探讨CD146在人骨肉瘤患者组织中的表达及其临床意义

探讨CD146在人骨肉瘤患者组织中的表达及其临床意义

崔元日

黑龙江省大庆油田总医院163001

摘要：目的:研究分析骨肉瘤患者接受免疫组化检测CD146表达的意义。方法：选取50例骨肉瘤患者，对患者使用免疫组化法检测CD146表达情况，并使用CD34标记肿瘤微血管密度，对患者的肿瘤组织CD146表达情况进行分析研究。结果：骨肉瘤患者的组织内CD146以阳性表达为主，全部患者的切片中，有36例阳性，14例阴性，阳性率是72%。在光学显微镜下可见CD146表达阴性阳性判断是根据胞膜或胞浆中的颗粒颜色和胞质内的棕黄色颗粒出现情况来判断，在前者中出现为阳性，在后者中出现为阴性。此次呀就中患者的CD146表达和骨肉瘤分期和肺转移情况有直接联系（P<0.01）。结论：骨肉瘤组织的CD146表达显示了患者的病情发生和发展情况，其分子水平高低是衡量骨肉瘤疾病活动情况的指标，临床中可以提供有价值的参考信息。

关键词：CD146；骨肉瘤；表达

Objective:TostudyandanalyzethesignificanceofimmunohistochemicaldetectionofCD146expressioninosteosarcomapatients.Methods:50patientswithosteosarcomawereselected.TheexpressionofCD146wasdetectedbyimmunohistochemicalmethod.TheexpressionofCD146intumortissueswasanalyzedbyCD34.Results:thepositiveexpressionofCD146inthetissuesofosteosarcomawaspositive.Inallthepatients,36caseswerepositiveand14werenegative,thepositiveratewas72%.Underthelightmicroscope,thenegativeexpressionofCD146wasjudged.Itwasjudgedbasedonthecolorofgranulesinthecytoplasmandtheappearanceofbrowngranulesinthecytoplasm.Itwaspositiveintheformerandnegativeinthelatter.TheexpressionofCD146inthepatienthasadirectconnectionwiththestageofosteosarcomaandpulmonarymetastasis(P<0.01).Conclusion:theexpressionofCD146inosteosarcomashowstheoccurrenceanddevelopmentofpatients.Itsmolecularlevelisanindextomeasurethediseaseactivityofosteosarcoma,anditcanprovidevaluablereferenceinformationinclinic.

Keywords:CD146;osteosarcoma;expression

骨肉瘤是骨骼系统恶性肿瘤疾病，青少年也有不少患者发病，小儿患者的发病率大约是5%，该疾病对人类的生存产生了威胁。早期骨瘤肉患者（EnnekingIIA期）的症状较轻，一般不容易觉察到，大部分患者都是在中晚期时确诊。现在新型辅助化疗和外科治疗相结合的方式获得一定的进展，因此骨肉瘤患者的5年生存率能够提升至60%[1]，还是有50%的患者会出现肺转移，而肺转移患者的5年生存率大约是10%至15%[2-5]。根据研究显示，人体有许多的恶性肿瘤都呈现CD146高表达状态[6-8]。医疗领域都知道，肿瘤的生长需要依靠血管提供氧和营养，恶性肿瘤细胞进入附近的肿瘤血管，以此为扩散途径。所以，肿瘤的生长、浸润、转移等过程都和肿瘤血管有关。可是对于其在骨肉瘤的发生和发展作用的研究比较少，此次我们采取了免疫组织化学检验，检测CD146表达情况，并统计患者的微血管密度（microvesseldensity，MVD），探讨CD146表达对骨肉瘤患者的意义，现进行以下报道。

1资料与方法

1.1一般资料选取我院接收的骨肉瘤患者50例开展研究分析，其中有20例女性患者和30例男性患者，患者年龄最小7岁，最大31岁，平均20岁，经病理诊断确诊为骨肉瘤。

1.2试剂及仪器CD146：上游引物5'-GAAAAAGTGTGGCTGGAAGT-3'，下游引物5'-GTTGTCGTTGGTTGTCTCTT-3'；内参基因：核糖体蛋白S18：上游引物5'-CGATGGGCGGCGGAAAATA-3'，下游引物5'-CTGCTTTCCTCAACACCACA-3'；QPCR反应仪为ABI7500（ABI公司）；日本OlympusBX51光学显微镜；RealTime反应试剂盒（OMEGA公司）；逆转录试剂盒（Sigma公司）；总蛋白提取试剂盒（BestBio公司）。鼠抗人CD146单克隆抗体（美国SantaCruz公司产品）。CD34鼠抗人单克隆抗体、抗鼠即用型快速免疫组化MaxVisionTM检测试剂盒及DAB染色试剂盒（福州迈新生物技术有限公司）。

1.3实验方法

CD146及CD34的免疫组化检测将骨肉瘤及骨肉瘤周围非恶性组织标本制成4μm切片，参照试剂盒说明书进行免疫组织化学染色。简要过程如下：切片用二甲苯脱蜡后浸泡，高压抗原修复，血清封闭加一抗，4℃孵育过夜，再复温后加入二抗，孵育。用DAB显色，苏木精对比染色后脱水、透明、封片。在光镜下观察结果。

1.4统计学分析应用SPSS16.0软件完成统计学处理。计量资料结果采用均数±标准差（x±s）进行统计描述。计量资料采用t检验，计数资料采用分析。以P<0.05为差别有统计学意义，反之则为差别无统计学意义。

2结果

骨肉瘤患者的组织内CD146以阳性表达为主，全部患者的切片中，有36例阳性，14例阴性，阳性率是72%。在光学显微镜下可见CD146表达阴性阳性判断是根据胞膜或胞浆中的颗粒颜色和胞质内的棕黄色颗粒出现情况来判断，在前者中出现为阳性，在后者中出现为阴性。此次呀就中患者的CD146表达和骨肉瘤分期和肺转移情况有直接联系（P<0.01）。

3讨论

骨肉瘤是现在对青少年生命产生较大威胁的疾病，临床中需要寻找可靠有效的治疗方式，肿瘤血管生成以及它对肿瘤的发展，转移，侵袭等过程产生的作用是我们研究的新方向。医疗领域都知道，肿瘤的生长需要依靠血管提供氧和营养，恶性肿瘤细胞进入附近的肿瘤血管，以此为扩散途径。所以，肿瘤的生长、浸润、转移等过程都和肿瘤血管有关[6-8]。肿瘤无血管阶段获取的营养物质以及清除代谢物质都是通过附近组织弥散作用来完成的，肿瘤增殖到一定程度就会产生血管，这就是血管期；因为新生血管结构不完整，不成熟，容易被肿瘤细胞侵袭破坏。肿瘤组织的新生血管数量和肿瘤增生速度成正比，也和转移的几率成正比，和患者的生存期限成反比。

此次研究中，骨肉瘤患者的组织内CD146以阳性表达为主，全部患者的切片中，有36例阳性，14例阴性，阳性率是72%。在光学显微镜下可见CD146表达阴性阳性判断是根据胞膜或胞浆中的颗粒颜色和胞质内的棕黄色颗粒出现情况来判断，在前者中出现为阳性，在后者中出现为阴性。此次呀就中患者的CD146表达和骨肉瘤分期和肺转移情况有直接联系（P<0.01）。

总而言之，骨肉瘤组织的CD146表达可以作为诊断骨肉瘤的指标和依据，对其进行监控，能够对患者的病情发展程度和转移情况进行了解，为临床治疗提供更加多的有用信息，临床中对于这方面的研究应该继续深入。

参考文献：

[1]朱忠胜，张春林.骨肉瘤干细胞研究现状[J].国际骨科学杂志，2011，32（5）：296-299.

[2]孙敏，王以新.CD146在多种肿瘤中的表达与作用[J].中国医药科学，2012，2（4）：44-45.

[3]孟伟青，程文莺.依托泊苷联合顺铂对肺癌化疗的临床观察及护理[J].中国社区医师·医学专业，2011，13（27）：297-298.

[4]王树新，徐林富，王良明，等.焦磷酸测序和双脱氧测序法检测结直肠癌患者K-ras基因突变的对比研究[J].肿瘤学杂志，2012，18（5）：339-341.

[5]谢克恭，唐毓金，黄煜朗，等.不同浓度、作用时间白花蛇舌草注射液对MG-63细胞凋亡效果[J].中国医学创新，2016，13（3）：1-4.

[6]周齐.百里醌抑制体外骨肉瘤细胞转移的实验研究[J].中国医学创新，2016，13（5）：26-29.

[7]誊秀华，周桂桃.IL-6水平检测与重症并发感染者的相关性分析[J].中国医学创新，2015，12（25）：63-65.

[8]刘徽，朱波，林治华.IL-6信号通路与肿瘤[J].细胞与分子免疫学杂志，2011，27（3）：353-355.