食品卫生检验中沙门菌属 LAMP检测方法的探究

食品卫生检验中沙门菌属 LAMP检测方法的探究

张琼珍

南部县疾病预防控制中心 四川 南充 637300

摘要：目的 探究食品卫生检验中沙门菌属LAMP（环介导等温扩散技术）的操作方法和应用价值。方法 于2017年6-12月份收集87份食品标本，分别使用LAMP检测方法和分离培养法，对样品中的沙门菌进行监测。并对比LAMP法和分离培养法的结果是否一致。结果 所有样品中，使用LAMP方法共检测出8份样品有沙门菌阳性，阳性率为9.2%；使用分离培养法共检测出5份样品有沙门菌阳性，阳性率为5.7%。检测时间方面，LAMP法需要24h，而分离培养法需要3-5d。结论 LAMP法和分离培养法均能在食品卫生检验中检测沙门菌属。且LAMP法的精确度更高，时间更短。

关键词：食品卫生检验；沙门菌；LAMP法；分离培养法

Abstract: objective to explore the operation method and application value of LAMP in food hygiene testing. Methods 87 food samples were collected from June to December 2017, respectively using LAMP test method and isolation culture method to monitor the salmonella in the samples. The results of LAMP and isolation culture were compared. Results in all samples, 8 samples were detected by LAMP, and the positive rate was 9.2%. A total of 5 samples were tested positive for salmonella, with a positive rate of 5.7%. In terms of detection time, LAMP method needs 24h, while the isolation and culture method needs 3-5d. Conclusion both LAMP and isolation culture method can detect salmonella in food hygiene. And LAMP method has higher accuracy and shorter time.

Keywords: food hygiene inspection; Salmonella; LAMP method; Isolation culture

0 引言：

沙门菌是导致人类食物中毒的主要病原，细菌性食物中毒中，约有80%是有沙门菌引起的。分离培养法是检验食品中沙门菌的主要方法，但是对仪器设备的要求较高，且检验流程较为繁琐，从食品送检到得出最终结果，最短也需要3d时间，应用范围具有很大的局限性。LAMP法的核心技术是基因扩增技术，将该方法应用到食品沙门菌属检验，具有高特异性、高敏感性和低成本的优势。本文选取了87份食品标准，采用对比检验的方式，分别就LAMP法和分离培养法的检查结果、所需时间等进行检查，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

在2017年6-12月份共收集食品样本87份，其中生鲜肉24份，腌制品19份，速冻米面制品13份，蔬菜11份，海鲜产品10份，冰激凌6份，即食面点制品4份。阳性控制菌株为肠炎沙门菌。

1.2 方法

1.2.1 LAMP法检测沙门菌

每次试验选取1种样品的1ml食品标本前增液，将离心机的转速调整为10000r/min，离心时间为3min。将所得样品放入试管中，静置1h后，将上层清液取出。下层浊液倒入试剂盒内，进行核酸提取。向提取物中加入少量聚合酶，充分摇匀后，将溶液放入恒温箱中。在60℃的恒定温度下放置40min。然后取出样品，肉眼观察可以发现试管内样品浑浊，检测结果判定是否为阳性。按照上述方法依次对剩余样品进行检验。并记录检验结果。

1.2.2 分离培养法检测沙门菌

根据《食品微生物学检验--沙门氏菌》GB4789.4-2010中的要求，对所取样品进行沙门菌检验。仍然选取适量样品，制成2ml的前增菌液，并等分为两份。其中一份摇匀后，转种于10ml的TTB增菌液内。将试管放置于恒温箱内，温度调整到45摄氏度，培养24h；另一份摇匀后转种于10ml的SC增菌液内，将试管放置到恒温箱内，温度调整到37.5摄氏度，培养24h。培养时间结束后，分别取干净、无菌的XLD平板和BS平板，用于接种增菌液。继续培养24h，收集平板上的菌落进行沙门菌属检测。

1.2.3 统计学分析

使用统计学软件SPSS18.0对所得数据进行检验和分析，结果用X²检验，以a=0.05作为检验标准。

2 结果

2.1 两种方法的检验结果对比

87份样品中，经LAMP方法检验，共计发现11例样品含有沙门菌属，其中3例为阴性，8例为阳性，阳性率为9.2%；分离培养法检验样品共计发现7例含有沙门菌属，其中2例为阴性，5例为阳性，阳性率为5.7%。具体情况如表1所示。

表1 LAMP法和分离培养法检测结果对比

2.2 两种方法的检验时间对比

以同一种食品样品作为参照，对比两种方法的检验时间：LAMP法从制作样品前增菌液到最终检测出沙门菌，平均用时为22h，分离培养法则平均需要5d。这是因为分离培养法的流程更加繁琐，除了需要制备前增菌外，还要进行分离、筛选培养和血清鉴定等多个步骤，都需要花费额外的时间。

3 讨论

本次研究中分别使用LAMP法和分离培养法，对87例食品样品进行检验，根据检验结果，LAMP法检测出了8例沙门菌阳性，而分离培养法检测出了5例沙门菌阳性，相比来看LAMP法用于食品卫生检验沙门菌属，其精确度更高；在检测时间方面，LAMP法测定一种样品，所需时间控制在24h以内，而分离培养法测定样品，时间在3-5d不等。相比来看，LAMP法也具有一定优势。

研究中参照的国家标准《食品微生物学检验沙门氏菌检验》，需要经过前增菌、增菌、分离、筛选可疑菌落、生化和血清学鉴定这几个步骤，得到阳性结果往往需要4d左右，检出沙门菌至少需要7d。除了时间上的影响外，分离培养法的操作步骤相对繁琐，各个环节中使用到的专用仪器设备也较多。例如本次试验中分别用到了DYY-6C型电泳仪、凝胶成像仪、全自动微生物鉴定系统等，其中部分设备都是国外进口，价格昂贵，无形中增加了分离培养法的成本。相比来说，LAMP法的流程比较简单，对先进仪器设备依赖度低。

分离培养法需要经过两次增菌后再进行分离培养，而LAMP法检测只需要采用前增菌液进行核酸提取后即可开始LAMP扩增试验，在60min即可以完成LAMP扩增过程，本研究利用LAMP方法可以在24h(包括食品标本的前增菌过程)内检出食品标本中的沙门菌属，相比分离培养法更快速。另外，LAMP法还可以利用肉眼判断结果，比较直观方便，这对生鲜食品的快速检测具有重要意义。

LAMP法是对沙门菌属的通用核酸检测，不能进一步鉴定分型和分离菌株，故可以将沙门菌属LAMP方法配合分离培养法进行食品卫生检测：前增菌液LAMP检测发现阳性结果后再进行后续分离培养法试验来鉴定分型和菌株分离，可以提高食品卫生检验的效率。

参考文献：

[1]宋庆华,刘淑梅,李钢锋,等.对肉品沙门氏菌用荧光抗体法与常规法检验的对比实验[J].中国动物检疫,2014(2):13-14.

[2]张美兰,罗瑞林.荧光抗体镜检法与常规细菌培养法检验沙门氏菌的比较[J].郑州牧业工程高等专科学校学报,2016(2):20-23.