简介：

简介：摘要目的探讨索拉非尼对肿瘤细胞凋亡的影响以及涉及髓样细胞白血病-1(Mcl-1)下调的作用机制。方法采用噻唑蓝(MTT)法检测索拉非尼对肠嗜铬细胞(EC细胞，购自美国典型菌种保藏中心)增殖的影响，以确定索拉非尼的作用浓度和作用时间。将EC细胞分为4组：对照组、索拉非尼组、索拉非尼＋短发夹RNA以下调荧光素酶的质粒(shLuc)组和索拉非尼＋细胞外调解蛋白激酶下游作用底物磷酸化ets样基因-1(Elk-1)短发夹RNA(shElk-1)组。流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率，蛋白质印迹法(Western blot)和实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)、Elk-1、Mcl-1、蛋白激酶B(Akt)和糖原合成酶激酶3β(GSK3β)的蛋白及mRNA的相对表达量。多组间比较采用单因素方差分析。结果1、5和10 mol/L的索拉非尼作用后EC细胞的存活率分别为(67.42±5.08)%、(50.81±6.11)%和(38.49±5.41)%，显著低于0 mol/作用浓度(99.98±0.25)%(t1＝5.148，t5＝2.142，t10＝1.764，P值均<0.05)，差异有统计学意义。索拉非尼作用12、24和48 h后EC细胞的存活率分别为(65.41±4.61)%、(49.64±4.73)%和(42.49±5.02)%，显著低于0 h作用时间(99.99±0.18)%(t12＝4.624，t24＝1.856，t48＝1.751，P值均<0.05)；而与作用6 h比较，EC细胞的存活率差异无统计学意义(t6＝1.266，P>0.05)。与对照组比较，索拉非尼组细胞凋亡率显著增加(t＝12.235，P<0.05)；与索拉非尼组比较，索拉非尼＋shElk-1组细胞凋亡率显著增加(t＝9.271，P<0.05)；各组间bcl-2相对表达量、bax相对表达量和bcl-2/bax比值比较，差异无统计学意义(Fbcl-2＝0.198，Fbax＝0.541，Fbcl-2/bax＝2.679，P值均>0.05)。与对照组比较，索拉非尼组细胞Elk-1蛋白的相对表达量差异无统计学意义(tElk-1蛋白＝1.426，P>0.05)，而Elk-1 mRNA、Mcl-1蛋白及mRNA的相对表达量显著降低(tElk-1 mRNA＝2.266，tElk-1 mRNA＝0.045，tMcl-1蛋白＝2.774，tMcl-1 mRNA＝2.987，P值均<0.05)，差异均有统计学意义。与索拉非尼组比较，索拉非尼＋shElk-1组细胞Elk-1蛋白及mRNA、Mcl-1蛋白及mRNA的相对表达量显著降低(tElk-1蛋白＝5.340, tElk-1 mRNA＝6.240, tMcl-1蛋白＝6.248，tMcl-1 mRNA＝5.217，P值均<0.05)，差异均有统计学意义。与对照组比较，索拉非尼组细胞Akt蛋白及mRNA、GSK3β蛋白及mRNA的相对表达量显著降低(tAkt蛋白＝3.579，tAkt mRNA＝3.641，tGSK3β蛋白＝2.694，tGSK3β mRNA＝3.091，P值均<0.05)；与索拉非尼组比较，索拉非尼＋shElk-1组细胞Akt蛋白及mRNA、GSK3β蛋白及mRNA的相对表达量显著降低(tAkt蛋白＝8.041，tAkt mRNA＝6.342，tGSK3β蛋白＝4.391，tGSK3β mRNA＝8.327，P值均<0.05)，差异均有统计学意义。结论索拉非尼可促进EC细胞凋亡，其机制可能与抑制Elk-1/Mcl-1和Akt/GSK3β通路有关。

简介：摘要目的探讨POU3F3对垂体瘤细胞增殖和周期的影响及其作用机制。方法选取2016年6月到2019年12月驻马店市中心医院手术切除的150例垂体瘤和癌旁组织作为研究对象，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析POU3F3和微小RNA(miRNA，miR)-127-5p表达水平；采用短发卡RNA(shRNA)和过表达技术在RC-4BC垂体瘤细胞中分别敲降POU3F3和过表达miR-127-5p，采用Lipo2000过表达采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和流式细胞术分析POU3F3和miR-127-5p对细胞增殖和周期的影响；采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析POU3F3和miR-127-5p及其靶基因关系；采用蛋白质印迹法(Western blot)分析POU3F3和miR-127-5p对靶基因表达的影响。组间比较采用t检验。结果与癌旁组织中POU3F3表达水平(1.10±0.19)比较，垂体腺癌组织中POU3F3表达水平(2.84±0.22)显著增加，差异有统计学意义。与癌旁组织中miR-127-5p表达水平(1.04±0.15)比较，垂体腺癌组织中miR-127-5p表达水平(0.34±0.11)显著下调，差异有统计学意义。与对照shRNA组细胞G0/G1期、S期和G2/M期[(37.54±3.45)%、(39.10±3.90)%和(20.58±2.87)%]比较，POU3F3 shRNA组细胞G0/G1期比例(64.33±6.24)%显著增加，而S期和G2/M期比例[(20.14±3.01)%和(14.33±2.88)%]显著下调，差异有统计学意义。与对照mimic组细胞G0/G1期、S期和G2/M期[(35.66±4.02)%、(40.89±4.61)%和(25.33±2.19)%]比较，miR-127-5p minic组细胞G0/G1期比例显著增加[(59.48±6.14)%]，而S期和G2/M期比例[(24.23±2.71)%和(17.59±1.99)%]显著下调，差异有统计学意义。miR-127-5p与POU3F3存在碱基配对，FOXD1是miR-127-5p靶基因。与对照shRNA组和对照mimic组细胞FOXD1蛋白表达水平(1.16±0.21、0.97±0.14)比较，POU3F3 shRNA组和miR-127-5p mimic组细胞FOXD1蛋白表达水平(0.22±0.15、0.32±0.12)显著下降，差异有统计学意义。结论POU3F3通过miR-127-5p/ FOXD1调控垂体腺癌细胞增殖和周期。

简介：摘要目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对脑缺血再灌注损伤的影响。方法30只SD大鼠按照随机数字表分为对照组、模型组和AAV-bFGF组，模型组和AAV-bFGF组大鼠采用大脑中动脉闭塞(MCAO)模型，1 h后恢复血流灌注，对照组做手术切口但不闭塞中动脉。3组大鼠在建模前20 d经侧脑室分别注射对照AVV和AAV-bFGF。建模24 h后分析3组大鼠神经功能缺损评分；采用TTC染色分析脑组织梗死百分比；采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测脑组织血管内皮生长因子(VEGF)、神经生长因子(NGF)、髓鞘碱性蛋白(MBP)表达；采用原位缺口末端标记法(TUNEL)染色分析脑组织细胞凋亡比例；采用比色法检测脑组织一氧化氮(NO)水平。组间数据采用单因素方差分析。结果AAV-bFGF组大鼠神经功能评分[(1.52±0.23)分]明显低于模型组大鼠[(4.00±1.04)分]，差异有统计学意义(t＝7.371，P<0.05)。AAV-bFGF组大鼠脑组织梗死体积比[(15.25±2.85)%]明显低于模型组大鼠[(36.81±4.46)%]，差异有统计学意义(t＝12.540，P<0.05)。AAV-bFGF组大鼠脑组织凋亡比例[(21.42±2.17)%]明显低于模型组大鼠[(47.66±6.25)%]，差异有统计学意义(t＝12.540，P<0.05)。AAV-bFGF组大鼠脑组织VEGF和NGF [(69.61±6.80)、(6.94±0.69) pg/ml]明显低于模型组大鼠[(23.82±2.77)、(2.47±0.20) pg/ml]，差异有统计学意义(t＝19.720、19.710，P<0.05)。AAV-bFGF组大鼠脑组织MBP水平 [(3.95±0.28) pg/ml]明显高于模型组大鼠[(1.80±0.18) pg/ml]，差异有统计学意义(t＝20.870、19.710，P<0.05)。AAV-bFGF组大鼠脑组织NO水平[(44.89±6.52) μmol/L]明显低于模型组大鼠[(99.18±10.35) μmol/L]，差异有统计学意义(t＝14.030，P<0.05)。结论腺相关病毒介导碱性成纤维细胞生长因子可显著促进神经保护因子分泌，降低NO水平，进而降低脑组织细胞凋亡，保护大鼠神经功能。

简介：摘要目的研究甲基转移酶样蛋白14（METTL14）在卵巢上皮性癌（卵巢癌）组织中的表达及其临床意义，探讨上调和下调METTL14表达对卵巢癌细胞系A2780、SKOV3细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法（1）组织标本检测：选取2019年12月—2020年11月在广西医科大学附属肿瘤医院行手术治疗的20例卵巢癌患者的新鲜癌组织标本，收集同期因子宫肌瘤行子宫及双侧附件切除术的15例患者的新鲜正常卵巢组织标本作为对照，免疫组化法检测卵巢癌与正常卵巢组织中METTL14蛋白表达的差异。另收集2014年1月—2019年10月在广西医科大学附属肿瘤医院行手术治疗的121例卵巢癌患者的癌组织蜡块，免疫组化法检测卵巢癌组织中METTL14蛋白的表达，并分析METTL14蛋白表达与卵巢癌患者临床病理特征及预后的关系。（2）细胞实验：分别使用慢病毒载体、小分子干扰RNA（siRNA）技术，构建上调、下调METTL14表达的卵巢癌A2780、SKOV3细胞系，并采用逆转录（RT）-实时荧光定量PCR（qPCR）技术和蛋白印迹（western blot）法分别验证其METTL14 mRNA和蛋白的表达。后续的细胞实验分为5组，LV-METTL14组（转染慢病毒载体上调METTL14表达）及其对照LV-NC组（转染阴性对照慢病毒空载体），si-METTL14组（转染si-METTL14-2下调METTL14表达）及其对照si-NC组（转染阴性对照siRNA），以及空白组（未转染）。采用液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）法检测各组卵巢癌细胞中N-6甲基腺嘌呤（m6A）修饰水平的变化，分别采用活细胞计数（CCK-8）法、划痕实验以及穿膜（transwell）小室侵袭和迁移实验检测各组卵巢癌细胞增殖、愈合以及侵袭和迁移能力的变化。结果（1）20份卵巢癌组织中METTL14蛋白的免疫组化总评分为（6.2±3.7）分，显著高于15份正常卵巢组织［（3.3±2.5）分；t=-2.64，P=0.012］。121例卵巢癌患者中，METTL14蛋白高表达（免疫组化总评分≥6分）69例（57.0%，69/121），METTL14蛋白低表达（免疫组化总评分<6分）52例（43.0%，52/121）；METTL14蛋白高表达与METTL14蛋白低表达患者比较，手术病理分期更晚，淋巴结转移率、腹腔转移率、腹水发生率更高，分别比较，差异均有统计学意义（P均<0.05）；METTL14蛋白高表达患者的总生存率显著低于METTL14蛋白低表达者（P=0.009）。（2）LC-MS/MS法分析显示，LV-METTL14组A2780和SKOV3细胞中m6A的表达水平分别为0.213±0.024、0.181±0.018，均显著高于LV-NC组（分别为0.109±0.022、0.128±0.020；P均<0.05）；而si-METTL14组A2780和SKOV3细胞中m6A的表达水平分别为0.063±0.012、0.069±0.015，均显著低于si-NC组（分别为0.108±0.014、0.121±0.014；P均<0.05）。CCK-8法检测显示，si-METTL14组SKOV3细胞在培养在36、48、60 h时的吸光度（A）值均显著低于si-NC组（P均<0.05）；LV-METTL14组A2780和SKOV3细胞在培养48、60 h时的A值均显著高于LV-NC组（P均<0.01）。划痕实验显示，培养24 h，si-METTL14组A2780和SKOV3细胞的迁移率低于si-NC组，LV-METTL14组A2780和SKOV3细胞的迁移率高于LV-NC组，分别比较，差异均有统计学意义（P均<0.01）。在transwell小室侵袭、迁移实验中，培养24 h，si-METTL14组A2780和SKOV3细胞的穿膜细胞数均少于si-NC组，LV-METTL14组A2780和SKOV3细胞的穿膜细胞数均多于LV-NC组，分别比较，差异均有统计学意义（P均<0.01）。结论METTL14蛋白高表达的卵巢癌患者的预后更差。上调METTL14表达可提高卵巢癌细胞m6A修饰水平，促进卵巢癌细胞的增殖、侵袭和迁移；反之，下调METTL14表达则降低卵巢癌细胞m6A修饰水平，抑制卵巢癌细胞的增殖、侵袭和迁移。

简介：摘要目的观察非长链编码RNA垂体瘤转化基因3假基因(PTTG3P)对宫颈癌(CC)细胞增殖、侵袭转移及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路的影响。方法选取2018年5月至2019年5月新乡市中心医院手术切除并经病理诊断确诊的宫颈癌原发灶组织(CC)10例及其配对生物癌旁组织(NCT，癌周2 cm)。采用实时荧光定量PCR检测CC和NCT中PTTG3P mRNA的表达。检测TTG3P shPRNA对CC细胞增殖能力、侵袭能力、上皮-间充质转化(EMT)及PI3K/Akt信号通路的影响。检测PTTG3P与其亲本基因PTTG1在CC组织中的相关性及对PTTG1表达的影响。采用Pearson相关性分析研究CC组织中PTTG1与PTTG3P的相关性。结果PTTG3P mRNA在CC中的相对表达量为(4.930±1.724)，在NCT中为(1.270±0.629)，比较差异有统计学意义(t＝6.125，P<0.01)。PTTG3P shRNA可显著抑制CC细胞的增殖能力及侵袭能力(增殖48 h：1.895±0.302比1.442±0.261, t＝5.190;增殖72 h: 2.615±0.338比1.825±0.293, t＝5.657;侵袭：穿膜细胞数194±59比133±48，t＝5.387，P<0.05)，降低Snail、Slug、p-Akt和p-PI3K蛋白的表达(Snail：1.16±0.22比0.53±0.17，t＝4.532；Slug：1.02±0.19比0.74±0.13，t＝2.432；p-Akt：0.35±0.12比0.16±0.07，t＝2.735；p-PI3K：0.19±0.08比0.07±0.02，t＝2.910)，增加E-cadherin蛋白的表达(0.76±0.15比1.35±0.30，t＝3.518，P<0.05)。PTTG1 mRNA的相对表达量在CC中为(5.810±2.206)，在NCT中为(1.970±0.693)，比较差异有统计学意义(t＝6.043，P<0.01)。在CC中PTTG1 mRNA与PTTG3P mRNA相对表达量显著正相关(r2＝0.745，P<0.01)。PTTG3P shRNA可显著降低PTTG1 mRNA的相对表达量(P<0.05)。结论PTTG3P在CC患者原发灶中上调，可促进CC细胞的增殖及侵袭。其机制可能与上调PTTG1、激活PI3K/Akt信号通路，进而促进EMT过程有关。