衰变加速因子在胃癌中的表达浅析

衰变加速因子在胃癌中的表达浅析

王芹

山东省济宁市第一人民医院检验科272000

摘要：目的检测衰变加速因子(decayacceleratingfactor,DAF,CD55)在胃癌组织中的表达情况，分析DAF高表达在促进肿瘤细胞增殖、转移，进肿瘤血管生长，逃避免疫监视的作用，探讨DAF高表达与肿瘤病理分期及临床转移的关系。方法免疫组化法检测132例胃癌和76例癌旁组织病例切片中DAF表达情况。结果免疫组化结果显示132例胃癌切片标本中，共有103例表达,DAF阳性率为78.1%；76例癌旁组织中，共有19例表达，DAF阳性率为25.0%，肿瘤组织显著高于癌旁对照组，P<0.05。30例I~II期胃癌患者中，15例DAF表达阳性，阳性率为50.0%；56例III~IV期患者中，53例DAF表达阳性，阳性率为94.6%，I~II期和III~IV期两者有显著差异，P<0.05。DAF高表达与胃癌III-VI病理分期显著相关，可能与胃癌的恶性程度相关。

关键词：胃癌；衰变加速因子(DAF,CD55)；免疫逃逸

DAF是一种补体调节蛋白，表达于与血清补体蛋白紧密连接的细胞、血管外周细胞以及肿瘤细胞，可以抑制自身补体级联式激活的蛋白质。它被认为可以保护细胞免受补体介导的细胞溶解作用，通过干扰C3转化酶（C4b2a和C3bBb）和C5转化酶（C4b2a3b和C3bBb3b）来制止补体级联反应升级，抑制C3b沉积，阻止抗原递呈细胞的吞噬，耐受NK细胞的杀伤作用[1]。SchmittCA在研究胃肠道肿瘤时指出，CD55保护肿瘤细胞免受有活性的补体攻击，其高表达也许是肿瘤的免疫逃逸机制[2]。肿瘤发生发展机制复杂，近年的研究表明，DAF不仅是一种补体调节因子，它在肿瘤的发生过程中起着不容低估的作用。我们通过免疫组化技术检测病理组织切片，分析DAF高表达在促进肿瘤细胞增殖，转移，逃避免疫监视中的作用以及DAF高表达与肿瘤病理分期的临床意义，为揭示胃癌发生过程中的免疫逃逸机制提供新的理论和实验依据。

1材料与方法

1.1一般资料本试验的研究对象为2013年12月至20014年9月在济宁市第一人民医院住院胃癌患者132例，均经手术治疗，病理诊断为胃癌，其中男性65例，女性57例，患者年龄36~73岁，平均45.6岁。同时收集癌旁对照76例，其中男性41例，女性35例。年龄38-73岁，平均47.8岁

1.2材料兔抗人CD55一抗，购自eBioscience公司；免疫组化检测试剂盒，购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3免疫组化染色方法分别滴加1：100稀释的兔抗人CD55、VEGF一抗，小鼠抗人PCNA一抗，4℃过夜。PBS（pH7.6）洗5分钟，洗3次。分别滴加羊抗小鼠、羊抗兔HRP标记的二抗,37℃30分钟。PBS（pH7.6）洗2分钟，洗3次。重复步骤以上两步骤。苏木素染色液复染。然后甘油缓冲液封片，镜下观察。

1.4结果判断标准：结果为胞浆或胞膜表达，出现黄色反应为阳性，对照组相同部位不出现黄色为阴性。根据显色强度和阳性细胞数两项指标判断阳性等级。按显色强度分为：无色、黄色、浅黄色、棕黄色，分别计分为0、1、2、3；按阳性细胞占同类细胞的比例分为：0、<1/3、1/3-2/3、>2/3，分别计分为0、1、2、3。两项计分相加，确定0分为-，1-2分为+，3-4分为++，5-6分为+++。

1.5统计学处理方法实验数据采用SPSS11.5软件包进行处理，根据资料类型选择x2检验，相关分析等统计方法分析实验结果。

2实验结果

2.1肿瘤组织中表达DAF的细胞类型。

2.2DAF在胃癌患者肿瘤组织和癌旁组织中的表达阳性率

32例胃癌患者肿瘤组织DAF的阳性表达率为78.1%，20例癌旁对照组DAF的阳性表达率为25.0%，肿瘤组织显著高于癌旁对照组，P<0.05。

2.3DAF高表达与胃癌病理分期的关系

12例I~II期胃癌患者中，6例DAF表达阳性，阳性率为50.0%；20例III~IV期患者中，19例DAF表达阳性，阳性率为95.0%，I~II期和III~IV期两者有显著差异，P<0.05。

3讨论

近年研究证明，DAF保护肿瘤细胞免受有活性的补体攻击，DAF在消化道肿瘤细胞转录和翻译水平上存在过表达现象，其表达量可为正常细胞的4-100倍，而且与肿瘤的不良预后相关。DAF在肿瘤和淋巴瘤白血病细胞表面呈过度表达，显著高于正常细胞。DAF也许可作为肿瘤细胞上的信号分子，促进肿瘤细胞生长。Niehans等，最近在多种癌细胞上检测到补体抑制蛋白CD46(MCP)、CD55(DAF)及CD59(Protectin)的表达，能协助I因子加速对C3b的灭活，避免C3b沉积在癌细胞表面，从而使红细胞不能通过其CR1受体与癌细胞发生免疫粘附，这可能是肿瘤免疫逃逸的机制之一。DAF在口腔鳞状细胞癌等肿瘤组织中过表达，可以使肿瘤组细胞从补体依赖和抗体介导的杀伤作用中逃避。肿瘤可以通过释放可溶性的DAF和CD59到周围组织来补充膜相关的补体抑制剂的活性，抑制补体介导的杀伤作用，促进肿瘤细胞增生。DAF在宫颈癌组织中含量增加，直接调节肿瘤细胞，引起C3转换酶含量改变，肿瘤细胞逃避免疫监视。

淋巴结转移的范围越广，肿瘤浸润的范围越大，其临床分期越高。DAF在肿瘤组织中含量增加，直接调节肿瘤细胞，引起C3转换酶含量改变，肿瘤细胞逃避免疫监视，促进肿瘤转移，病情恶化。有实验表明CD97作为DAF的配体在甲状腺肿瘤组织中高表达，它可能参与肿瘤细胞上DAF的信号转导，并与DAF协同作用促进肿瘤细胞粘附和转导，使患者的病理分期增高。肿瘤细胞能产生VEGF，与受体结合后，可以刺激血管内皮细胞增殖，促进血管形成，并增加血管通透性,容易通过血管内皮细胞进入血流从而发生远处转移，病理分期增高。

本实验结果发现，32例胃癌肿瘤细胞上DAF表达远远高于癌旁对照，阳性率分别为78.1%和25.0%，表明DAF的高表达可能使胃癌细胞逃避宿主补体依赖和抗体介导的杀伤，形成胃癌细胞的免疫逃逸。综上所述，DAF一种重要的补体调节蛋白，在肿瘤细胞上过表达，尽管前人已经做了大量的工作，仍有很多未知的功能等着大家去探索。随着对它的结构及功能的深入研究，相信不久的将来，在肿瘤的治疗中，DAF作为靶点将发挥巨大的作用。

参考文献

1pendloveI,LiL,CarmichaelJ,etal.Decayacceleratingfactor(CD55):atargetforcancervaccines?[J].CancerRes,1999,59(10):2282-2286.

2SchmittCA,SchwaebleW,WittigBM,etal.Expressionandregulationbyinterferon-gammaofthemembrane-boundcomplementregulatorsCD46(MCP),CD55(DAF)andCD59ingastrointestinaltumours[J].EurJCancer.1999;35(1):117-24.