聚乙烯醇滴眼液的无菌检查方法验证实验

聚乙烯醇滴眼液的无菌检查方法验证实验

严 ,莹,曹云飞

（镇江市食品药品监督检验中心，江苏 镇江 212003）

【摘要】目的建立聚乙烯醇滴眼液的无菌适用性检查试验。采取的试验方法，严格按照2020年版四部药典1101无菌检查法项下的方法适用性试验的各项具体方法和要求操作。本篇论文经过多次试验后，确定采用薄膜过滤法作为本品无菌试验用检查具体方法，无需冲洗液。阳性管加入金黄色葡萄球菌，生长良好，无抑菌效应。先后平行三次试验，共试验9批次，重复性、重现性、回收率都很稳定，试验组样品管、培养基空白对照管、都没有菌生长，表明该试验方法确定下的各项检验条件是最佳试验方法。

结论：本论文项下的各种条件、实验方法、参数简单、可靠，可以确定为本产品的无菌检查适用性方法。

【关键词】 聚乙烯醇滴眼液；无菌检查法；方法验证  　　  　

　Validation of asepsis test for compound racemic anisodamine eye drops　  　

　 【Abstract】objective to establish a test for the sterility applicability of compound racemic anisodamine eye drops. The test methods adopted strictly follow the specific methods and requirements of the applicability test of the method under the asepsis test method 1101 of the four-part pharmacopoeia (2020 edition). In this paper, after many tests, the membrane filtration method was determined to be adopted as the specific test method for the sterility of the product, without the need for washing liquid. Positive tube added staphylococcus aureus, growth is good, no bacteriostatic effect. Three parallel tests were carried out successively, with 9 batches in total. The repeatability, reproducibility and recovery rate were stable. In the test group, there was no growth of bacteria in the sample tube and the blank culture medium, indicating that the test conditions determined by this test method were the best test methods.

Conclusion: the conditions, experimental methods and parameters under this paper are simple and reliable, which can be determined as the applicable method for sterility inspection of this product.【Key words】 Glucose and sodium chloride injecion Asepsis check Means certification 

1 无菌检查法  　　

从批量生产的产品中随机抽取本品（规格5ml：消旋山莨菪碱1.0mg与硫酸软骨素0.1g）[1]30瓶，采用薄膜过滤的方法，全部抽入三联体过滤器中，以120转/分的转速抽滤，在过滤器中先加入50毫升的稀释液，润湿，再将供试液全部抽滤完，过滤结束后，不需再用稀释液冲洗过滤，再分别在其中的两管中各加入硫乙醇酸盐流体培养基100毫升，其中的一管作为阳性对照管，并用注射器加入1毫升52 cfu/ml的金黄色葡萄球菌用来做阳性对照试验；第三管中加入100毫升TSB培养基；其中两管在35℃培养，另一管在25℃培养，每日观察实验结果，并记录。

2 适用性试验方法验证  　　

2.1 仪器与试药  　　

2.1.1 样品

名称：聚乙烯醇滴眼液规格5ml：消旋山莨菪碱1.0mg与硫酸软骨素0.1g批号：220505

生产厂家：湖北远大天天明制药有限公司

2.1.2 验证用培养基：

1.硫乙醇酸盐流体培养基 批号：3103664 厂家：广东环凯微生物科技有限公司

2. 胰蛋白胨大豆琼脂培养基批号：3102358 厂家：广东环凯微生物科技有限公司

3.营养肉汤培养基   批号：3102499 厂家：广东环凯微生物科技有限公司

4.麦康凯肉汤培养基 批号：3104103 厂家：广东环凯微生物科技有限公司

5. 胰酪大豆胨肉汤培养基批号：3104159 厂家：广东环凯微生物科技有限公司

6.沙氏葡萄糖琼脂培养基[2]批号：3103097 厂家：广东环凯微生物科技有限公司

2.1.3 验证用试验用菌种：

（以上培养基均由中国食品药品检定研究院提供）。  　

2.1.4 仪器：集菌仪、密闭式无菌试验过滤器。  　

2.1.5 试验温度：20℃ 试验湿度：52 ％[3]

2.2 方法：《中国药典2020年版四部》 无菌检查方法验证试验。 

3 试验过程  　

3.1 菌液制备：接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌的新鲜培养物至TSB培养基中，接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30―35℃培养18-24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基或胰酪大豆胨液体琼脂培养基中，23―28℃培养24-48小时，上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu（菌落形成单位）的菌悬液[4]。  　

3.2 菌液计数：以上各试验菌液在供试验的同时，金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、大肠杆菌用营养琼脂[4]，白色念珠菌、黑曲霉菌用胰酪大豆胨液体培养基注皿（1ml）或平板涂布（0.1ml），按规定条件培养后，计数结果均小于100cfu/ml。

3.3 取80瓶聚乙烯醇滴眼液，以供7种试验菌和一份阴性对照组分别验证用。  　

3.4 方法学验证试验  　　

(1)试验组：取60瓶聚乙烯醇滴眼液注入密闭式无菌试验过滤器过滤[5]，注入硫乙醇酸盐流体培养基500 m,100 ml/罐.和胰酪大豆胨液体流体培养基200 ml,00 ml/罐，然后在密闭式无菌试验过滤器中注入1ml,10-100cfu/ ml

试验菌，其中将黑曲霉菌液、白色念珠菌液分别注入已注入胰酪大豆胨液体培养基密闭式无菌试验过滤器中，其余阳性对照用菌分别注入硫乙醇酸盐流体培养基的密闭式无菌试验过滤器中 [6]。

(2)阳性对照组：取密闭无菌试验过滤器，不过滤聚乙烯醇滴眼液，分别注入硫乙醇酸盐流体培养基500 ml,100 ml/罐,和胰酪大豆胨液体流体培养基200 ml,100 ml/罐，然后在密闭式无菌试验过滤器中注入1ml,10-100cfu/ ml

试验菌，其中将黑曲霉菌液、白色念珠菌液分别注入已注入胰酪大豆胨液体培养基密闭式无菌试验过滤器中，其余阳性对照用菌分别注入硫乙醇酸盐流体培养基的密闭式无菌试验过滤器中。作为阳性对照，按规定温度培养3-5天，观察试验菌的生长情况。  　　

(3)阴性对照：取20瓶聚乙烯醇滴眼液注入密闭式无菌试验过滤器，过滤，分别注入硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基各100 ml,100 ml/罐，按规定温度培养，每天观察并记录。  　　

(4)培养基对照组：将本实验中所涉及到的所有培养基同步试验，在同样条件下灭菌使用，分别加入过滤器中，每管中加入100毫升，分别在各自规定温度条件下培养，每天观察并记录。  　

　4 验证结论

本篇论文经过多次试验后，确定采用薄膜过滤法作为本品无菌试验用检查具体方法，无需冲洗液。阳性管加入金黄色葡萄球菌，生长良好，无抑菌效应。先后平行三次试验，共试验9批次，重复性、重现性、回收率都很稳定，试验组样品管、培养基空白对照管、都没有菌生长，表明该试验方法确定下的各项检验条件是最佳试验方法。

参考文献

[1] 宋明泽. 葡萄糖氯化钠注射液无菌检查方法学验证[J]. 中国中医药咨讯, 2012, 04(1):24.

[2] 聂渝琼 嵇扬 高锦 张润婕 周尚。维生素B6氯化钠注射液无菌检查方法验证实验. 解放军药学学报2008（6）： 563-564.

[3] 张迪, 于明, 孙宽, et al. 奥扎格雷钠氯化钠/葡萄糖注射液质量分析[C]// 全国药品质量分析论坛. 2012.

[4] 张凌艳, 李贺一. 乙酰谷酰氨氯化钠注射液无菌检查方法学研究[J]. 黑龙江医药, 2011(02):40-41.

[5] 吴羽岚, 嵇海澄. 盐酸左氧氟沙星氯化钠注射液无菌检查方法学验证% [J]. 中国医药科学, 2013, 000(013):95-96.

[6] 王沁馨. 格隆溴铵注射液无菌检查方法验证[C]// 医药导报(2013年8月第32卷增刊). 2013.

第一作者：严莹，女，汉，镇江市食品药品监督检验中心，江苏 镇江人，药师，研究方向：药物分析、质量控制。

通讯作者：曹云飞，男，汉，镇江市食品药品监督检验中心，江苏阜宁人，副主任药师，研究方向：药物分析、质量控制。