小柴胡片提取工艺的研究

小柴胡片提取工艺的研究

 陈琳1, ,肖玉金2

1广西中医药大学附属瑞康医院 530000   2中国人民解放军联勤保障部队第九二三医院 530021

摘 要：目的  优选小柴胡片提取工艺最佳条件。方法：采用正交实验，以提取率、柴胡皂苷a含量和干膏收率为指标，进行综合评分，筛选出最佳提取工艺。结果：药材以10倍量水煎煮3次，每次60分钟，为最佳提取条件。

关键词：小柴胡片；正交实验；最佳提取工艺 

小柴胡片方出自张仲景《伤寒论》的“小柴胡汤”名方，现收载于国家标准《中国药典》2020年版一部[1]，处方由柴胡445g、姜半夏222g、黄芩167g、党参167g、甘草167g、生姜167g、大枣167g组成，为临床常用中成药，具有解表散热，疏肝和胃的作用，全方寒温并用，升降协调，有疏利三焦，通达上下，宣通内外之功[2]。现代药理研究也显示柴胡、黄芩有显著的抗炎及抗病毒作用，柴胡[3]中柴胡皂苷a具有抗炎、调节免疫等作用[4]，是小柴胡片治疗外感病，邪犯少阳证的物质基础。因此，建立本品中柴胡皂苷a的含量测定方法，有助于更好的控制本品的质量。本文采用正交实验的方法，对小柴胡片提取工艺条件进行考察研究。

1   仪器与试药

1.1 仪器  电热鼓风干燥箱（北京市永光明医疗仪器厂，型号规格101-4AS）；电子天平CP114（奥豪斯仪器上海有限公司制造）；高效液相色谱仪（包括四元梯度泵，自动进样器，二极管阵列检测器，柱温箱，型号：UltiMate3000，DIONEX，U.S）；色谱柱C18（4.6mm×250mm，5μm， S/N:0J7U73 ，Kromat Universil）；SK2200HP超声波清洗器（上海科导超声仪器有限公司）；分析天平（型号AB265-SMETTLER TOLEDO, Switzerland，0.00001g）

1.2 材料  乙腈和甲醇均为色谱纯（美国Tedia公司），柴胡皂苷A对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，编号：VIP(AL)0202），乙醇，纯化水，其他均为分析纯。柴胡、党参、大枣、姜半夏、甘草、黄芩、生姜经云南中医学院中药鉴定教研室杨竹雅老师鉴定，符合《中国药典》2020年版（一部）的要求。

2   方法与结果

2.1 渗漉工艺研究  取处方量1/3的姜半夏、生姜的量，碾磨成粗粉加入70%乙醇浸泡、渗漉，采用单渗漉法做单因素实验。取24h、48h、72h的浸泡时间，乙醇浓度70%，流出速度为慢速：1~3ml/min，溶媒量为药材5倍，收集渗漉液，浓缩至恒重，计算结果为72小时所得浸膏得率5.44%为最大。

2.2 药材吸水率测定  取处方1/3的药材量加入10倍药材量水，每隔10分钟测定一次剩余水量，计算吸水率。其结果为90min达到饱和吸水率为22%。

2.3 水提工艺研究  以加水量、煎煮时间、煎煮次数为3因素，选用L9( 33) 正交设计安排试验，将柴胡、党参、大枣、甘草加水浸泡90min后煎煮，待煮沸后加入黄芩，所得滤液浓缩、干燥。见表1、表2、表3。

2.4 柴胡皂苷a含量测定

2.4.1 照高效液相色谱法（中国药典2020年版一部附录VI  D）测定。以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，检测波长为210nm。

2.4.2 对照品溶液的制备  取柴胡皂苷A对照品适量，精密称定，加70%乙醇制成每1ml含40μg的溶液，即得。

2.4.3 供试品溶液的制备  取重量差异项下的本品，研细，取约0.3g，精密称定，置100ml量瓶中，加70%乙醇70ml，超声处理（功率250W，频率50kHz）30分钟，放冷，加70%乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4.4 测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

2.5 实验数据

表1  正交实验因素水平表

表2  正交实验设计及结果

表3  方差分析

2.6 结果分析：由表中极差值可见：C因素有显著的影响，影响因素顺序为C>A>B，实验中采用柴胡皂苷a含量和干膏收率为评价指标，故得出最佳工艺为：10倍量水煎煮3次，每次60分。姜半夏和生姜渗漉单因素实验最佳渗漏条件为：用药材5倍量的70%浓度的乙醇浸泡72小时，以1~3ml/min的流速收集渗漏液所得干浸膏量是最多的。药材吸水率以90min达到饱和吸水率为22%最佳。

3. 讨论

    3.1药材饱和吸水率测定时要注意用水量和时间的控制，如果测定时间相隔太长，则测出的吸水量误差大，不容易选出最佳饱和吸水率，而如果测定时间相隔短则耗时费力；药材用水量以达到能刚好浸没药材的量为最佳。

3.2在煎煮黄芩时要特别注意黄芩需要在药材煎煮开了时才可放入，提前放入黄芩苷含量不够，所以，为了达到黄芩苷含量，需要把黄芩在药材煎煮开了才可以放入。

3.3柴胡皂苷a属于五环三萜类齐果烷型衍生物,具有抗炎、免疫调节以及抗惊厥、抗癫病及抗细胞粘附等多种药理作用。为控制药材质量,一般采用HPLC或HPLC-ELSD法对柴胡中所含柴胡皂昔a进行含量测定,由于柴胡皂昔a的吸收波长在205nm,处于紫外光谱末端,在测定时易受干扰。

3.4在称量干浸膏前必须注意需在干燥器里干燥，以防止空气中的水分被吸入而影响测定。用分析天平测定时必须注意分析天平需要在水平位置和一个方面相对稳定的室内环境中，这样所测得的数值才有科学性。

参考文献：

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典:2020年版一部.北京：中国医药科技出版社,2020:602.

[2]许燕萍, 蔡小平.从升降理论谈“少阳为枢”及小柴胡汤证[J].中医研究.2006,19(9).

[3]吴明芳, 中药柴胡中的有效成分及其药理作用研究进展[J].中华中西医学杂志.2010,8（9）.

[4]租宁，李平.柴胡皂苷的生理作用及临床意义.中国中医药信息杂志，2005,12(4).