NK细胞治疗产品检测的意义

NK细胞治疗产品检测的意义

1.王峰 2. 刘雅文 3.李燕

中源协和细胞基因工程股份有限公司   天津  300384     

【摘要】NK细胞疗法，全称为自然杀伤细胞疗法，是肿瘤免疫治疗手段当中的一个重要分类，属于过继性细胞治疗的一种方式。NK细胞疗法是通过分离自体或者异体免疫效应细胞，经过体外激活并回输到患者体内，直接杀伤肿瘤，或者激发机体抗肿瘤免疫反应。NK细胞疗法目前主要是处在一期或者二期临床试验阶段，随着NK细胞纯化技术以及扩增技术的不断改进，NK细胞疗法逐渐成为过继性免疫治疗的一个重要组成部分。

【关键词】  NK细胞，NK活性检测，NK功能检测，杀伤功能评价

[Abstract] NK cell therapy, or natural killer cell therapy, is an important category of cancer immunotherapy and is a form of adoptive cell therapy. NK cell therapy involves either isolating autologous or allogeneic immune effector cells, activating them in vitro and transfusing them back into the patient, directly killing the tumor, or stimulating the body's anti-tumor immune response. At present, NK cell therapy is mainly in phase I or phase Ⅱclinical trials, with the continuous improvement of NK cell purification technology and expansion technology, NK cell therapy has gradually become an important component of adoptive immunotherapy.

【Key words】NK cell;NK activity detection;NK function detection;killing function evaluation

NK细胞又称为自然杀伤细胞（Natural Killer Cell,NK细胞），是除T细胞、B细胞之外的第三大类淋巴细胞。[1]约占外周血淋巴细胞的10%~15%，是体内负责杀伤老化、受病毒感染、肿瘤等异常细胞的主要战士。[2]

1 NK细胞治疗作用的机制

NK细胞主要存在于外周循环，它们必须离开脉管系统才能遇到潜在的靶细胞。NK细胞主要通过分泌杀伤介质，如穿孔素及颗粒酶实现杀伤功能，介导ADCC效应，[3]分泌细胞因子发挥免疫调节功能等途径非特异性杀伤肿瘤细胞。除了具有强大的杀伤功能外，还能够与机体其他多种免疫细胞相互作用，调节机体的免疫状态和免疫功能。

2 NK细胞进行评价的意义

随着近年来肿瘤免疫疗法、细胞疗法、基因编辑等新技术的不断突破，NK细胞疗法在抗肿瘤创新疗法中逐渐展现出巨大的临床应用潜力。因此只有高质量的NK细胞产品才能够在未来的临床应用中发挥重要的作用。高质量的产品来源于稳定的生产工艺，全面的质量检测能够直观和全面地评价产品，给产品一张漂亮的“身份证明”。

3 NK细胞评价方法

对纯化的NK细胞进行检测鉴定包括多方面，目前一般分为安全性检测及功能性评价。

3.1安全性检测

安全性检测在产品应用中占有极其重要的地位。一旦产品安全性出现问题，有可能给患者带来感染的风险，甚至可能危及生命。目前安全性检测通常包括但不限于细菌、真菌、支原体、细菌内毒素等检测项目，可通过薄膜过滤法，QPCR法，凝胶法等检测方法进行检测。

3.2功能性评价

3.2.1 细胞活性检测

产品中有着高占比的活细胞，产品才能高质量地发挥作用。且如果产品中死细胞占比过大也可能引起患者的不良反应，影响治疗效果。3.2.2 纯度检测

NK细胞主要是CD3-CD16+56+细胞群发挥作用，该细胞群占比越高，临床治疗效果就越显著。目前细胞群主要通过流式细胞术对细胞进行荧光染色进行鉴定，[4]也可以通过添加绝对计数管的方法，更加精准地判断产品中NK细胞的数量。

3.2.3 杀伤能力检测

目前评价杀伤能力的方法有很多，例如：①NK细胞与K562细胞共培养的方法评价细胞杀伤效果。[5-6]②通过流式细胞术的方法对穿孔素及脱颗粒酶的表达进行检测用于评价NK细胞的杀伤能力。[7]③LDH方法：细胞的包浆内含有LDH，正常情况下LDH不能透过细胞膜，当细胞受到NK细胞杀伤后，LDH会释放到细胞外部，再通过酶联免疫法检测LDH含量，评价NK细胞的杀伤效果。

[8]

3.2.4细胞因子和免疫检查点标志物

活化的NK细胞可分泌多种细胞因子和趋化因子，其中包括GM-CSF、IL-10、IL-5、IL-13、IFN-γ、RANTES、TNF-α、MIP-1α、MIP-1β和IL-8（可使用免疫测定法测量）。此外，NK细胞上表达的免疫检查点标志物（如LAG-3、CD96、TIM-3、TGIT和PD-1）都能在血清或血浆中检测到。

结语

尽管NK细胞在许多疾病中的具体作用机制还有很多值得探究的地方，但鉴于NK细胞疗法在临床上为多种疾病的治疗提供了颇具价值的帮助，因此NK产品的安全性检测及功能性评价也应逐渐获得我们的重视和研究，并为不同疾病采取对应的治疗措施提供参考。

参考文献

[1]Artis D, Spits H. The biology of innatelymphoid cells【J】. Nature，2015,517(7534):293-301,

[2]Stojanovic A，Cerwenka A. Naturalkiller cells and solid tumorsU[J]. Innare/mmmun,2011，3(4):355-364.

[3]Peruzzi G，Masilamani M，Borrego F.et al. Endocytosis as a mechanism ofregulating natural killer cell function:unique endocytic and traffickingpathway for CD94/NKG2AU[J].mmunolRes,2009，43(1-3):210-222.

[4] HermansonDL,KaufmanDS.Utilizingchimericantigeneceptorstodirectnaturalkillercellactivity[J].FrontImmunol,2015, 6:195.

[5] RotheA, JachimowiczRD,BorchmannS,et al.The bispecificimmunoligandULBP2-aCEAredirectsnaturalkillercellstotumorcellsandrevealspotentanti-tumoractivityagainstcoloncarcinoma[J].IntJ Cancer, 2014,134(12):2829-2840.

[6]KellnerC,BruenkeJ, HornerH, etal.Heterodimericbispecificantibody-derivativesagainstCD 19andCD16induceeffectiveantibody-dependent cellular cytotoxicity againstB-lymphoid tumor cells[J].CancerLett,2011,303(2):128-139.

[7] GlienkeW,EsserR,PriesnerC,etal.AdvantagesandapplicationsofCAR- expressingnaturalkillercells[J].FrontPharmaco,2015, 6:21.

[8]检测NK细胞活性的意义 张绪利 九江医学 1994年第9卷第8期

作者简介：姓名：王峰 ；性别：女  ； 出生年月：1982.05 ；籍贯：河北省唐山市  民族：汉   ；最高学历：硕士 ；目前职称：中级；研究方向：生物制药