摘要目的明确铁载体毒力基因entB对碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌（CRKP）毒力的影响。方法从昆明医科大学第一附属医院收集到的30株CRKP菌株中筛选出CRKP-27作为实验菌株，规律间隔成簇短回文重复序列（CRISPR）-Cas9基因敲除技术构建entB基因缺失株ΔentB、回补株C-ΔentB，并通过PCR验证敲除及回补是否成功。观察CRKP-27、ΔentB、C-ΔentB菌株的菌落形态并进行拉丝试验，初步了解entB对CRKP菌落形态和毒力表型的影响。绘制菌株生长曲线，测定entB对CRKP菌株生长的影响。铬天青S（CAS）检测液对菌株产铁载体能力进行定量检测。建立小鼠腹腔感染模型，观察小鼠生存率直观了解entB基因对CRKP毒力的影响。计量资料均采用平均数±标准差表示，服从正态分布的数据采用方差分析进行组间比较，不服从正态分布的数据采用Kruskal-Wallis秩和检验。小鼠生存分析用Log-Rank检验进行比较。P<0.05表示差异具有统计学意义。结果PCR结果显示缺失株和回补株构建成功。entB基因对CRKP的菌落形态、荚膜和毒力表型无明显影响。ΔentB组的生长速度明显快于CRKP-27组（P=0.008）和C-ΔentB组（P=0.001），说明entB基因削弱了CRKP菌株的生长能力。entB组与CRKP-27组（P=0.001）和C-ΔentB组（P=0.001）相比铁载体产量明显下降，分别下降11.739 3%和11.964 2%，说明entB基因显著增加了CRKP产铁载体能力。动物实验中，与CRKP-27组（P=0.023）和C-ΔentB组（P=0.024）相比，ΔentB组小鼠生存率明显增高，说明entB基因增加了CRKP菌株的毒力。结论铁载体毒力基因entB明显减弱了菌株的生长能力，但使CRKP产铁载体能力、毒力明显增强。
