透明质酸钠对实验性牙间乳头缺失大鼠的影响研究

透明质酸钠对实验性牙间乳头缺失大鼠的影响研究

诸帆迪 ,许芸

井冈山大学附属医院 江西 吉安 343000

摘要：目的：探索透明质酸钠（HA）对实验性牙间乳头缺失（OGE）大鼠的影响。方法：将大鼠造模后分为空白组、PBS组、HA组，分别使用PBS、HA进行局部注射，2周后检测血清促血管化及成骨因子、炎症因子水平。结果：与PBS组相比，HA组血清VEGF、BMP-2、WISP-1表达升高，炎性因子降低，差异具有统计学意义。结论：HA具有促进OGE大鼠牙间乳头修复的作用。

关键词：透明质酸钠；牙间乳头；模型

基金项目：江西省卫健委科技计划（S K J P 2 2 0 2 1 2 3 3 0 ）

作者简介：诸帆迪，女，主治医师，主要从事牙周病临床诊疗工作

牙间乳头作为牙龈组织的重要组成之一，是牙周组织的主要保护屏障。健康的牙间乳头充盈于邻间隙，具有防止食物嵌塞，抵抗微生物侵袭等作用，并影响着口腔美学[1]。受牙间隙有限的空间和血供的影响，牙间乳头一旦退缩，很难恢复至原有状况，不仅引起发音困难、食物嵌塞等问题，更破坏了牙间区域的协调美，影响患者心理。当前牙间乳头重建主要包括牙周手术、正畸和修复治疗等，虽取得一定进展，但仍有一定局限性。研究发现HA具有抗炎、抗水肿、骨诱导和促血管生成等作用，HA局部注射重建牙间乳头是当前研究热点。本研究通过建立OGE大鼠模型，观察HA对OGE大鼠的作用，为该疗法提供理论支持。

1 材料与方法

1.1建立OGE模型

选用9周龄60只SD大鼠，购于湖南斯莱克景达公司，使用直径为9mm的结扎丝，制作成含50gf 正畸力的U型钢丝，光固化复合树脂固将其定于SD大鼠两下切牙。在结扎丝的作用下，两切牙切端逐渐远离，最终牙间乳头退缩，形态变得平缓。

1.2分组给药

将建好模型的SD大鼠随机分为空白组(n=5)、PBS组(n=25)和HA组(n=30)。

分别使用PBS缓冲液、透明质酸钠在形成开放性牙龈缺损部位的牙间乳头下1~2mm处局部注射相应药物，HA组间隔1周后进行第二次注射，期间正常喂养。

1.4标本采集

注射第2周后处死SD大鼠，Elisa检测血清促血管化、成骨因子及炎症因子水平。采用蛋白裂解液提取总蛋白，置入酶标板孔中，滴入生物素标记抗体，加入ABC工作液，TMB显色，酶标仪在波长450nm测定各孔的OD值，绘制标准曲线。接着取大鼠下颌骨置于多聚甲醛中固定，将标本放置于10%EDTA 中进行4周脱钙，最后对标本进行脱水并用石蜡包埋，切片，免疫组化染色，检测VEGF、BMP-2、WISP-1阳性细胞中的表达。

2结果

2.1 Elisa检测VEGF、BMP-2、WISP-1及炎性因子比较

与PBS组相比，HA组血清VEGF、BMP-2、WISP-1表达水平升高，炎性因子降低(P<0.05)，表1。

表1各组大鼠MMP及炎性因子水平（ng/ml ）

2.2免疫组化检测VEGF、BMP-2、WISP-1阳性细胞表达

VEGF、BMP-2、WISP-1免疫阳性细胞在显微镜下主要呈现出棕褐色，表达于胞浆，与PBS组相比，HA组VEGF、BMP-2、WISP-1表达增加(P<0.05)，表2。

表2各组大鼠免疫阳性细胞数表达比较

3讨论

牙间乳头形态是影响口腔软组织美观的重要因素之一，龈乳头缺失会导致“黑三角”的形成，随着人们审美观的提高，黑三角问题也逐步受到重视。当前，许多技术应用于牙龈修复：包括牙周手术、正畸和修复治疗等，然而这些方法大多具有创伤性，且最终效果难以预测。近年来，应用HA治疗黑三角得到口腔医师的关注。HA制剂在医学美容领域已成熟应用，随着研究进展，HA在牙周组织中也已被识别：即在牙龈与牙周膜非矿化的组织中含量较多，在矿化组织牙槽骨与牙骨质中含量偏低[2]。在此基础上，有学者尝试使用HA局部注射重建牙间乳头，该方法能在一定范围内实现牙龈软组织增量和塑形[3]，具有一定的应用前景。关于HA重建缺失牙龈乳头的机制，研究发现[4]局部注射HA的龈乳头，其胶原纤维数量随着时间的增加而增加，并促进龈乳头缺失部位牙槽骨新生的作用，另外可能与HA具有很强的吸水与保水的功能，使龈乳头得到充盈有关。因此，相较于之前疗法，HA注射修复的方法更为经济便捷，易被患者接受。

VEGF、BMP-2等骨诱导活性细胞因子，存在于牙周膜成纤维细胞、成骨细胞及成牙骨质细胞中，能够调节成骨分化，促进骨组织生长，对牙周组织生长、代谢及修复发挥重要作用

[5]。本结果显示：与PBS组相比，HA组大鼠VEGF、BMP-2等因子水平明显升高，说明HA可能促进BMP-2等因子表达，进而促进OGE大鼠龈乳头的修复。

炎性反应在OGE的发病过程中亦不容忽视[6]，牙周局部炎症会破坏上皮的完整性，使牙周的炎症介质：如白细胞介素等细胞因子从牙周进入血液循环和外周免疫器官，引起系统性炎症反应[7-8]，炎症反应是牙周致病菌免疫反应的主要组成部分，在牙周组织病理改变中发挥关键作用，并能调节牙槽骨代谢。以TNF-a、IL-6为代表的炎症介质刺激参与趋化因子细胞迁移到感染和炎症部位，增强免疫反应，加重牙龈组织病理反应。本结果显示：与PBS组相比，HA组大鼠组织中炎性因子水平降低，说明血HA可能通过抑制抑制炎症反应，进而促进OGE大鼠牙周组织的修复。

参考文献

[1]徐梦希.上颌中切牙牙周生物型分类的实验研究[J].泰山医学院学报,2020,41(6):401-403

[2]胡媛媛.应用透明质酸钠凝胶重建牙龈乳头[J].实用口腔医学杂志,2020,36(3):501-505

[3]张一丁.玻尿酸对SD大鼠缺损龈乳头组织作用的研究[C].中华口腔医学会专业委员会论文汇编

[4]章一帆. 玻尿酸重建缺失龈乳头的机制研究[C].第十三次全国老年口腔医学学术年会论文汇编

[5]王艳红.血竭提取物对牙龈炎大鼠牙周组织修复及TLR4/NF-κB信号通路的影响[J].上海口腔医学,2022,31(6):602-606

[6]郭杨柳.LPS激活TLR4抑制BMP9诱导iMEFs成骨分化[J].基础医学与临床,2017,37(1):25-31

[7]艾黄萍.益气升阳固齿法调节SD大鼠实验性牙周炎微环境免疫应答的研究[D].成都中医药大学,2020

[8]李鹏. 附着龈重建在口腔种植 修复中的应用[J].上海口腔医学, 2013,22 (2)：214-218