齐齐哈尔市第一医院病理科 黑龙江 齐齐哈尔市 161000
【摘要】目的 以浸润性乳腺癌为研究对象,深入分析其人表皮生长因子受体-2(HER-2)基因扩增、HER-2蛋白表达与患者临床病理特征的关系。方法 围绕174例浸润性乳腺癌患者,用荧光原位杂交(FISH)法测定HER-2基因扩增,用免疫组织化学法(IHC)测定其蛋白表达,探讨其与临床病理特征之间的关系。结果 ER表达与HER-2基因扩增及蛋白表达之间呈负相关(P<0.05)。PR表达及ER/PR状态与HER-2基因扩增之间,呈负相关(P<0.05),但与HER-2蛋白表达之间没有关联(P>0.05)。肿瘤大小与HER-2蛋白表达、基因扩增无关(P>0.05)。结论 IHC(+~+++)的浸润性乳腺癌患者,都可把FISH检测当作对HER-2基因有无扩增进行评价的标准。
【关键词】浸润性乳腺癌;病理特征;人表皮生长因子受体-2
针对人表皮生长因子受体-2(HER-2)基因来讲,从基础层面来分析,即在人染色体17q21予以定位,并且对HER-2/neu蛋白进行编码的一种典型的原癌基因。需要指出的是,对于HER-2基因来分析,其所表现出的扩增情况,以及其蛋白所存在的过表达,通常与乳腺癌(生长、侵袭等)之间存在紧密联系,并且对治疗、预后也有积极意义。如果出现HER-2基因扩增及其蛋白过度表达情况,表明患者有着比较差的内分泌治疗效果,用针对HER-2基因扩增的靶向药物效果理想[1]。本文用免疫组织化学法(IHC),将HER-2蛋白表达当作对象,对其实施详细检测,并且还需要通过荧光原位杂交技术(FISH)的应用,对HER-2基因扩增的相关性实施系统化测定,从中就HER-2基因、蛋白与浸润性乳腺癌在相应病理特征上所存在的关联性展开分析,为此病治疗提供支撑,现作一探讨。
1.资料与方法
1.1临床资料
收集我院2018至2020年间所有诊断为乳腺浸润性癌,同时进行Her-2免疫组化与FISH检测的病例,共计174例,均经具有高级职称医师复诊并诊断无误的病例;其中,最小年龄34岁,最大71岁,平均(50.36±4.19)岁;组织学类型:浸润性小叶癌23例,非特殊型浸润性乳腺癌151例。
1.2方法
针对IHC检测来讲,其所选用的抗体来自福州迈新生物科技公司,FISH检测用的是由北京金普嘉公司所提供的HER-2基因扩增试剂盒。(1)IHC法:采用En Vision法,针对HER-2蛋白所呈现出的阳性表达来分析,实际就是细胞膜为棕色;无论是ER,还是PR,均呈现为阳性表达:而对于细胞核来讲,其则呈棕色。(2)FISH技术:①玻片老化。切片(厚度为3μm),置入涂胶玻片上,烘烤(65℃)过夜。②处理切片。脱蜡复水,采用高压锅进行抗原修复(时间为3min),断开电源后,保持4min;基于混合液当中(其中有HCL0.01mol/L以及5μg /ml的胃蛋白酶溶液)),急性持续的消化,温度为37℃,时间是15分钟;最后乙醇梯度脱水,最终便可得到自然干燥破片。③变性杂交。将事先准备好的混合液(10μl)予以滴入,把组织进行覆盖,并且还需要将盖玻片盖上,且用封片胶进行封固,置入杂交仪中,变性5min,杂交15h(42℃)。④洗涤、判读。当把切片准确取出之后,将位于上方的封片胶去除掉,并且在室温环境下,实施浸泡(2×SSC液中),使盖玻片脱落,并予以干燥处理,滴入10μlDAPI,把杂交去覆盖,且将盖玻片盖上,静置15min,荧光显微镜观察。
1.3观察指标
(1)IHC结果判定[2]。如果没有着色,即(-);全部比例的浸润癌细胞,都现不完整状态,并且还存在一定的细胞膜着色,那么便为(+);如果超过10%浸润癌细胞以呈微弱状态而存在,并且是中等强度,也比较的完整,但需指出的是,细胞膜呈现为棕黄着色(不均匀),即(++);需要强调的是,若在浸润癌细胞总,超过10%呈完整状态,并且在具体的细胞膜棕褐着色上,也比较强,即(+++)。ER、PR判定。在显微镜下,进行100个细胞计数,且以任意5个高倍镜视野当中的阳性细胞在总细胞中的占比及核染色程度当作判定标准,如果着色细胞占整个计数细胞的比重≤5%,即0分;若在6~25%之间,即1分;26~50%,即2分;若大于50%,即3分。与染色强度相结合,无着色、浅黄色、棕黄色、褐黄色分别为0~3分。若0~1分:阴性(-);2~3分:弱阳性(+);4~6分:中等阳性(++);>6分:强阳性(+++)。(2)FISH判定[3]。如果浸润癌区肿瘤细胞HER-2红信号呈现为团状、簇状,即簇状扩增。若与上述情况不同,计数30个细胞,且对HER-2红信号与着丝粒绿信号的比值进行计算,Ratio小于1.8,即阴性;大于2.2:阳性,在1.8~2.2之间,即不确定。
1.4统计学处理
SPSS22.0处理数据,针对计数资料,用X2检验,若组间经比对,差异突出,则由P<0.05予以表示。
2.结果
需要指出的是,针对ER表达来讲,其不仅与HER-2基因扩增之间,还是与蛋白表达之间,均呈现出明显的负相关(P<0.05)。而在具体的PR表达上,以及ER/PR状态上,则与HER-2基因扩增之间,呈负相关(P<0.05),但与HER-2蛋白表达之间没有关联(P>0.05)。肿瘤大小与HER-2蛋白表达、基因扩增无关(P>0.05),见表1。
表1 临床病理特征与HER-2基因扩增以及蛋白表达之间所存在的关联性(例)
病理参数 | FISH | P值(秩和检验) | P值(相关分析) | IHC | P值(秩和检验) | P值(相关分析) | ||||
无扩增 | 点状扩增 | 簇状扩增 | -/+ | ++ | +++ | |||||
ER | ||||||||||
- | 17 | 0 | 37 | <0.05 | <0.05 | 7 | 37 | 14 | >0.05 | <0.05 |
+ | 20 | 8 | 16 | | | 6 | 29 | 10 | | |
++ | 26 | 2 | 5 | | | 12 | 15 | 6 | | |
+++ | 24 | 0 | 2 | | | 8 | 14 | 4 | | |
PR | ||||||||||
- | 26 | 5 | 40 | <0.05 | <0.05 | 11 | 46 | 16 | | |
+ | 25 | 6 | 15 | | | 14 | 27 | 10 | >0.05 | >0.05 |
++ | 23 | 0 | 5 | | | 6 | 14 | 8 | | |
+++ | 12 | 0 | 0 | | | 2 | 8 | 0 | | |
ER/PR | ||||||||||
-/+ | 17 | 0 | 34 | <0.05 | <0.05 | 5 | 35 | 12 | | |
+/- | 9 | 4 | 6 | | | 6 | 11 | 2 | >0.05 | >0.05 |
-/+ | 0 | 0 | 2 | | | 0 | 2 | 0 | | |
+/+ | 61 | 6 | 18 | | | 22 | 47 | 20 | | |
肿瘤直径(cm) | ||||||||||
<2 | 19 | 2 | 16 | >0.05 | >0.05 | 11 | 15 | 10 | >0.05 | >0.05 |
≥2,<5 | 44 | 5 | 31 | | | 22 | 56 | 8 | | |
≥5 | 23 | 4 | 13 | | | 4 | 20 | 16 | | |
3.讨论
针对乳腺癌来讲,其实为一种比较常见且严重的女性恶性肿瘤,同时还是造成女性肿瘤死亡的主要诱因,其诊治始终是临床研究的重心。在当前临床中,用药筛选需要先围绕乳腺癌的常规IHC检测HER-2、ER、PR等蛋白表达[4]。对于HER-2而言,对其实施FISH检测,其实为对乳腺癌实施靶向治疗之首选。对于原癌基因HER-2而言,其实为人HER-2,其编码的蛋白质便是HER-2蛋白。有研究[5]指出,针对与HER-2蛋白相对应的基因扩增或者是存在的过表达来讲,其通常与乳腺癌的发生之间存在着紧密联系,而且还与其进展及预后之间,也存在着紧密关联。HER-2基因扩增的乳腺癌,无论是对常规化疗药物,还是内分泌治疗,均有较差的反应,且预后差,而针对伴有基因扩增的靶向药物,也就是HER-2所对应的单克隆抗体,却有着较好的敏感性。需要指出的是,相关靶向药物虽然已经得到美国FDA认证,但需IHC(+++)或者是经FISH法检测明确为HER-2基因扩增者,方能使用。从本文结果可知,ER表达与HER-2基因扩增及蛋白表达之间呈负相关,PR表达及ER/PR状态与HER-2基因扩增之间呈负相关,但与HER-2蛋白表达间无关联(P>0.05)。此外,肿瘤大小与HER-2蛋白表达、基因扩增无关。因此,IHC对乳腺癌进行检测的常规HER-2、ER、PR结果,能够为临床治疗方案制定及预后判断提供支撑,但仍需将FISH检测方法当作对HER-2基因有无扩增进行评价的标准方法。
参考文献:
[1]徐胜昔, 张乐, 张利群,等. 上皮间质转化相关因子E-钙黏蛋白和波形蛋白在浸润性乳腺癌中的表达及临床意义[J]. 中国妇幼保健, 2019, 34(1):174-176.
[2]马质莹, 尚乃舰, 蔡妙田,等. 孕激素及雌激素受体阳性乳腺癌HER-2受体与钼靶影像学特征及临床病理学特征的相关性分析[J]. 实用肿瘤学杂志, 2019, 33(1):47-51.
[3]王翠翠, 曹燕珍, 梁莉萍,等. PIK3CA基因突变与HER-2表达及基因扩增在乳腺癌中的相关性[J]. 新疆医科大学学报, 2019, 42(12):1569-1573.
[4]Xi Lin, Xin An, Huiling Xiang, et al. Ultrasound Imaging for Detecting Metastasis to Level II and III Axillary Lymph Nodes after Axillary Lymph Node Dissection for Invasive Breast Cancer[J]. Journal of Ultrasound in Medicine,2019,38(11):2925-2934.
[5]陈余英, 周小花, 陈晓文,等. 乳腺浸润性导管癌中ER,PR,Her-2,Ki-67表达与病理特征及预后的相关性[J]. 医学信息, 2020, 33(1):68-71.