微生物常规鉴定技术

微生物常规鉴定技术

何燕

天全县中医医院  四川雅安  625500

近几年以来，随着我国科学技术的快速更新与发展，生物科学技术也逐渐被被广泛应用在各领域当中,同时这也与人们的生活息息相关。在人们生活水平大幅度提升的同时，人们也越来越重视生活的品质，也使生物技术的有效应用范围更进一步的扩大，而微生物常规检定技术也对临床试验分析有着较大的影响，同时也是常规鉴定技术之一。

1、微生物的分类

微生物分为四种：分别为细菌、酿酒酵母、藻类、草履虫等。细菌有分为乳酸菌、大肠杆菌、根瘤菌、枯草杆菌以及光合细菌；藻类又分为小球藻、念球藻以及硅藻。

2、微生物形态结构与培养特性的仔细观察

  （1）微生物形态结构是观察培养工作的重点，目前主要利用显微镜作为主要观察工具，同时利用生物染色技术对微生物进行处理，此时可直观地看到微生物的具体形状、大小、细胞壁、细胞膜、鞭毛以及染色特性等。根据微生物展示出的不同特征与形态结构，人们能够很轻易地进行微生物的对比与鉴别。

  （2）细菌细胞经过一段时间的成长与繁殖将在实验室固体培养基表面形成的具有一定区域面积的群体，这就是菌落。但由于不同微生物的生长特性、营养要求等存在差异，因此其在不同培养基中的成长繁殖状态也不相同，这样的差异也会体现在菌落形态中。经过实验测试可知，相同微生物在同一培养基中的成长繁殖状态趋于稳定，因此可以根据培养基表面菌落的不同形态进行微生物类型的鉴别与区别。

  （3）用于观察和鉴别不同细菌类型的培养特征包括培养基表面菌落的大小、形态、颜色、透明度、质地、边缘特征、迁移性等，甚至还可以通过液体培养环境下液体表面的浑浊度、沉淀情况进行鉴别。

（4）霉菌与酵母菌是常见的细菌，也是两种结构差异较大、鉴别难度较低的菌类。大部分酵母菌无丝状体，因此其在固体培养基表面形成的菌落与细菌类似，但能够观察到其菌落面积与厚度更大。如果采用液体培养方式则同样呈现出与细菌类似的形态，如均匀生长、液面菌膜等。与酵母菌不同，霉菌本身具有分支的丝状体，其菌丝又粗又长，因此在培养基中会出现菌丝伸长沿培养基表面蔓延的情况，具有明显形态特征。从颜色方面来看，霉菌的基内菌丝、气生菌丝以及孢子丝在培养基中都会显示出不一样的颜色，这就会使得整个菌落边缘与中心呈现不同色彩、正面与背面呈现不同色彩。如青霉菌的孢子呈现青绿色，气生菌丝则无色，基内菌丝呈现出褐色。从形态上来看，霉菌还会在固体培养表面形成了絮状、绒毛状以及蜘蛛网状菌落，这也能够帮助人们识别不同的菌种。

3、生理生化试验

微生物生化反应就是利用微生物的化学特性通过化学反应的方法对其代谢产物进行测定，主要应用鉴别基本形态特征相似的微生物，作为观察鉴别的辅助手段，也是微生物分类鉴定的重要依据。以下介绍目前常用的微生物检验生化试验：

3.1糖酵解试验

糖是重要的营养物质，不同微生物对于糖类的利用度、分解能力以及代谢产物均有差异，此时就可以通过对微生物开展糖酵解试验对比分析其反应过程与代谢产物从而鉴定微生物。一般情况下，只要能够利用糖类物质，那么都可以使用指示剂与发酵管进行检验。

3.2淀粉水解试验

经过实验发现，部分细菌可以产生分解淀粉的酶，代谢产生麦芽糖或葡萄糖，若发生水解反应，那么此时使用碘进行测试就不会变成蓝色。

3.3 V-P试验

利用部分细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基分解葡萄糖产生丙酮酸、丙酮酸缩合、脱羧成乙酰甲基甲醇等物质的原理可进行细菌类型的鉴别，以上代谢产物在强碱环境中会与空气中的氧气发生反应，产生二乙酰，而二乙酰由能够与蛋白胨中的胍基结合形成红色化合物，此时就能够识别细菌，以上反应就是V－P（+）反应。

3.4甲基红（Methyl Red）试验

肠杆菌科的各种菌都能够进行葡萄糖的发酵分解，期间会产生大量丙酮酸，但不同细菌的糖代谢途径又存在差异，因此其最终的代谢物可能会有乳酸、醋酸、甲酸等大量酸性产物，此时对培养基环境PH值进行检测能够明显看到酸性指标，同时出现甲基红指示剂变红现象。

3.5靛基质试验

还有一些细菌能够与蛋白胨发生反应生成吲哚，而吲哚则可通过简单的显色反应进行检验。其主要原理就是吲哚和对二甲基氨基苯醛反应形成红色化合物——玫瑰吲哚。

3.6硝酸盐还原试验

一些细菌能够还原硝酸盐，反应生成硝酸盐、氨以及氮气等物质，而亚硝酸盐则可通过硝酸试剂进行检验。

3.7明胶液化试验

对于具有明胶酶的细菌，可利用明胶液化试验进行检验，其能够将明胶水解，代谢成氨基酸，此时明胶失去凝胶性质，出现明显液化现象。 

3.8尿素酶试验

有的细菌具有尿素酶，在尿素接触是发生反应，将尿素分解为氨，氨溶于水则会导致培养基变为碱性环境，若滴入酚酞溶液则呈现出红色。其中的尿素酶并不是诱导酶，属于细菌自身合成的酶，且试验中保持尿素酶活性的最佳PH值为7.0。

3.9氧化酶试验

氧化酶即细胞色素氧化酶，是细胞色素呼吸酶系统的终末呼吸酶。其能够使细胞色素C氧化，之后与苯二胺再次发生氧化反应，整个过程能够呈现出颜色的变化。  　　

3.10.硫化氢试验

有的细菌能够分解含硫氨基酸或含硫化合物，反应后产生硫化氢气体，这部分气体与铅盐或低铁盐接触反应之后将会生成黑色沉淀物。

3.11.三糖铁琼脂试验

具体操作即使用接种针挑取待试菌菌落或纯培养物，之后将其穿刺接种并涂布于斜面，注意控制培养环境温度为36±1℃，持续培养24h后即可观察结果。

3.12.硫化氢-靛基质-动力琼脂试验

具体操作即使用接种针挑取菌落或纯养物穿刺接种，深度控制在二分之一，注意控制培养环境温度为36±1℃，持续培养24h后即可观察结果。若代谢产物为黑色则属于硫化氢阳性，若产物整体混浊或沿穿刺线向外生长则显示为有动力，可滴加Kovacs氏试剂于表面，反应10min左右观察培养基颜色，若呈现出红色说明靛基质为阳性。

以上就是笔者为大家详细介绍的微生物常规鉴定技术，希望能帮助大家认识微生物常规鉴定技术。