolAndwater(35:65),TheWavelengthOfDeterminationIs320nm.ResultsTheRangeOfLinearityIs（10.0μg/ml-80.0μg/ml）（r=0.9985）;TheAverageRecoveryIs99.92%;RSDIs0.18%(n=9).ConclusionTheMethodOfHPLCIsBrief、Convenient、FeasibleAndAccurate,UsingInTheDeterminatingTheContentsOfCompoundmetronidazolecream.

【Keywords】HPLCCompoundmetronidazolecreammetronidazoleContentdetermination

复方甲硝唑乳膏收载于《中国医院制剂规范?西药制剂》[2]是一种既可治疗皮肤病，又能避免产生依赖性或造成激素性皮炎的药物，主要治疗毛囊虫皮炎、痤疮酒渣鼻、滴虫性阴道炎等。但有15%～30%病例出现不良反应，以消化道反应最为常见，包括恶心、呕吐、食欲不振等，一般不影响治疗；少数病例发生头痛、眩晕、荨麻疹、潮红、膀胱炎、口中金属味及白细胞减少等,停药后多数可自行恢复。建立复方甲硝唑乳膏中甲硝唑的含量测定的HPLC法，准确测定该样品的甲硝唑的含量，对完善该制剂质量标准，更好的控制制剂质量，保证临床疗效和避免不良反应的发生有重要的意义。

1、仪器与试药

1.1仪器

日本岛津LC-2010AT型高效液相色谱仪；HypersilGOLDC18(250×4.6mm5μm);KQ-250DE型数控超声波清洗器；BS-210S型电子天平；BP-211D型电子天平（德国）；HumanPower超纯水机

1.2试剂及材料

甲硝唑对照品（中国药品生物制品检定所批号100191-200305）、复方甲硝唑乳膏（莆田市皮肤病防治院制，批号20110126，20110212,20110319）、甲醇为色谱纯；水为超纯水。

2、方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：HypersilGOLDC18(250×4.6mm5μm)；流动相：甲醇—水（35：65）；流速：1.0mL?min-1；检测波长：320nm；进样量：10μL，柱温：20℃，理论板数按甲硝唑峰计算应不低于2000.

2.2溶液的制备

2.2.1对照品溶液的制备：精密称取105℃干燥至恒重的甲硝唑对照品20.0mg，将甲硝唑对照品置50ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，取2ml置20ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，用0.45μm的滤膜滤过，取续滤液，即得[3]。

2.2.2供试品溶液的制备取复方甲硝唑乳膏约0.14g（约相当于甲硝唑4mg），精密称定，置烧杯中，加入流动相溶液适量，超声加热处理使溶解，放冷，过滤至100ml容量瓶中，用流动相反复冲洗烧杯和滤器，滤液并入容量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用0.45μm的滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.2.3阴性对照溶液：取阴性对照品(不含甲硝唑的样品)适量,按供试品溶液的制备方法制备，即得。

2.3线性关系试验精密称取甲硝唑对照品(105℃干燥至恒重)10.0mg,置10ml容量瓶中，加入流动相适量超声溶解，放冷，稀释至刻度，摇匀，用0.45μm的滤膜滤过，取续滤液0.1ml，0.2ml，0.3ml，0.4ml，0.5ml，0.6ml，0.7ml，0.8ml，分别置10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，在选择的色谱条件下分别进样10μL，以甲硝唑峰面积（A）对进样量（C）进行回归分析，得到回归方程和相关系数为A=31017C+50970,r=0.9985结果表明线性良好。

2.4精密度试验精密吸取上述对照品溶液10μL，分别进样6次，测定。计算甲硝唑峰面积的RSD为0.14%。结果表明精密度良好。

2.5重复性试验取复方甲硝唑乳膏5份，按供试品溶液的制备方法制备，分别进样，计算含量，结果甲硝唑峰面积的RSD=0.23%，结果说明重现性良好。

2.6高效液相图谱[5]

阴性对照品高效液相色谱图

甲硝唑对照品高效液相色谱图

复方甲硝唑乳膏高效液相色谱图

2.7稳定性试验取同一供试品溶液，在温室下放置0h.8h.4h.6h.8h，分别进样10μL，并测定甲硝唑的峰面积。结果RSD为0.19%表明样品溶液在8h内是稳定的。

2.8回收率试验取空白基质9份，分别加入甲硝唑浓度为80%，100%，120%的对照品溶液各三份，按供试品溶液的制备方法制备试液，测定，计算回收率，结果平均回收率为99.92%，RSD=0.18%（n=9）结果见表1。

表1甲硝唑加样回收率试验结果

2.9样品测定取复方甲硝唑乳膏约0.14g（约相当于甲硝唑4mg），精密称定，置烧杯中，加入流动相溶液适量，超声加热处理使溶解，放冷，过滤至100ml容量瓶中，用流动相反复冲洗烧杯和滤器，滤液并入容量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用0.45μm的滤膜滤过，取续滤液，即得。取10ul，注入高效液相色谱仪并测定峰面积，用外标法（峰面积）计算样品含量，结果见表2。

表2甲硝唑含量测定结果

3、小结

3.1流动相及检测波长的选择取甲硝唑对照品按上法溶解并制成每毫升含40μg的溶液，在200nm～400nm波长范围内扫描，对照品溶液在320nm波长处有最大吸收[5]。流动相为甲醇—水（35：65），检测波长为320nm时，甲硝唑对照品及复方甲硝唑乳膏样品中甲硝唑的出峰时间适宜，复方甲硝唑乳膏中甲硝唑的分离效果良好，峰高、峰面积适宜，无拖尾现象，故采用本流动相及检测波长。

3.2方法讨论本次试验采用了快速准确的高效液相色谱法测定复方甲硝唑乳膏中甲硝唑的含量，以甲硝唑为对照品测定复方甲硝唑乳膏中甲硝唑的含量，方法简便，结果准确可靠，有利于加强复方甲硝唑乳膏中甲硝唑的含量控制，避免含量过多造成严重的不良反应的,以确保复方甲硝唑乳膏用药的质量与安全。

参考文献

[1]国家药典委员会.中国药典[M].2010年版二部2010:153-156.

[2]中华人民共和国卫生部药政局中国医院制剂规范?西药制剂[M].第2版1995：139.

[3]蔡果、龚春燕、申国庆.高效液相色谱法测定复方甲硝唑乳膏中甲硝唑和乳酸环丙沙星的含量[J].中国药师,2008,11(12).

[4]国家药典委员会.中国药典高效液相色谱图集[M].2010年版.2010:211.

[5]屠锡德.南京药学院学报,1986,17(3)∶193.