他克莫司不同给药系统对皮肤滞留量的影响

他克莫司不同给药系统对皮肤滞留量的影响

李非

广州玻思韬控释药业有限公司  广东省广州市  510320

摘要：皮肤外用药物因其直接作用于皮肤或黏膜，具有使用方便、副作用小等优点，然而，皮肤外用药物的研发并非易事，它涉及多个关键环节，其中给药系统与药效的关系尤为紧密。本文以他克莫司为模型药物，研究了不同给药系统对皮肤滞留量的影响，发现微乳的给药系统皮肤的质量是油性基质给药系统的1.85倍。

关键词：非布司他；给药系统；皮肤滞留量

一、引言

特应性皮炎是近年来高发疾病，从幼儿到老年人发病率逐年提升，他克莫司作为临床应用的一线治疗药物，目前上市的是他克莫司软膏剂，0.03%和0.1%两个规格，基质为单一油性基质，本研究在此基础上开发了微乳的给药系统，对比了两个系统对于药物在皮肤内的滞留量进行对比。

二、材料和方法

1. 仪器与试剂：

1.1 仪器：高效液相色谱仪KNAUER(德国诺尔) ；C18柱（DIKMA，型号：Diamonsil，250mm×4.6mm，5 μ m）；CPA225D电子天平（Sartorius）；DF-101T集热式恒温加热磁力搅拌（巩义市予华仪器有限公司）

1.2 试剂：他克莫司（浙江海正药业），液体石蜡（湖南尔康），白凡士林（南京白云药业有限公司），白蜡（湖南尔康），碳酸丙烯酯（南京威尔），聚乙二醇-7-硬脂酸酯Tefose 63（嘉法狮），油酰聚氧乙烯甘油酯Labrafil M 1944CS（嘉法狮），卡波姆974P（路博润），二乙二醇单乙醚（嘉法狮），氢氧化钠（南京化学试剂）。

1.3试验动物：实验用小型乳猪(巴马香猪，健康，雌性，9周，体重6kg。)

三、样品制备

1. 处方信息

本研究的他克莫司的两个给药系统分别为油性基质给药系统（他克莫司0.1%，液体石蜡12%，白凡士林76%，白蜡8%，碳酸丙烯酯3.9%）和微乳给药系统（他克莫司0.1%，液体石蜡7%，白凡士林17%，白蜡8%，二乙二醇单乙醚5%，Tefose 63 8%，Labrafil 1944CS 4%，卡波姆974P 0.5%，氢氧化钠适量，纯化水50.4%）。

2. 制备方法：

油性基质给药系统的制备方法：（1）取处方量的碳酸丙烯酯置于干净的烧杯A中，水浴加热至70℃然后往烧杯中加入处方量他克莫司，搅拌使溶解，得主药溶液，保温备用。 （2）取处方量的液状石蜡、白凡士林、石蜡置于干净的烧杯B中，水浴加热至75℃，边加热边搅拌直至基质完全熔融。（3）制膏：向烧杯B中加入主药溶液，边加边搅拌，再在70～75℃水浴下搅拌15min，置常温水浴中冷却，成膏。

微乳给药系统的制备方法：（1）取处方量的二乙二醇单乙醚置于干净的烧杯A中，水浴加热至60℃，然后往烧杯中加入处方量他克莫司，搅拌使溶解，得主药溶液，保温备用；（2）水相制备：卡波姆加入到水中进行溶胀3小时，用NaOH调节pH至中性；（3）油相的制备：取处方量的液状石蜡、白凡士林、石蜡置于干净的烧杯B中，水浴加热至75℃，边加热边搅拌直至基质完全熔融；（4）制膏：将油相辅料和主药溶液依次转移至水相辅料中，搅拌1h，成膏。

四、体外经皮渗透实验

1. 分析方法建立
   1. 试剂

0.9％氯化钠水溶液(氯化钠，台山市新宁制药有限公司) ；无水乙醇(分析纯，国药集团化学试剂有限公司) ；乙腈(色谱纯，天津市科密欧化学试剂有限公司) ；磷酸(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)；四氢呋喃（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）

1.2色谱条件

色谱柱（C18），UV检测器，检测波长220nm，流动相为乙腈-水-磷酸比例为700:300:1，流速1.0mL/min，柱温55 ℃，稀释剂水-无水乙醇-四氢呋喃比例为1：1：3。

1.3 标准曲线

精确称取他克莫司24.50mg，置于20 mL容量瓶中用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，取1mL置于100 mL容量瓶中用流动相溶解并稀释至刻度，得到含他克莫司12.25μg/mL的储备液，取储备液适量，依次稀释成浓度为2.45，9.80，14.70，24.50和49.00 μg/mL的药物溶液，进样20μL，记录峰面积，测得结果见表3。以浓度对峰面积进行线性回归，得回归方程：y = 88295x - 4409.8（R2 = 0.9999），见图1。可见药物在浓度为2.45~49.00 μg/mL的范围内，线性关系良好。

图 1 他克莫司含量测定标准曲线

2. 皮肤中药物滞留量的测定方法

取体外经皮渗透实验8小时后的皮肤刮去剩余软膏，移除并用稀释剂清洗干净皮肤表面的供试品，取出皮肤，用剪刀剪去外围皮肤，只保留等同池口面积大小的皮肤，再用剪刀将皮肤剪碎置于特质研磨离心管中，将特质研磨离心管放于用液氮中冷冻至少3分钟，取出后置于冷冻研磨仪中研磨成粉末，将皮肤粉末溶于10 mL容量瓶中，加入稀释剂，超声15分钟，用稀释剂定容，摇匀，用尼龙滤头弃去2mL，剩余即得皮肤提取液，进行HPLC测定，由1.3项标准曲线计

算药物浓度。

表 4 皮肤滞留量结果

从以上结果可知，微乳给药系统的皮肤滞留量是油性基质给药系统的1.85倍。分析原因可能为一方面Labrafil M 1944 CS为乳化基质乳膏的助表面活性剂，使得制得的乳膏乳滴较小，从而利于透皮制剂的吸收，另一方面Transcutol HP是吸收促进剂，可在局部形成药物蓄积效应，从而增加了药物在皮肤中的滞留量，这预示微乳给药系统能使活性物质在病灶部位保持较高浓度，更有利于发挥药物的疗效。

五、讨论

本研究以他克莫司为模型药物，研究不同的给药系统对皮肤滞留量的影响，发现给药系统与药物递送密切相关，给药系统的性能直接决定药物能否有效到达目标组织，进而影响药物的疗效。

近年来，在皮肤外用药物的给药系统上不断突破和创新，通过精细调控药物的粒子大小、形态和表面性质，提升药物的皮肤渗透性等方面实现药物在生物屏障上的有效传递，增加药物在皮肤中的滞留时间，促进药物更深、更持久的渗透，从而达到良好的治疗效果，给药系统在外用药物研发中扮演着至关重要的角色，深入理解药效与给药系统的关联，有助于我们设计出更高效、更安全的外用药物。

参考文献

[1]崔鑫, 杨顶权, 谢振年, 黎元元, 王志飞, 刘峘, 刘福梅, 赵晓晓, 路振凯, 王连心, 谢雁鸣. 外用中成药临床应用药物警戒指南[J]. 中国中药杂志, 1-8.

[2]黄雪梅, 高强. 创新性皮肤局部外用药物研发分析及对皮肤药代动力学的影响研究[J]. 中国医药科学, 2021, 11 (07): 52-55+74.