两种细菌鉴定法在临床血液检验中的应用研究

两种细菌鉴定法在临床血液检验中的应用研究

万树林

虎林市人民医院 黑龙江 虎林市 158400

摘要：目的 为了对临床血液检验中的细菌进行更好的鉴定。方法 把70份血液样本进行细菌阳性鉴定，阳性血液样本分别通过直接和常规药敏实验来进行细菌的鉴定，对这两种鉴定方法的符合率进行分析。结果 常规法中直接法检测革兰阴性菌的符合率为92.1%，阳性菌的符合率为92.3%；检测革兰性菌和革兰阴性菌的时候检测的敏感度分别为87.9%和85.7%。这两中方法对革兰氏阳性菌和阴性菌的耐药性、敏感性以及重度敏感性的检测结果没有明显的不同，P> 0.05。结论 直接药敏试验和常规药敏试验在临床血液检验中的符合率比较高，并且检验的方法比较快速方便，可以在临床检验中进行推广。

关键词：两种细菌鉴定法；血液检验；应用；研究

Application of two bacterial identification methods in clinical blood test

Abstract: Objective To identify the bacteria in clinical blood test.Methods seventy blood samples were identified as positive bacteria, and the positive blood samples were identified as positive bacteria by direct and routine drug sensitivity tests, and the coincidence rate of the two identification methods was analyzed.Results The coincidence rate of gram-negative bacteria and gram-positive bacteria in the conventional method was 92.1% and 92.3% respectively.The sensitivity of the test for gram-positive and gram-negative bacteria was 87.9% and 85.7%, respectively.There was no significant difference between the two methods for gram-positive and gram-negative bacteria in terms of drug resistance, sensitivity, or severe sensitivity, P>0.05.Conclusion The coincidence rate of direct drug sensitivity test and routine drug sensitivity test in clinical blood test is relatively high.

Key words: Two bacteria identification method;Blood tests;Application;research

引言

临床上细菌成为威胁患者生命的主要生物学因素之一，而近年来抗生素的滥用使细菌对药物的敏感性和耐药性都发生了变化，给临床检验和治疗带来了更多新的问题，如何选择细菌鉴定的方法成为困扰检验人员的一大难题。目前，临床上用于检测、鉴定细菌的方法主要有镜检、常规检验、血清血凝集测试、直接药敏实验等，其中药敏试验是根据细菌对抗菌药物的敏感性来确定其类型，该方法简便、快速且较为准确。本研究旨在探索临床上应用直接药敏试验和常规检验对细菌鉴定的优缺点。具体情况如下文所示。

1研究资料和方法

1.1一般资料

我院2019年4月至2019年12月问共收治发热并发全身感染的患者70例。纳入标本标准：标本采集对象为在入院前2天之内没有服用过药物，同时也没有接受过相关治疗，患者没有凝血功能障碍和其他血液性疾病。共纳入血液标本70份，所有标本来源为患者发热初期时采集的血液，约20ml，经过冷藏处理后，送至检验科进行检验。

1.2方法

将70份标本先接种至由BD公司生产的BACTEC9240系统中进行自动的培养和检测，将系统检测出的每份阳性标本再进行直接药敏试验和常规药敏试验检测。分析两种不同检测方法的鉴定结果和药敏鉴定结果的符合率。

1.2.1常规药敏试验

将确定了的阳性样本分别接种至血平板、巧克力平板和麦康凯平板上进行培养，在35℃含5.0%CO₂条件下孵育18-24h，之后取菌落涂片，通过革兰氏染色，根据检测的结果选择

合适的酶，并采用Walkaway 40系统来进行鉴定，之后进行药敏试验。

1.2.2直接药敏试验

快采用无菌注射器将10m L阳性样本抽取注入无菌的试管中，通过密度梯度离心法将细菌进行分离，转速为1500 r/min，离心时间为5 min，收集上清液，转移至新的离心管中再进行3000 r/min的离心，离心时间15 min后再去除上清液，用PBS洗涤沉淀，洗涤2次后用PBS进行重悬。取20μL重悬液涂于载玻片上，再通过革兰氏染色，在倒置显微镜下进行观察：革兰阳性菌在镜下呈链状，利用MH+5％羊血血平板进行药敏试验初试验。根据初试验结果选择合适的酶，再将菌液浓度调整至6.2×10⁸cfu/L，之后可进行接种。将细菌接至NC21综合培养板上进行细菌的鉴定和药敏试验，一般接种时滴1-2滴悬液至MH平板上即可(真菌除外)。将刮铲喷酒精后于酒精灯上进行灼烧，确定其为无菌状态后放置于一旁，待到刮铲自然降温至室温后将菌液均匀涂抹开，再将药敏纸片按一定间距均匀贴在平板上。根据2005 NCCLSI标准判断细菌对抗菌药物的敏感度、耐药性和中度敏感。

1.3统计学处理

利用SPSS16.0软件对上述数据进行统计分析，计数资料采用卡方检验，设定检验水平，则P≤0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1鉴定方法符合率的比较

70份标本中，阳性结果有64份，而直接药敏试验在检测革兰阳性菌和革兰阴性菌时，检验结果的符合率分别为92.1%和92.3%，二者比较无统计学意义，P＞0.05。两种方法检查的总符合率为87.5%。见表1

表1 两种细菌坚定法符合率对比情况

2.2药敏试验结果比较

采用直接药敏试验对革兰阳性菌和阴性菌的检验敏感度分别为87.9%和85.7%，与常规法比较差异无统计意义，P＞0.05，见表2。

表2 两种细菌鉴定法药敏试验结果和敏感度对比情况

3结论

目前，在发达国家已经将抗生素列为控制使用药物之一，一般情况下不得使用抗生素。研究发现，抗生素除了快速治愈细菌感染类疾病外，还会提高该种细菌的抗药性，使用药物的频率决定了细菌耐药性的高低。从达尔文时期就提出了适者生存理论，而这个理论同样适用于细菌，一旦在使用抗生素时有细菌活下来，那么这个细菌及其繁殖而来的后代都将具有一定的抗药性，如果该细菌再次感染，所使用抗生素的药量小于或等于前一次用量时，该抗生素的效用将不明显，甚至毫无作用。在加大药物剂量后，细菌存活的几率也大于原始菌株，即该菌株对该抗生素产生了抗药性口。要想治疗该细菌感染引发的病症只能不断地加大药量或者更换药物。

细菌耐药性在不断增加，给临床上治疗增加难度的同时使菌血症、败血症等疾病的发病率提高，且患血液性疾病患者的死亡率也相应增加，这说明在某一方面人类促进了细菌的“进化”。若要在临床上有效地治疗这些由细菌引发的疾病，检验鉴定细菌的种类成为关键。快速有效地得到检验结果可减少患者等待时间，尽快使患者得到治疗，降低患者病情加重甚至死亡的概率。

近年来，在临床上被广泛使用来鉴定细菌的方法主要有镜检、常规检验、血清血凝集测试、直接药敏实验等。确定有效的药敏试验法有纸片扩散法、自动检测法、稀释法、抗生素浓度梯度法等方法，本研究主要应用的是BACTEC9240仪器检测法。该系统主要是采取全自动培养法，将待检测的血液样本中的细菌进行分离培养，再采用荧光探测法检测培养环境中氧气和二氧化碳的变化趋势，确定该菌是厌氧菌还是兼氧菌或需氧菌，并确定该菌采取的

是何种增殖方式。该系统能够广泛的在血液快速检验中使用，同时也可以用于其它需要进行细菌检测的标本中使用，并能培养真菌、杆菌等多种细菌。本研究结果发现，该系统在检测革兰阳性球菌和革兰氏阴性杆菌时与常规检验结果符合率较高，同时确定了在检测埃希氏菌和沙门菌时符合率最高，可以达到百分之百。该系统在革兰阳性菌和革兰氏阴性菌以及肠杆菌属的菌种中检测符合率较高，且对这三类细菌的特异性敏感度也性对较高，说明在临

床上利用直接药敏试验检测革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、肠杆菌属类菌，结果与常规实验的结果符合率高，可进行确诊，同时该方法检测经过的时间短，有利于提早进行诊断治疗。对其他菌种也可进行基本的预先判断，再通过其他方法进行确认。

总之，该研究说明直接药敏试验和BACTEC9240检测系统在一定程度上可代替常规检验，且该系统的主要优点在快速简便、结果准确，对检测用具、材料要求不高，同时节约了检验时间，为患者治疗争取更多的时间，增加患者生存的概率，可在各级医疗单位进行推广使用。当患者病情复杂但短时间不会威胁生命健康时可先进行直接检验再进行常规检验，一般情况下只采取直接药敏试验即可达到检验要求。

参考文献

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