复方七参片中紫丹参薄层鉴别方法研究

复方七参片中紫丹参薄层鉴别方法研究

龙园,闫壮壮,尹亮洁

云南白药集团股份有限公司，云南 昆明 650500

摘要：建立复方七参片中紫丹参的薄层色谱鉴别方法。考察不同提取溶剂、展开剂、显色剂、点样量及检视条件对薄层色谱分析的影响，确定供试品溶液制备方法和最佳薄层色谱条件，所得结果分离效果较佳，斑点清晰、专属性强、重现性、耐用性好，且阴性对照无干扰。研究结论为该薄层色谱鉴别方法操作简便易行，定性特征明显，可有效鉴别复方七参片中的紫丹参。

关键词：复方七参片；薄层鉴别；紫丹参

1、新修订质量标准草案实验方案研究

1.1．仪器与材料

供试品：复方七参片1批，丹参酮ⅡA对照品：批号：110766-202022，来源：中国食品药品检定研究院

1.2. 方法选择

参照《云南省中药饮片标准》2005版紫丹参检测方法进行改进。《中国药典》2020年版四部通则0502薄层色谱法

2. 方法与结果

2.1．供试品溶液的制备进行了以下几种比较：

2.1.1方法一：取本品15片，粉碎，加乙醚30ml，超声15分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取丹参酮ⅡA对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》一部附录）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-乙酸乙酯（19∶1）为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙红色斑点。结果见图2。

点样量：供试品溶液、对照品溶液各5μl；硅胶板：硅胶G薄层板，品牌：默克  批号：HX03747226；展开剂：苯-乙酸乙酯（19∶1）；显色剂：无；其中：S1为复方七参片，S2为丹参酮ⅡA对照品。

供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙红色斑点。说明该方法可行。

3、新质量标准草案的检测方法的方法验证

为确保该方法的有效可行，按照《中国药典》2020年版四部9101分析方法验证指导原则，对新修订方法的专属性、重现性、耐用性进行验证，以保证检测方法合理可行。

3.1. 专属性

3.1.1方法要求：应能区分可能共存的物质或结构相似的化合物。不含被测成分的供试品，以及结构相似或组分中的有关化合物，应均呈阴性反应。存在其他成分的情况下，薄层色谱中对照斑点应能清晰分离出来。

3.1.2取方法一中3批复方七参片供试品溶液与阴性样品供试品溶液、丹参酮ⅡA对照品溶液进行实验，结果见图3。

点样量：供试品溶液、阴性样品供试品溶液、对照品溶液各5μl；硅胶板：硅胶G薄层板，品牌：默克  批号：HX03747226；展开剂：苯-乙酸乙酯（19∶1）显色剂：无其中： S1、S2、S3为复方七参片，S4为阴性样品，S5为丹参酮ⅡA对照品。

供试品色谱中斑点清晰，显与丹参酮ⅡA对照品相同的橙红色斑点；阴性样品在丹参酮ⅡA对照品位置无斑点，其余斑点与制剂一致，说明阴性无干扰，方法专属性好。

结论：该方法分离度较好，供试品及对照品斑点清晰，无背景干扰，阴性样品无干扰斑点，系统适用性良好，专属性满足要求。

3.1. 重现性

取复方七参片3批，按方法一进行测试，结果见图4。

点样量：供试品溶液、阴性样品供试品溶液、对照品溶液各5μl；硅胶板：硅胶G薄层板，品牌：默克  批号：HX03747226；展开剂：苯-乙酸乙酯（19∶1）；显色剂：无；其中： S1、S2、S3为复方七参片，S4为阴性样品，S5为丹参酮ⅡA对照品。

供试品色谱中，在与丹参酮ⅡA对照品相应的位置上，3批样品均显相同的橙红色斑点。，阴性无干扰。背景干扰较小。说明该方法可适用于不同批次样品。

3.3. 方法耐用性

3.3.1考察不同展开剂比例对结果的影响

取3批供试品溶液、丹参酮ⅡA对照品，点于同一硅胶G薄层板上。标准展开剂为：苯-乙酸乙酯（19∶1），结果见图3。调整展开剂比例，做2组实验，考察耐用性。展开剂1：苯-乙酸乙酯（18∶1），结果见图5。

3.3.1.1点样量：供试品溶液、对照品溶液各5μl；薄层板：硅胶G薄层板，品牌：默克  批号：HX03747226；展开剂：苯-乙酸乙酯（18∶1）；显色剂：无；其中： S1、S2、S3为复方七参片，S4为丹参酮ⅡA对照品。

展开剂2：苯-乙酸乙酯（20∶1），结果见图6。

3.1.1.2点样量：供试品溶液、对照品溶液各5μl；薄层板：硅胶G薄层板，品牌：默克  批号：HX03747226；展开剂：苯-乙酸乙酯（20∶1）；显色剂：无；其中：S1、S2、S3为复方七参片，S4为丹参酮ⅡA对照品。

试验结果：三种比例的展开剂检测结果Rf值略不同，但三批供试品色谱在与丹参酮ⅡA对照品相应的位置上，均显相同的橙红色斑点，阴性无干扰。背景干扰较小。说明稍微调整展开剂比例对结果无影响。

3.1.1更换不同品牌薄层板

以上薄层色谱法实验均采用默克公司硅胶G板，根据市面上用量较多的两家厂商，现分别更换为青岛海洋化工有限公司硅胶G板、百灵威公司硅胶G板进行测试。参照方法一，结果见图7、图8。

3.1.2点样量：供试品溶液、对照品溶液各5μl；薄层板：硅胶G薄层板，品牌：青岛海洋化工有限公司，批号：20220408；展开剂：苯-乙酸乙酯（19∶1）；显色剂：无；其中：S1、S2、S3为复方七参片，S4为丹参酮ⅡA对照品。

3.1.3点样量：供试品溶液、对照品溶液各5μl；薄层板：硅胶G薄层板，品牌：百灵威，批号：L9C0U08；展开剂：苯-乙酸乙酯（19∶1）；显色剂：无；其中：S1、S2、S3为复方七参片，S4为丹参酮ⅡA对照品。

试验结果：更换不同品牌薄层板，Rf值略不同；供试品色谱中，在与丹参酮ⅡA对照品相应的位置上，3批样品均显相同的橙红色斑点，斑点清晰，阴性无干扰，背景干扰较小。说明该方法可适用于不同品牌硅胶G薄层板。

4. 结论

通过对新修订方法进行专属性、重现性、耐用性（不同展开剂比例、不同品牌薄层板）验证，结果表明：斑点清晰，分离效果好，批间重现性好，方法耐用性好，说明方法合理可行，可以用该方法对复方七参片进行紫丹参组分的质量控制。

1