非甾体类药物引起肠道损伤的机制基础研究

非甾体类药物引起肠道损伤的机制基础研究

韩蓉

成都市新都区妇幼保健院     四川成都 610500

摘要：

非甾体类药物（NSAIDs）是一类具有抗炎，镇痛、解热作用的药物，主要用于多种疼痛的对症治疗，改善风湿性疾病的炎性症状，预防心脑血管疾病等，是仅次于抗感染药物的第二大类药物，因此，其在临床上被广泛使用[1-4]。然而，使用NSAIDs可能导致消化道、心血管、肾脏、肝脏、中枢神经系统和血液系统等的不良反应[5-7]，甚至造成脏器的损伤，其中消化道损伤最常见，这使得患者在使用NSAIDs的同时，不得不使用其他药物控制其带来的副作用；但是，目前很多药物只能缓解NSAIDs引起的胃肠副作用，并不能完全消除，随着中国老龄化急速加快，NSAIDs使用量将大大增加，其造成的胃肠道损伤势必更为频繁，这将给患者带来极大的痛苦和经济负担，因此，深入了解NSAIDs引起的肠损伤发病机制，开发新的药物及新的方法消除NSAIDs引起的肠道副作用，已经成为当前迫切需要解决的问题。

为了研究NSAIDs对肠道损伤的作用，我们使用了NSAIDs对小鼠进行灌胃，观察肠道损伤情况，并检测了肠组织的炎性因子IL-6，TNF-α，为NSAIDs肠损伤机制研究提供基础研究。

关键词：NSAIDs、IL-6，TNF-α。

一．材料与方法：

动物

成年雌性BALB/c小鼠（中国成都大硕实验动物有限公司）体重20-22g，在控制温度（22±2°c）和湿度（50%±10%）的条件下，按常规明暗循环（从07:00到19:00开灯）饲养，并给予标准饮食和自由饮水。所有动物程序均按照《实验动物使用指南》进行，并获得了成都医学院实验动物伦理委员会的批准。

动物准备

10只健康雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组和实验组，每组5只。对照组给予生理盐水（1ml/100g,1次/d）灌胃, 实验组参照人类常规口服双氯芬酸钠治疗剂量（75mg/d）折算成小鼠灌胃剂量7.8mg/1kg/1d，（1mL/100g，1次/d）进行灌胃。造模第4天处死所有小鼠，观察小鼠小肠损伤情况。

组织病理学分析

小肠组织用福尔马林固定，石蜡包埋。用苏木精-伊红（H&E）染色试剂盒（C0105；Beyotime生物技术研究所，中国上海）对肠切片进行染色。

炎性细胞因子的酶联免疫吸附分析

按照制造商的说明书，使用酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒（贝赛威斯，中国深圳）测定血清中IL-6和TNF-α的浓度。

总RNA提取与定量逆转录PCR

根据制造商的说明书，使用总RNA提取试剂盒（索莱宝，中国北京）从小肠组织中提取总RNA。使用NanoDrop 2000分光光度计（赛默飞世尔科技，美国）测定RNA浓度。然后使用iScriptcDNA合成试剂盒（博乐，美国）反向转录1微克总RNA，以合成cDNA。采用CFX96实时系统（博乐，美国）和SYBR-Green-Supermix（博乐，美国）进行定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）。引物正义和反义序列列于表S1。β-actin作为定量的内部对照。采用2 -∆∆CT法计算相对表达水平。

表S1  PCR引物序列

统计分析

实验至少独立进行了三次。用对数秩分析生存率，试验结果使用GraphPad Prism 5（GraphPad软件公司，美国）进行分析。定量数据以平均数±标准差或标准差表示。两组之间的比较采用Student t检验，两组以上的比较采用Tukey的事后检验进行方差分析。结果P<0.05，有统计学意义。

二．结果

1.非甾体类药物可以引起小肠损伤

为了观察非甾体类药物对小肠损伤作用，我们将对照组和实验组小鼠肠组织进行HE染色，与对照组相比，实验组组隐窝结构明显丧失，绒毛上皮严重萎缩，绒毛变性缩短，固有层炎性细胞浸润明显（图1）。

2. 非甾体类药物可以引起肠组织炎性因子增加。

考虑到非甾体类药物引起组织损伤可能通过炎症反应，我们检测了肠组织中IL-6、TNF-α的浓度及表达，如图2所示，小鼠通过非甾体类药物灌胃后，IL-6、TNF-α的mRNA表达增加，其在肠组织的浓度与mRNA表达相对应。

三. 讨论

非甾体类药物（NSAIDS）是一类非类固醇激素药物，它能够解热、消除疼痛、肿胀、四肢僵直及炎症。目前广泛用于高热时降温，多种情况下引起的疼痛性疾病：包括经期痉挛、扭伤、劳损、关节炎、滑囊炎、肌腱炎、痛风等及控制风湿和类风湿关节炎引起的炎症等。也可用来治疗术后那些不需要麻醉性镇痛药的轻微疼痛，或是作为一段强效镇痛治疗后的后续治疗，它还可以作为那些不能够接受麻醉镇痛药物的患者急性疼痛的替代治疗。非甾体类药物主要通过抑制环氧化酶，减少前列腺素的生成达到解热、镇痛及抗炎的作用，但在其发挥效果的同时也产生了一系列的不良反应，对消化道、肝脏、泌尿系统、神经系统、血液系统、心血管系统都有一定的影响，还会引起特异体质者出现过敏，并可以引起妊娠期妇女急性脂肪肝，导致产前、分娩期、产后出血，部分药物甚至可以引起胎儿畸形。其中，消化道的影响尤为明显。

通过本研究，我们可以看出，在使用非甾体类药物后，肠组织中炎性因子的表达和浓度明显增加，并伴随着组织结构的改变，长期使用该药物，势必对肠道造成更加严重并不可逆转的损害。随着中国老龄化的加剧，非甾体类药物的使用越来越广泛，因此加快并全面的了解非甾体类药物对肠道损伤的机制，是当前迫切的需求。

References:

[1].Castilla, P.E., et al., [Comparative study of the effect of two analgesic techniques in postoperative pain control in pediatric surgery]. Cir Pediatr, 2018. 31(4): p. 187-191.

[2].Wheatley, B.M., et al., Effect of NSAIDs on Bone Healing Rates: A Meta-analysis. J Am Acad Orthop Surg, 2019. 27(7): p. e330-e336.

[3].Morelli, K.M., L.B. Brown and G.L. Warren, Effect of NSAIDs on Recovery From Acute Skeletal Muscle Injury: A Systematic Review and Meta-analysis. Am J Sports Med, 2018. 46(1): p. 224-233.

[4].Martinez, L., E. Ekman and N. Nakhla, Perioperative Opioid-sparing Strategies: Utility of Conventional NSAIDs in Adults. Clin Ther, 2019. 41(12): p. 2612-2628.

[5].Gonzalez-Gay, M.A. and C. Gonzalez-Juanatey, Inflammation: NSAIDs and cardiovascular risk in arthritis. Nat Rev Cardiol, 2017. 14(2): p. 69-70.

[6].Sriperumbuduri, S. and S. Hiremath, The case for cautious consumption: NSAIDs in chronic kidney disease. Curr Opin Nephrol Hypertens, 2019. 28(2): p. 163-170.

[7].Durand, L., et al., NSAIDs in paediatrics: caution with varicella!. Int J Clin Pharm, 2015. 37(6): p. 975-7.

基金项目：铁死亡在非甾体类药物引起的肠损伤过程中的作用研究

课题编号：2021315