基于微生物洁净室管理与检测质量控制规程分析

基于微生物洁净室管理与检测质量控制规程分析

吴高兵

江苏中恒检测技术有限公司  江苏 南京 210032

摘要：尘埃粒子和微生物是洁净环境重要控制指标，要保持良好的洁净环境，就需要建立行之有效的检测控制措施，但有些时候由于现场实际条件的限制不能做到全项目、全天候、全方位的实时检测，因而需要优先选择合适的检测方式和监测频次，加强质量管理，确保检测过程结果的准确性和安全性，持续保持环境的洁净。

关键词：微生物检验；环境监测；GMP；洁净环境

引言

我国部分微生物检测技术取得了丰富的科研成果，同时提供了多种微生物检测的方法和产品，在一定程度上保证了检测安全。为了保持操作环境的洁净，需要严格遵守相关的操作和维护要求，避免清洁室内尘粒、微生物的停留及滋生，确保设备和人员的安全。

一、对洁净室和空调机组的设计和安装规定

在洁净室（区）设计安装中，净化空调系统的现场施工是洁净室工程施工不可或缺的一部分，必须严格依据图纸和规范要求的施工标准、计划进度和洁净环境独特要求的施工工艺进行总体安排，一般净化空调系统的现场施工应满足以下要求：

1、负责洁净室净化空调系统工程的施工单位应取得相应的现场施工企业资质等级和相应的管理体系，人员具备相应资质和培训。

2、负责洁净室净化空调系统工程的施工单位，应当按照洁净室工程的整体施工工艺和进度表，统筹安排工程施工，并注意与土建施工和技术专业技术工种的密切配合。施工过程中，按要求与各学科工程交接，认真申请必要的交接程序，并签署记录文件。部分记录文件由业主项目监理签字确认。

3、洁净室净化空调系统的现场施工及其通风管及附件的生产、机械设备管道的组装、验收和测试必须符合相应的法律法规，有完整验收记录并附凭证。

4、洁净室的空气洁净度等级不同，对洁净室产品的施工要求也不同，具体项目的具体处置方案也不同。现场施工应严格按照设计图纸和合同进行。因某些原因必须调整施工阶段或方案时，应获得项目监理和设计师的许可，并征得业主的意见允许。施工过程中，施工单位按要求出具相应的施工图，必须由设计方确定。

5、必须按照标准和设计图纸的有关规定和要求接受施工过程中所需的材料、备件或半成品加工。经项目监理批准，应做好质量记录。

6、隐蔽工程装修必须经过工程监理工程验收后才能隐蔽，同时做好质量记录。

7、净化空调系统的分支工程一般包括：水电布局、通风管制作安装、消声设备及附件安装、风机安装、空调通风设备组装、网络检测、高效出风口装配、局部净化设备装配、通风管和机器保温等，均需要分步检测验收。

    二、符合GMP要求的洁净环境检测

    洁净环境检测的目的是确保洁净室环境符合规范的要求，确保生产和检测过程中的环境卫生和产品质量，以及人员对工作环境的要求。以下是按GMP和中国药典洁净室洁净度检测的常用项目方法和规范：

1、微生物检测

洁净区微生物检测主要用于检测洁净室内细菌、霉菌、酵母菌等微生物的总数，通常包括沉降菌和浮游菌。检测结果必须符合医药工业洁净室设计标准及GMP等对不同洁净度等级的要求。

2、悬浮粒子

悬浮粒子主要是通过尘埃粒子计数器检测洁净室空气中颗粒污染物的数量和尺寸，包括激光粒度分析、显微镜和电子计数器等。检测结果必须符合医药工业洁净室设计标准及GMP等，如不同洁净度等级分类对悬浮粒子的控制限度要求。

3、检测表面菌落总数

表面菌落总数检测主要用于检测洁净室墙壁、台面或设备表面，以及操作人员表面的微生物菌落数量，通常包括试子法、模型法和细胞培养皿法。检测结果必须符合要求。

4、风速、换气次数检测

洁净室内的送风量以每小时换气次数表示（房间总送风量除以容积），一般应满足每人每小时40m³新鲜空气；对于单向流洁净室，采用风速仪测定送风区域的风速，平均风速应为0.36m/s～0.54m/s。

5、静压差

洁净室压差检测主要用于验证设施与周围环境之间、设施内各空间保持规定压差的能力，确保两个区域之间的气流保持一个方向，减少相互污染。常用的检测设备包括压差表和风速传感器。为了持续有效监控压差，一般有控制要求的两个区域之间安装压差计，实时可视。相邻洁净室之间静压差不小于5Pa，不同级别洁净室之间以及洁净室与非洁净室之间静压差不小10Pa。

6、照度

照明强度检查主要用于检测洁净室内照明灯具的强度，确保各工作区域照明满载目视要求。常用的仪器为照度计，主要操作区域照度不低于300Lux，辅助区域照度不低于150Lux。

7、温湿度

洁净室内温湿度控制主要是为了维持操作人员的舒适环境，同时湿度过高容易滋生霉菌，湿度过低容易起尘、起静电。一般采用手持式温湿度计进行测量，也可以在洁净室安装温湿度表随时监控。一般无特殊要求的洁净区应控制温度18℃～26℃，相对湿度45%RH～65%RH。

8、噪声

噪声检测主要用于检测洁净室（区）内的噪声强度，以确保所有工作的自然环境符合国家要求和员工的安全和健康。常用的包括噪声计和频谱仪。监测结果必须符合GMP标准，非单向流洁净室噪声应不大于60dB(A)。

以上是GMP洁净室环境检测项目的常用方法和要求。需要注意的是，不同的国家和地区可能有不同的标准和测试规定，必须根据当地的相关规定进行选择和实施。同时，应及时记录、分析和处理监测结果，以确保洁净室的内部环境质量和可靠性。

三、环境监测偏差或纠偏装置处理方法

1、检测设备

实验仪器是微生物检测工作的前提，实验室应制定和执行设备的运行、维护、验证和校准程序。微生物检测涉及的实验仪器主要包括电子分析天平和pH计、玻璃器皿、高压蒸汽灭菌器、恒温培养箱、冷藏柜、冰箱、超净工作台、生物显微镜及自动微生物鉴定装置等。特别要注意的是，高压蒸汽灭菌器和超净工作台很容易被忽视。一般建议每次使用时都要用灭菌指示剂证明该批次灭菌的实际效果，并按时用生物指示剂进行再验证。除每年按时计量检定外，超净工作台还需检查气流模式和高效过滤器检漏。使用恒温培养箱时，应注意温度校准值，并加强温度持续监控。自动微生物识别系统软件一般没有测量验证或校正技术规范，可按时使用标准菌种进行验证。

2、检查环境控制

微生物检验实验室应注重清洁，密切关注以下方面：

一是清洁周期。一些微生物检测过程与实验室的清洁及维护水平密切相关。实验室的洁净度必须合格，并按规定设定清洁周期时间。一般来说，实验室必须随时清洁。实验结束后，应进行及时的清洁，对于相关的实验仪器设备，必须消毒或灭菌，从内到外，从上到下进行。在清洁过程中，消毒剂的应用应注意属性的差异，并按一定的周期时间轮换使用。

二是监控频次。一般来说，重点监测项目，如尘埃粒子、浮游菌、沉降菌，对于C级（10000级）洁净区应做到每个月监测一次，对于D级（100000级）洁净区应做到每个季度监测一次，并根据历史数据结合不同控制标准，制订合理的警戒线和纠偏限，定期回顾和评价。

3、实验质量控制

实验质量控制是微生物检测的重要组成部分，其综合管理主要包括以下几个方面：一是严格控制试验规范。我国对一些微生物检测建立了相应的规范，在实验过程中，相关负责人要进行深入的研究，牢牢把握研究对象。二是严格控制操作程序流程。在实验操作中，试验操作过程将对实验结论产生深远影响，此时需要严格执行规定的程序。在步骤操作环节中，应根据不同的程序流程选择合适的方法，以确保操作方法的合理性和有效性，并全面记录每个操作步骤。在操作过程中，检验人员总数控制在一定范围内，防止人为影响。再次，严格控制检测试剂及培养基。在某些微生物检测环节中使用的检测试剂和培养基应符合相应的标准，不得出现超期和未通过性能测试的情况。最后，加强过程监督管理。规范所有记录，并严格执行每个流程，确保存储和培养条件符合要求，保证过程和结果的有效溯源。

四、在测试层面降低安全隐患的措施

作为洁净室的使用单位，可采用以下方法来维护洁净室，降低风险：定期进行洁净室检测，确保洁净室的洁净度等级符合规定；清理清洁区域，制定进入清洁区域的技术规范，确保污垢、灰尘、细菌不易进入清洁区域；建立洁净室使用异常情况处理预案，妥善处理洁净室遇到的问题；加强洁净室物品管理，确保所使用的洁净室用具保持清洁，不造成二次污染；定期培训，确保操作人员掌握一定的操作步骤和注意事项。通过上述对策，可以有效提高洁净室的管理能力和检测质量，降低洁净室应用过程中遇到的风险，确保洁净室内开展的生产、研发、检测项目的顺利实施。

1、 进入洁净室的人员必须遵从工作流程和清洁、更衣程序，退进出洁净室时，必须按上述顺序和路经进行，不得将清洁用具带出规定区域。

2、如果有吹淋室，进入清洁室前必须按规定进行风淋和淋浴。同时，严格执行风淋室的规格和尺寸使用要求，控制每次进入风淋室的人数。离心风机或开关电源不能强制关闭。一般来说，通过风淋室，人身安全表面释放的粉尘颗粒数量减少40%以上。

3、为不影响室内洁净气流型式，工作区域不得随意放置物品，送风口、回风口周围不得堆放物品。实验操作应在净化工作台或气流保护下进行。

4、与实验操作不相关的物品不能带到洁净室。禁止在洁净室吸烟和饮食。进入洁净室前，私人物品必须放入指定的柜子，去除化妆品和配饰，更换指定的洁净工作服和鞋子。戴帽子时，要先把头发全部遮住，脚套要先把裤腿衣牢牢包在脚套里。脱下干净的衣服时，一定要避免工作服接触路面、鞋柜、台面和其他物品。进入洁净室后，按照进入洁净室的有关规定顺序进行。

五、清洁室内操作人员管理方法

洁净室的风险主要来自人、物、外部环境污染。

1、手是交叉感染的媒体。操作人员进入清洁室时应洗手消毒。不要用力触摸高净化设备和高净化处理包装产品；直接接触药品的操作人员戴无菌手套后还需进行消毒。

2、不允许以下人员进入洁净室：发烧、感冒、干咳、皮肤湿疹等疾病患者；未按规定洗掉护肤品、甲油、不穿洁净衣服的；操作人员应每天洗头、换衣服、修指甲。

3、操作人员在洁净室工作时，动作要轻缓，严格遵守操作流程，不做非必要的动作和姿势，不要做不必要的姿势；不要穿洁净服离开洁净区。

4、在干净的房间里，要按要求戴手套，不要露出手腕，胶手套要更换。

5、进入洁净室的人员应经过相应的培训和考核：掌握洁净室的特点、结构和清洁技术的一般专业知识、工作人员的净化处理流程和物品的净化处理路径、清洁服装的应用和清洁规定、无尘室的清洁和消毒、洁净室的安全设备和安全规定。

6、洁净服应采用减少产尘量、防静电的面料制成。清洁鞋的基本要求是可清洁和消毒的。一般来说，穿洁净工作服的人走路时，表面释放的粒子数量比穿普通衣服和裤子的人少40%～60%。因此，具有洁净度等级要求厂房的运行和维护非常重要。

7、洁净服应有专门的管理制度，定期维护和清洁。一般的洁净区比如十万级洁净区洁净服每周清洗一次，无菌区洁净服按批次清洗灭菌，并定期检查是否损坏。

8、洁净区的“5S”运行需要随时随地保证，然后由管理人员进行区域定位管理。

六、洁净室定期消毒，空调系统的定期维护

空调机组设备是保证房间内空气清洁度等级的关键设备，包括各种过滤装置、净化工作台、层流盖、空气淋浴房、传动窗、中央空调装置等，其稳定维护和定期维护是保证洁净室清洁度等级的必要条件。

洁净室净化空调应保持连续开启状态，洁净区非使用时段，可以将空调机组频率设置为值班状态；每次使用前，需调整为正常运行状态，自净半小时以上，方能开始操作。节假日期间或长期不使用，可关闭空调机组；再次使用前应进行彻底清洁并进行空气消毒。

洁净室的清洁一般需要在实验操作前后分别进行；清洁操作必须在净化空调系统运行达到规定时间后才能开始。为避免交叉污染，洁净室的清洁器具应根据产品优势、工艺流程规定和洁净室等级分时、分区专用。清洁工具一般采用集中移动式和便携式移动真空清洁机械设备。如果没有上述前提，也可以用专用洁净抹布擦拭，一般每天1次或根据使用频次多次清洁。操作台面和工具一般每天清洁一次；洁净室应每月一次进行空气消毒，必要时可增加消毒频次。

结语

微生物洁净室是开展微生物检测的重要关键，而且洁净室也是微生物检测的重要关键的物质根本。为实现洁净实验室环境维持适当的水平，应保持空调系统的良好运行状态，加强维护，同时微生物实验室人员应遵守良好的规范，定期进行环境监控。

参考文献

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[2]黄启红,熊娟,蔡大川,张志军,黄璇莹,陈敏儿,伍玲燕.微生物洁净室管理与检测质量控制规程的探讨[J].食品工程,2018(02):5-8.

[3]国家标准,洁净室施工及验收规范，GB 50591-2010.

[4]国家标准,医药工业洁净厂房设计标准，GB 50457-2019.

[5]国家标准,洁净室及相关受控环境 第3部分：检测方法，GB/T 25915.3-2010/ISO 14644-3：2005.