甲状腺乳头状癌中kiss-1、ki-67、VEGF-C的表达及其意义

甲状腺乳头状癌中kiss-1、ki-67、VEGF-C的表达及其意义

赵会丽张大鹏陈现彬

济宁医学院临床医学院山东272067

摘要：目的探讨kiss-1、ki-67和VEGF-C蛋白在甲状腺乳头状癌（papillarythyroidcarcinoma，PTC）和滤泡性腺瘤（follicularadenoma，FA）的表达及意义。方法采用免疫组织化学染色方法检测44例PTC及12例FA石蜡包埋组织中kiss-1、ki-67和VEGF-C蛋白的表达。结果kiss-1、ki-67和VEGF-C在PTC组中阳性率分别为40.90%（18/44）、61.36%（26/44）和68.18%（30/44），与FA组相比差异显著，P<0.05；在伴淋巴结转移的PTC组织中分别为16.70%（2/12）、83.33%（10/12）和91.67%（11/12），与不伴淋巴结转移组相比差异显著，P<0.05；在伴甲状腺外侵犯的PTC组织中分别为18.75%（3/16）、81.25%（13/16）和87.50%（14/16），与不伴甲状腺外侵犯组相比差异显著，P<0.05；结论kiss-1、ki-67和VEGF-C蛋白有助于PTC与FA的辅助诊断，三者与PTC的侵袭、转移密切相关。

关键词：甲状腺乳头状癌；滤泡性腺瘤；kiss-1；ki-67；VEGF-C；免疫组化

近年来甲状腺乳头状癌发病率呈明显上升趋势[1]，有关甲状腺肿瘤相关蛋白及基因的研究成为热点，应用Envision免疫组织化学技术（Immunohistochemistry，IHC）检测PTC和FA组织中kiss-1、ki-67、VEGF-C蛋白的表达情况，探讨其作为PTC相关指标的意义，为临床治疗提供一定的理论依据。

1材料与方法

1.1病例来源收集2011~2012年济宁医学院附属医院病理科确诊的甲状腺手术切除标本56例，其中PTC44例，FA12例。PTC患者中女性35例，男性9例，年龄22～76岁，平均49岁；44例PTC标本中，12例有LNM，16例有甲状腺外侵犯。

1.2方法免疫组化染色采用Envision两步法，用已知阳性片作阳性对照，以PBS代替一抗作阴性对照。具体操作步骤按试剂说明书进行。兔抗人kiss-1多克隆抗体购自武汉博士德生物技术有限公司；鼠抗人ki-67单克隆抗体和兔抗人VEGF-C多克隆抗体购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3结果判断：

kiss-1、VEGF-C阳性结果判定标准：以胞浆出现棕黄色或棕褐色为阳性。a.按阳性细胞所占的比例评分，阳性染色的细胞数<10%0分；10%～30%1分；30%～60%2分；≥60%3分。b.按阳性细胞着色程度评分，无着色0分，浅黄色1分；棕黄色2分；棕褐色3分。每例积分=a×b，积分>2分为阳性，≤2分则为阴性。

ki-67阳性结果判定标准：以细胞核出现清晰的棕黄色颗粒为阳性。选取5个不同的高倍视野（×100），每个视野计数100个细胞，取其平均值为细胞的阳性率，阳性细胞数<10%为阴性，≥10%为阳性（根据现行常规ki-67检测标准）。

1.4统计学分析

采用SPSS18.0软件进行统计分析，计数资料采用X2、Fisher确切概率法做各数值间的差异分析，P<0.05差异有统计学意义。

2.结果

2.1kiss-1、ki-67、VEGF-C蛋白在PTC和FA组中的表达情况

kiss-1、ki-67、VEGF-C蛋白在PTC组中的阳性率明显高于FA组，差异有统计学意义（P<0.05，表1和图1）。

2.2kiss-1、ki-67、VEGF-C蛋白在不同PTC分组中的表达情况

PTC组中，kiss-1、ki-67、VEGF-C蛋白的阳性率与肿瘤的淋巴结转移和甲状腺外侵犯有关，差异有统计学意义（P<0.05，表2），而与患者的年龄、性别无关（表2）。

表1PTC和FA组中kiss-1、ki-67、VEGF-C蛋白的表达

图1kiss-1在不同甲状腺组织中的表达，Envision两步法：A.PTC；B.FA

图2ki-67在不同甲状腺组织中的表达，Envision两步法：A.PTC；B.FA

图3VEGF-C在不同甲状腺组织中的表达，Envision两步法：A.PTC；B.FA

3讨论

kiss-1是1996年Lee等[2]在人黑色素瘤细胞株中最先发现的肿瘤转移抑制基因。研究表明[3-4]kiss-1在体内外均具有抑制人类多种肿瘤转移的作用，kiss-1的低表达与肿瘤的侵袭转移及患者的预后差有关，然而具体作用机制尚不明确。本实验证实kiss-1在PTC组阳性率40.9%与FA组阳性率75%之间差异有统计学意义（p﹤0.05）；提示kiss-1的低表达在PTC的发生发展过程中起到了一定的作用。Kiss-1在有淋巴结转移组和有甲状腺外侵犯组的阳性率分别低于无淋巴结转移组和无甲状腺外侵犯组，差异有统计学意义（p﹤0.05），进一步证实了kiss-1的低表达是PTC侵袭转移的重要因素。PTC中kiss-1的这种特异性表达使其成为PTC诊断和基因治疗研究的新靶点。因此，进一步深入的研究kiss-1可能对肿瘤的治疗和预后提供一定的理论基础。Ki-67是1991年Gerdes等[5]发现的在增殖细胞中表达的反映细胞增殖的核抗原。ki-67与细胞周期密切相关，其在多种实体恶性肿瘤中的表达远高于正常组织，并与恶性肿瘤的发展、转移及预后密切相关[6-7]。流行病学与临床证据表明[8]，在与PTC有关的多个肿瘤增殖标记物中，ki-67阳性的PTC患者复发风险高且生存率低。本实验ki-67在PTC组阳性率61.4%与FA组阳性率25%之间差异有统计学意义（p﹤0.05）；ki-67在有淋巴结转移组和有甲状腺外侵犯组的阳性率分别高于无淋巴结转移组和无甲状腺外侵犯组，证实了ki-67在PTC与FA鉴别诊断中具重要意义，与PTC的发生发展、侵袭转移密切相关，提示ki-67可作为临床上预测PTC预后及转归的一个重要指标。VEGF-C是第一个被发现的淋巴管生长因子，VEGF-C与肿瘤的淋巴管生成及淋巴转移密切相关，VEGF-C的表达对肿瘤早期扩散和后期转移具有警示意义[9-10]。Sang-HyuKLee等[11]研究表明VEGF-C在PTC的表达显著高于结节性增生和甲状腺腺瘤，与淋巴结转移和侵袭正相关。本实验VEGF-C在PTC中的阳性率为68.2%与FA的阳性率33.3%之间差异有统计学意义（p＜0.05）；在有淋巴结转移组和有甲状腺外侵犯组的VEGF-C阳性率分别高于无淋巴结转移组和无甲状腺外侵犯组。VEGF-C高表达与其极易发生淋巴结转移及其促进肿瘤侵袭转移的生物学特性相符合。

前期已有研究证实kiss-1、ki-67、VEGF-C可分别用于PTC的诊断及鉴别诊断中，本实验证实了kiss-1、ki-67、VEGF-C在PTC及FA中的表达情况及与淋巴结转移及甲状腺外侵犯的关系。实验结果显示三者联合可作为PTC与FA辅助诊断的重要参考标记，且三者对PTC的预后判断具有重要意义[12]。PTC的发生发展、浸润转移是多基因相互作用的过程，kiss-1可通过阻滞细胞增殖抑制肿瘤细胞的增殖和侵袭，kiss-1与VEGF-C通过一系列信号通路抑制了PTC的侵袭转移，推测在PTC的治疗上可提供新的分子靶点。对PTC的转移预警和辅助诊断治疗具有一定的临床指导意义。

参考文献：

[1]EliseiR，MolinaroE，AgateL，etal.Aretheclinicalandpathologicalfeaturesofdifferentiatedthyroidcarcinomareallychangedoverthelast35years?Studyon4187patientsfromasingleItalianinstitutiontoanswerthisquestion[J].JClinEndocrinolMetab，2010，95（4）：1516–1527.

[2]LeeJH，MieleME，HicksDJ，etal.Kiss-1，anovelhumanmalignantmelanomametastasissuppressorgene[J].JNatlCancerlnst，1996，88（23）：1731-1737.

[3]TaKedaT，KiKuchiE，MiKamiS，SuzuKiE，MatsumotoK，MiyajimaA，OKadaY，OyaM..Prognosticroleofkiss-1andpossibilityoftherapeuticmodalityofmetastin，thefinalpeptideofthekiss-1gene，inurotheliacarcinoma.MolCancerTher，2012，11（4）：853-863.

[4]LiN，WangHX，ZhangJ，YeYP，HeGY.Kiss-1inhibitstheproliferationandinvasionofgastriccarcinomacells.WorldJGastroenterol，2012，18（15）：1827-1833.

[5]GerdesJ，LiL，SchlueterC，DuchrowM，WohlenbergC，GerlachC，etal.Immunobiochemicalandmolecularbiologiccharacterizationofthecellproliferation-associatednuclearantigenthatisdefinedbymonoclonalantibodyki-67.AmJPathol.1991，138（4）：867-73.

[6]ErmiahE，BuhmeidaA，AbdallaF，etal.PrognosticValueofProliferationMarkers：ImmunohistochemicalKi-67ExpressionandCytometricS-PhaseFractionofWomenwithBreastCancerinLibya[J].JournalofCancer，2012，3：421-431.

[7]DeAndradeBA，LeonJE，CarlosR，etal.Expressionofminichromosomemaintenance2，ki-67，andgeminininoralneviandmelanoma.AnnalsofDiagnosticPathology[J].Annalsofdiagnosticpathology，2013，17（1）：32-36.

[8]RanjbariN，RahinF.Theki-67/MIB-1indexlevelandrecurrenceofPTC[J].MedHypotheses，2013，80（3）：311-314.

[9]DingM，FuX，TanH，etal.TheeffectofvascularendothelialgrowthfactorCexpressionintumor-associatedmacrophagesonlymphangiogenesisandlymphaticmetastasisinbreastcancer[J].MolMedReport，2012，6（5）：1023-1029.

[10]ChenH，SuoK，ChengY，etal.VascularendothelialgrowthfactorCenhancescervicalcancermigrationandinvasionviaactivationoffocaladhesionkinase[J].GynecolEndocrinol，2013，29（1）：20-24.

[11]Sang-HyuKLee，Sung-JinLee，Sung-MinJin，etal.RelationshipsbetweenlymphnodemetastasisandexpressionofCD31，D2-40，andvascularendothelialgrowthfactorsAandCinpapillarythyroidcancer.ClinicalandExperimentalOtorhinolaryngology，2012，5（3）：150-155.

[12]赵会丽.甲状腺乳头状癌中kiss-1、ki-67、VEGF-C的表达及其意义[D]，河北北方学院，2014.