新冠 病毒核酸检测的结果分析

新冠 病毒核酸检测的结果分析

韩丹

哈尔滨市胸科医院 黑龙江 哈尔滨 150056

摘要:新冠病毒属于呼吸道感染疾病，目前病毒感染的几率也在不断上升。检查患者体内的核酸已经成为确诊的主要依据。但是根据从当前临床分析来看，核酸检测阳性率并不理想，这就给病毒核算检测工作增加了较大的难度，特别是在实验条件上、检验人员上和检验过程中都提出了较高的要求。基于此，文章注重以新冠状病毒核酸检测的情况进行分析，探讨了当前核酸检测中存在的主要问题，以期能够为抗战疫情提高重要依据。

关键词：新冠病毒；核酸检测；结果

Novel Coronavirus nucleic acid test results analysis

Novel Coronavirus is a respiratory infection disease, and the odds of viral infection are on the rise.Examining the nucleic acid in a patient's body has become the main basis for diagnosis.However, according to the current clinical analysis, the positive rate of nucleic acid test is not ideal, which increases the difficulty of virus accounting and testing, especially in the experimental conditions, inspectors and the testing process have put forward higher requirements.Based on this, this paper focuses on the analysis of the nucleic acid detection of the novel coronavirus, and discusses the main problems existing in the nucleic acid detection in order to provide an important basis for improving the epidemic situation in the war of resistance against Japanese aggression.

Keywords: Novel Coronavirus;Nucleic acid testing;The results of

2019新型冠状病毒（以下简称新冠病毒）是一种新型β属冠状病毒，属于单链RNA病毒，可引起人类呼吸道感染，其基因特征与严重急性呼吸综合征相关冠状病毒和中东呼吸综合征相关冠状病毒有明显区别，基因组序列约由29kb构成，拥有10个基因，可有效编码10个蛋白。由于疫情发展迅速，文章对核酸检测的结果进行了分析：

１新冠病毒核酸检测方法

在疫情初期，最先检出新的病原体的方法是下一代测序技术／高通量测序技术，并很快确定了新冠病毒的核酸序列。随着疫情发展，国内迅速研发出多种应用于新冠病毒核酸检测的试剂盒，绝大多数都基于实时荧光定量PCR技术。从技术角度看，在灵敏度和特异性的平衡上，相较一些快速检测方法，目前平衡性最好的是qPCR检测技术。从过往的重大疫情来看，无论是西非埃博拉病毒、甲型流感还是MERS，qPCR仍是各个部门主推的检测手段，目前我国已批准上市的试剂盒也均以qPCR技术为主。目前新冠病毒核酸检测针对的位点主要包含病毒基因组中３段保守基因序列，即以开放读码框1ab、核壳蛋白（Ｎ）基因以及包膜蛋白（Ｅ）基因作为检测靶标，也有少数商品试剂盒同时检测刺突糖蛋白（Ｓ）基因。

2 新冠病毒核酸检测标本类型及病毒核酸检出情况

2.1不同标本类型中新冠病毒的核酸检测

实验室检测技术指南中，又将标本类型细分，呼吸道标本包含鼻咽拭子、咽拭子、鼻咽抽取物或呼吸道抽取物、深咳痰液、支气管灌洗液、肺泡灌洗液；消化道标本包含粪便及肛拭子；血液标本包含全血及血清标本，并分别有相应的采集及保存要求。由于新冠病毒造成的肺炎为下呼吸道感染，对于已有症状及肺部ＣＴ改变的患者来说，下呼吸道标本（如深咳痰液、灌洗液等）为核酸检测首选，而在新冠肺炎不同病程中取上呼吸道标本（如鼻咽拭子）也能检出病毒核酸。临床上由于多数患者咳痰困难，取下呼吸道灌洗液标本操作的生物安全风险极大，故呼吸道标本以鼻咽拭子及咽拭子为主，而拭子标本采用目前的qPCR试剂盒进行检测，只有３０％～５０％的阳性检出率，大量的假阴性结果无法避免，必须进行多次取样检测或结合其他类型标本检查结果进行确诊。笔者所在研究团队对临床上的新冠病毒疑似病例分别采集不同类型呼吸道标本进行核酸检测，结果初步提示在新冠病毒感染者中，取咽拭子标本及深咳痰液标本的病毒核酸检出率之间有明显差异，咽拭子标本中新冠病毒阳性检出率低于深咳痰液标本。随着对新冠病毒核酸检测的科技攻关，目前已有较多报道提出在患者的粪便标本中可检出病毒核酸，粪便标本将成为临床患者筛查的重要标本类型。目前笔者所在研究团队对呼吸道标本核酸检测确诊的患者进行治疗过程中及出院前的粪便标本进行核酸检测，结果显示粪便标本是患者诊疗过程中一种非常好的标本类型，其核酸检出的持续时间普遍较呼吸道标本更长，同时粪便中新冠病毒核酸阳性与患者的疾病发展进程具有重要的相关性，可能作为一种疗效评估和出院标准的重要检测指标。

2.2不同呼吸道标本取样材料对新冠病毒核酸检测结果的影响

目前相关的诊疗方案及实验室检测技术指南并未提及用于采集鼻咽拭子及咽拭子的拭子种类，但对于呼吸道标本的病毒核酸检测来说，不同的拭子及保存管很大可能将影响核酸检测结果，但相关影响因素尚未见报道。笔者所在研究团队初步在确诊患者中对比了带病毒保存液的植绒拭子标本及无病毒保存液的普通棉签拭子标本的新冠病毒核酸检测结果，发现普通棉签拭子的核酸检出率明显低于带病毒保存液的植绒拭子（P<0.05），普通棉签拭子即便检出，其阳性ＣＴ值也明显大于植绒拭子。

3 新冠病毒核酸检测结果判读

根据目前最新版新冠病毒诊疗指南、防控方案及实验室检测专家共识，对新冠病毒的核酸检测均应至少检测ORF1ab及Ｎ基因（或Ｅ基因），检测的通道同时阳性时可判定为阳性，并均提到阴性结果不能排除新冠病毒感染，应考虑各环节中导致假阴性的原因。同时在实验室检测技术指南中，对于单通道阳性结果，不仅要求重新采样及检测，对结果判定也增加了新的要求，即重新检测结果仍为单通道阳性时，判定核酸检测结果为阳性；同时增加了２种类型标本均检测得到单靶标阳性结果时，应判定核酸检测结果为阳性。对于临床新冠病毒核酸检测中经常出现的单靶标阳性结果，可有如下几点考虑。（１）不同厂家双位点qPCR试剂盒对于新冠病毒Ｎ蛋白基因的扩增灵敏度可能高于ORF1ab检测，将可能导致部分病毒含量较低的标本检测结果为单通道阳性。（2）Ｎ基因在新冠病毒的核酸序列中保守程度不及ORF1ab，故还可能存在少数标本由于其他冠状病毒等的核酸序列与其有交叉，导致Ｎ基因扩增阳性而ORF1ab阴性。

4 结论

综上所述，目前新冠病毒所致疾病其病理过程及临床病程还未完全阐明，实验室检测路径未标准化，加上其核酸检测试剂盒研发时间紧迫，没有足够的评估及大样本量的临床验证，检测效果良莠不齐，故对于临床上新冠病毒核酸检测结果为阴性或单通道阳性的标本均需要谨慎对待，考虑到各环节中可能造成结果不准确的影响因素。各临床实验室应在现有研究报道及文件和指南的基础上，根据自身条件对新冠病毒核酸检测全过程进行严格的质量控制及合理的优化。部分研究团队将着力于探索更加高效的新冠病毒实验室诊断模型，有望在新冠病毒的实验室检测方面大大降低假阴性率，并为更好更快地确诊新冠病毒感染者提供事实依据。

参考文献

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