大黄中药材及其醇,水提取物中大黄素成分分析标准物质研究

大黄中药材及其醇,水提取物中大黄素成分分析标准物质研究

蒙明

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摘要：通过“单个组件→复合材料组件“该技术开发了一系列测定大黄中大黄素、大黄95%乙醇提取物和大黄水提取物的标准物质。采用国家一级大黄素标准物质进行定量传递，采用高效液相色谱协同校准法测定各基质中大黄素组分的标准值；通过建立数学模型建立了不确定度评定模型，对各不确定度分量进行了分析，得出了不确定度值。大黄、大黄95%乙醇提取物和大黄水提取物中大黄素的含量分别为/。所建立的量值传递技术路线成功地解决了中药复方体系中化学成分的量值溯源问题。

关键词：大黄；大黄95%乙醇提取物；大黄水提取物；大黄素；标准物质；不确定度

1材料

HPLC：美国安捷伦1200，Dad检测器，安捷伦测试工作站；量表：XS105型，METTLER，灵敏度0.01mg（0≤m≤5g，0.01mg）；5<20g，0.02mg）三电加热恒温箱：北京京科华瑞仪表有限公司，SHHW.420。

国家一级标准物质：GBW09513，大黄素化学纯度标准物质（中国医学院），纯度和不确定度为99.54%±0.18%（k=2，P=0.95）。

甘肃中草药大黄（中国医学科学院药学研究所马林教授）按照《中国药典2010》的要求进行试验。大黄中草药经过除尘和粉碎后，通过50目筛分即可使用。准确称取1克样品，用棕色安瓿瓶密封，以1克的最小包装制备500份大黄成分标准品候选品。本发明涉及一种大黄酒，采用95%以上乙醇5倍为溶剂，经过三次加热回流提取，将提取物减压混合浓缩得到提取物，真空干燥后用40目筛分，在70℃和-0.09MPa的压力下真空干燥，得到95%的大黄，即可使用。准确称取100mg样品放入棕色安瓿瓶中，并将其制成至少500包100mg大黄95%乙醇提取物的候选样品。

大黄在纯水中浸泡6小时，滤出，煮沸1小时，然后滤入纯水。将上述三种提取物合并，在水浴中挥发，在75℃真空干燥，得到大黄水提取物，即可使用。准确称取100mg样品至棕色安瓿瓶中，制成500份大黄水提取物，最小包装为100mg，以形成分析参考材料的候选样品。

甲醇（色谱纯化）；磷酸（北京化工公司）；杭州娃哈哈公司，娃哈哈饮用纯净水。

2方法与结果

2.1高效液相色谱法

2.1.1色谱条件[7-8]

安捷伦SBC18色谱柱（4.6mmx250mm，5μm）；甲醇-0.1%磷酸盐-80:20；流速1.0ml.min-1，柱温30℃，进样量10μL；检测波长254nm。

2.1.2溶液制备方法

标准储备液的制备：准确称取11.08mg化学纯度标准品，置于50ml量瓶中，用色谱柱甲醇充分溶解，定容至刻度，摇匀，制备标准储备液大黄素220.6mg·L-1。将0.1、0.5、1.0、2.5、5.0和10.0ml分别放入10ml容量瓶中，用色谱法稀释至刻度，得到2、2、0、22.1、55和110.320.6mgL-1

准确称取150mg测定大黄中大黄素的标准物质、30mg测定大黄95%乙醇提取物中大黄素含量的标准物质和30mg测定大黄水提取物中大黄素含量的标准物质，放入带塞子的锥形瓶中，准确添加25ml（20ml水提取物），称量质量，加热并回流1小时，冷却，再次称量，用甲醇补充损失的质量，摇匀并过滤。将5ml滤液（10ml水浸出液）放入烧瓶中，除去溶剂，加入10ml8%盐酸溶液，在超声波下超声处理2分钟，然后加入10ml氯仿，回流1小时，冷却，放入分离漏斗中，用少量氯仿清洗容器，加入分离漏斗，将三氯甲烷分离3次，每次10ml，然后将三氯甲烷溶液与三氯甲烷溶液混合，减压排空溶剂，然后用甲醇溶解，然后转移至10ml容量瓶中，加入甲醇至刻度，摇匀过滤，取出剩余滤液。

2.2成分含量标准值定值

根据国家一级材料技术规范，对大黄、大黄95%乙醇提取物和大黄水提取物中大黄素的组成进行了定量分析。用grubs法筛选可疑值，用Cochran等方法验证大黄素的测定结果。通过六家企业联合制定，大黄素的质量标准分别为0.403%和0.000227；大黄95%乙醇提取物中大黄素的质量分数分别为1.151%和0.000273；结果表明，大黄水提物中大黄素的质量分数分别为0.159%和0.00008。

表1大黄、大黄95%乙醇提取物和大黄水提取物中大黄素组分的联合测定

2.3不确定度评定

2.3.1成分含量标准值的不确定度评估

大黄、大黄95%乙醇提取物和大黄水提取物中大黄素含量测定的不确定度主要包括三个方面：一是标准值的不确定度；第二部分是非均匀性引起的不确定性；第三部分是不确定度，即样本的稳定性。测量标准值时，不确定度包括不确定度、中药及其提取物中有效成分提取分析的不确定度、标准曲线拟合、不确定度等。

2.3.2样品均匀性引入的不确定度

根据ISO标准材料指导原则35中描述的均匀性引起的不确定度计算。

大于1时，

小于1时，

在公式中，表示产生均匀性的不确定性，n表示测量次数，MS组之间表示组间的平均方差，MS组内表示平均方差。大黄、大黄95%乙醇提取物和大黄水提取物中大黄素含量的不确定度分别为。

2.3.3样品稳定性引入的不确定度

用不确定度方法来计算稳定性。

S（a）表示斜率产生的不确定度，S表示直线的标准偏差，Xi表示时间，X-表示时间的平均值，St表示稳定性产生的不确定度，t表示时间的t。大黄、大黄95%乙醇提取物和大黄水提取物中大黄素成分的不确定度分别为：

3讨论

本文采用标准物质测定大黄中大黄素的含量，通过“单一化学成分（有效或鉴别）和复合成分系统（中草药和提取物）”的数量转移技术，成功开发了测定大黄95%乙醇提取物中大黄素含量的和测定大黄水提取物中大黄素含量的。本研究开发的测定大黄及其提取物中大黄素的系列标准物质具有准确的量值和不确定度。是国家二级参考资料。具有量值跟踪和量值传递功能。它们可以用于国际交流，为中医药的标准化、现代化和国际化提供准确可靠的参考资料、材料标准和方法。目前，国内中药国家标准物质的研究才刚刚开始。本文开发的系列标准物质在国内尚属首次，填补了国内标准物质的空白，对同类中药标准物质的开发具有指导和示范意义。

参考文献

[1]大黄素国家级纯度有证标准物质研制[J]. 杨德智,郭永辉,张丽,杨世颖,吕扬.中国现代应用药学.2013(09)

[2]虎杖中虎杖苷和白藜芦醇含量标准值与不确定度评估分析方法研究[J]. 刘淑聪,张宝喜,杨世颖,马林,吕扬.中国药业.2013(18)