热毒清片中甘草的含量测定

热毒清片中甘草的含量测定

张敏 李镇宏 李宁

（云南白药集团股份有限公司 云南昆明 650500）

摘要：目的 研究热毒清片中甘草的含量测定。方法 用高效液相色谱仪对热毒清片所含成份甘草中甘草酸进行含量测定。结果甘草酸，线性为0～0.3168 mg/ml（R² = 1.00），回收率为95.3%，RSD=1.93%。结论：此方法准确、可靠、专属性好，能够有效地热毒清片的质量。

关键词：热毒清片；甘草酸铵；高效液相色谱法；含量测定；

热毒清片是由五味药组成的复方制剂，气清香，味微甜而辛麻。具有清热解毒，消肿散结的功效。用于热毒内盛所致的腮腺炎、扁桃腺炎、喉头炎、上呼吸道感染等症。^[1-2]原标准用四个鉴别对其处方成份进行了质量控制，未对其处方含量进行有效控制，现增加其含量测定，可提升标准提高药品质量，更合理有效的对产品进行管理。

1仪器及试药

1.1仪器：高效液相色谱仪：美国Agilent 1100液相色谱仪系统（配有紫外检测器、四元梯度泵、在线脱气装置、自动进样器、柱温箱）；天平：电子天平（0.1mg、0.001mg）^[6]

1.2试药：乙腈（梯度级，默克），水为超纯水，其它试剂为分析纯；甘草酸铵：欧洲药典参考标准，code：G0460000 Id:00B3P2 Batch:5.0；热毒清片：所有批次的样品由本公司生产。

2.方法及结果

2.1色谱条件及系统适用性实验

色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，使用岛津Wondasil C18 Superb (5μm ,250×4.6mm)色谱柱；以乙腈—0.1%磷酸溶液（37：63）为流动相，检测波长250nm。

2.2对照品溶液的制备

精密称取甘草酸铵对照品适量，加70%乙醇制成每1ml含甘草酸铵70μg的对照品溶液，摇匀，即得（甘草酸重量=甘草酸铵重量/1.0207）。

2.3供试品溶液的制备

取本品，糖衣片祛除包衣，研细，取约1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇25ml，密塞，称定重量，超声30分钟，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得供试品溶液。

2.4提取方法和提取时间的比较：

热毒清片的提取方法采用了超声处理（功率350w、频率35kHz）同回流比较。超声提取时间比较了15min、30min、45min、60min，回流时间比较了30min。同时更换了甲醇、70%乙醇、80%甲醇提取比对。结果比较表明，超声处理与回流处理结果差异不大，故选择超声提取方法。而超声30min提取效果与45min、60min时结果差异不大，把热毒清片的提取时间确定为30min。三种不同试剂提取比对，70%乙醇样品提取略微优于其余两种溶剂，选择此溶剂为提取溶剂。

2.5专属性试验

自制空白样品，同法进行测定，结果显示在与甘草酸铵对照品相同的保留时间位置，无干扰峰出现，试验结果见图1~ 3。

图1样品阴性图谱 图2对照品图谱 图3供试品图谱

2.6精密度实验

分别精密吸取甘草酸对照品溶液（浓度为：0.1948g/ml）10μl，按测定方法重复进样6次，测定峰面积，相对标准偏差为0.10%，表明仪器精密度良好。

2.7线性关系与线性范围考察

精密量取浓度为0.7920mg/ml的甘草酸对照品储备液，分别制成0mg/ml、 0.00792mg/ml、 0.01584mg/ml 、0.03960mg/ml 、0.07920mg/ml 、0.1584mg/ml、0.3168mg/ml系列浓度对照品溶液，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件以峰面积为纵坐标，以甘草酸的浓度（mg/ml）为横坐标作线性回归，绘制标准曲线。分别得回归方程：y = 7971.25x + 1.21 （R² = 1.00 ），结果说明，甘草酸在0～0.3168 mg/ml之间呈良好线性关系。

2.8重复性试验

取6份热毒清片供试品（批号为ZDB1703），及甘草酸铵对照品溶液各10μl，按上述色谱条件测定。计算出甘草酸6次含量测定平均值为1.5969mg/g，RSD%为0.79%，相对标准偏差小于2.0%，说明本方法重复性好。

2.9加样回收率试验

取批号为ZDB1703的热毒清片，分别按0.5：1.0：1.5三组不同浓度添加甘草酸铵对照品储备液，按上述色谱条件测定，甘草酸平均回收率为95.3%（RSD=1.93%），方法符合要求。

2.10稳定性试验

取供试品溶液，在0h到72h共进样7次，上述色谱条件测定，用甘草酸铵的峰面积计算，相对标准偏差为0.63%，结果表明在72h内供试品溶液稳定。

3讨论

甘草苷和甘草酸铵均为甘草的有效成分，均有生物活性，试验中，开始时考虑将两成分作为目标成，但由于试验过程中，两目标成分的溶解性有差异，根据提取工艺的溶剂选择，最终选取甘草酸为其复方制剂中甘草的测定成分，结果表明该方法可行，能够客观反应产品质量。

参考文献

[1]中国药典［S］． 2015 年版． 四部： 9101.

[2]部颁标准《中药成方制剂》第十八册WS₃-B-3479-98热毒清片。