长链非编码RNA FOXD2-AS1在骨肉瘤中的表达及对骨肉瘤的作用及机制

(整期优先)网络出版时间:2020-11-22
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摘要目的研究长链非编码RNA(lncRNA) FOXD2-AS1在骨肉瘤组织及细胞株中的表达及对细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的作用与机制。方法采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测36例骨肉瘤组织与癌旁组织中FOXD2-AS1的表达量并分析其表达与临床特征的关系。检测FOXD2-AS1在骨肉瘤细胞株(MG63,Saos-2,U2-OS,143B)和人成骨细胞株(hFOB1.19)的表达,并选取两种高表达的细胞株敲降其表达,通过细胞计数试剂盒(CCK-8)实验、膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙锭(PI)流式细胞术、Transwell实验检测增殖、凋亡、侵袭和迁移,并通过RNA结合蛋白免疫沉淀(RNA-IP)、蛋白质印迹法(Western blot)和ChIP检测FOXD2-AS1对EZH2和p21的影响。结果FOXD2-AS1在骨肉瘤组织中的表达高于癌旁组织(t=17.900,P<0.01);并且在体积大、TNM分期高的骨肉瘤组织中表达量更显著(χ2=4.208、9.257,P<0.01)。FOXD2-AS1在骨肉瘤细胞株中的表达量均高于人成骨细胞株(t=14.540、9.970、5.890,P<0.01),尤其是在MG63和Saos-2细胞株中,敲降FOXD2-AS1的表达能够抑制增殖(P<0.05)、促进凋亡(P<0.01)和抑制侵袭和迁移(P<0.01)。RNA-IP、Western blot和ChIP结果显示FOXD2-AS1与EZH2互作,敲降FOXD2-AS1降低了EZH2和H3K27me3与p21启动子区的分子结合。结论FOXD2-AS1能够提示临床预后不良,促进骨肉瘤细胞的恶性生物学行为,其机制可能是通过与EZH2互作,从而抑制p21的表达实现的。