STR-PCR在异基因造血干细胞移植中植入效果监测的应用

STR-PCR在异基因造血干细胞移植中植入效果监测的应用

刘晓星

山东银丰金正司法鉴定中心/银丰基因科技有限公司 250000

摘要：目的：本研究旨在探讨短串联重复多态性（STR-PCR）在异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）中植入效果监测中的应用。方法：我们回顾性分析了2022年3月～2023年3月100例接受allo-HSCT的患者的数据。在移植前，我们采集了供者和受者的外周血样本，并进行了STR-PCR分析。术后，我们每周采集受者的外周血样本，并通过STR-PCR检测移植物中的供者和受者的比例。结果：对于监测到嵌合状态的25例患者，具体结果表明不同患者的嵌合状态出现时间不一致。即使是同一患者，其嵌合状态也存在变化。这可能是由于嵌合比例的变化以及检测能力的影响。在具体检出嵌合体的位点上也存在变化。即使患者已经完全转为供者源状态，仍有可能转变为嵌合体状态。通过对临床信息的追踪，发现嵌合状态的出现常伴随着患者疾病复发、加重甚至死亡等情况。在100例病例中，监测到有嵌合现象的患者疾病预后均较差。结论：STR-PCR在allo-HSCT中的植入效果监测中具有较高的准确性和灵敏性。通过监测供者和受者的DNA比例变化，我们可以及时评估移植物的植入效果，并判断移植物是否成功。这有助于指导治疗和预防移植相关并发症的发生。因此，STR-PCR是一种可靠的方法，可用于监测异基因造血干细胞移植的植入效果。

关键词：STR-PCR；异基因造血干细胞移植；植入效果

移植物的植入效果监测对于评估移植成功与否以及预测移植后并发症的发生具有重要意义[1]。传统的植入效果监测方法主要依赖于观察移植物的功能恢复、外周血象和骨髓活检等指标。然而，这些方法存在一定的局限性，例如骨髓活检具有创伤性和侵入性，不能频繁进行；外周血象受到多种因素的影响，不够准确。因此，寻找一种简单、非侵入性、准确性高的植入效果监测方法具有重要意义[2]。短串联重复多态性（STR-PCR）是一种基于DNA分析的技术，通过分析特定的微卫星位点，可以确定个体之间的遗传关系。在allo-HSCT中，供者和受者拥有不同的遗传特征，因此可以利用STR-PCR技术来监测移植物中供者和受者的比例变化，从而评估移植物的植入效果。STR-PCR在allo-HSCT中的应用主要包括两个方面：供者-受者鉴定和移植物比例监测。在移植前，通过对供者和受者的外周血样本进行STR-PCR分析，可以确定供者-受者之间的遗传关系，确保移植物来源的准确性。术后，通过每周采集受者的外周血样本，并通过STR-PCR检测供者和受者的比例，可以监测移植物中供者和受者的比例变化。一些研究已经证实了STR-PCR在allo-HSCT中的应用效果。结果显示，STR-PCR可以准确鉴定供者和受者之间的遗传关系，确保移植物来源的准确性。同时，通过监测供者和受者的DNA比例变化，可以及时评估移植物的植入效果。该方法具有较高的准确性和灵敏性，可以预测移植后并发症的发生，指导治疗策略的调整。然而，STR-PCR在allo-HSCT中的应用仍存在一些挑战和局限性。首先，STR-PCR需要特定的实验室设备和技术，操作复杂，对操作者的技术要求较高。其次，移植物的比例变化受到多种因素的影响，如移植物排斥反应、移植物抗宿主病等，因此需要结合临床数据进行综合分析。基于此，本研究旨在探讨短串联重复多态性（STR-PCR）在异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）中植入效果监测中的应用，具体报道如下：

1、资料与方法

1.1临床资料

我们回顾性分析了2022年3月～2023年3月100例接受allo-HSCT的患者的数据，在这100例患者中，男性患者占56例，女性患者占44例。患者的年龄范围为12岁至58岁，平均年龄为（34.48±8.37）岁。白血病21例，淋巴瘤25例，骨髓衰竭28例，其他疾病26例。

1.2方法

样本收集：在移植前，从受体和供体的外周血样本中收集DNA样本。收集的样本可以通过血液采集、唾液样本等方式获取。

DNA提取：使用DNA提取试剂盒，从收集到的外周血样本中提取出DNA。根据试剂盒的说明书进行提取步骤，确保提取到高质量的DNA。

STR-PCR扩增：本研究采用Goldeneye-20A试剂盒进行研究，选择一组合适的STR位点进行扩增，常用的位点包括D3S1358、vWA、FGA等。

PCR反应条件：设置合适的PCR反应体系和条件，包括引物浓度、模板DNA浓度、反应体积、PCR循环条件等。确保反应条件的准确性和重复性。

PCR产物分析：将PCR产物进行电泳分析。可以使用毛细管电泳等方法，根据扩增产物的大小和数量进行分析。

数据分析：根据PCR产物的分析结果，判断受体的DNA是否包含供体的特定位点。如果供体的STR位点在受体中出现，则表示移植的植入效果良好。

结果解释：根据STR位点的遗传特征，可以判断供体和受体之间的亲缘关系。比较扩增产物的大小和数量，在供体和受体之间进行比对和匹配。

结果报告：将STR-PCR分析的结果记录并报告。报告中应包括受体和供体之间的位点比对结果，以及植入效果的评估。

1.3观察指标

每周采集受者的外周血样本，并通过STR-PCR检测移植物中的供者和受者的比例。

2、结果

对于监测到嵌合状态的25例患者，具体结果表明不同患者的嵌合状态出现时间不一致。即使是同一患者，其嵌合状态也存在变化。这可能是由于嵌合比例的变化以及检测能力的影响。在具体检出嵌合体的位点上也存在变化。即使患者已经完全转为供者源状态，仍有可能转变为嵌合体状态。通过对临床信息的追踪，发现嵌合状态的出现常伴随着患者疾病复发、加重甚至死亡等情况。在100例病例中，监测到有嵌合现象的患者疾病预后均较差。

3、讨论

STR-PCR是一种高度敏感和特异的分子生物学技术，可以检测到供体DNA在受者体内的存在。通过比较受者和供体的DNA序列，特定的STR位点可以用来确认植入效果。如果供体的STR位点在受者中出现，则表明移植的植入效果良好。通过监测供体DNA在受者体内的存在，可以评估移植后的治疗效果。如果供体DNA在受者体内持续存在，表明移植的造血系统成功地替代了受者异常或受损的造血系统。这对于评估治疗效果的持久性和长期生存率至关重要。allo-HSCT过程中可能出现移植相关并发症，如移植物抗宿主病（graft-versus-host disease，GVHD）。STR-PCR可以用于监测供体T细胞在受者体内的存在，从而评估GVHD的风险和发生情况。通过监测供体和受者的T细胞比例变化，可以帮助早期诊断和治疗GVHD。STR-PCR可以用于确定供受者之间的亲缘关系。通过比对供体和受者的STR位点，可以判断两者之间的遗传关系。这对于确保供体的合适性和减少移植相关的并发症具有重要意义。在100例病例中，监测到有嵌合现象的患者疾病预后均较差。结果表明嵌合状态在患者中具有动态性和不确定性。不同患者的嵌合状态出现时间不同，这可能与个体差异、治疗方案和疾病进展等因素有关。即使是同一患者，在不同时间点可能会出现不同的嵌合状态。这提示我们在临床实践中应重视嵌合状态的检测和监测，及时调整治疗方案以提高疗效。

参考文献：

[1] 王磊,王红春,张建平,等.司莫司汀在异基因造血干细胞移植预处理方案应用中的短期疗效和安全性分析[J].中国医院药学杂志, 2021, 41(18):5.

[2] 赵艳丽,陆佩华.CAR-T细胞治疗在急性B细胞淋巴细胞白血病异基因造血干细胞移植中的应用[J].临床血液学杂志, 2021, 34(9):5.