简介:摘要目的检测长链非编码RNA FOXD3-AS1(lncRNA FOXD3-AS1)在乳腺癌中的表达并观察lncRNA FOXD3-AS1对乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响。方法利用生物信息学的方法对肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库中lncRNA FOXD3-AS1在乳腺癌中的表达量进行分析,应用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)技术检测lncRNA FOXD3-AS1在10例乳腺癌及癌旁正常组织的临床样本及细胞系中的表达。细胞计数试剂盒(CCK-8)、5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)细胞增殖检测试剂盒及集落形成实验检测敲低lncRNA FOXD3-AS1组和阴性对照组细胞增殖能力。Transwell小室法及划痕实验检测检测敲低lncRNA FOXD3-AS1组和阴性对照组细胞迁移和侵袭能力。配对样本采用配对样本t检验,或独立样本t检验。结果TCGA数据库分析结果显示lncRNA FOXD3-AS1在乳腺癌组织中表达明显升高[0.860(0.152~2.451)比0.032(0.015~0.078),P<0.01]。在10例乳腺癌及癌旁正常组织的临床样本中,利用RT-qPCR结果验证lncRNA FOXD3-AS1在乳腺癌组织中高表达(t=9.297,df=9,P<0.01)。CCK-8实验及EdU实验显示敲低lncRNA FOXD3-AS1组细胞的增殖活力明显低于阴性对照组[(15.2±0.93)%比(43.17±1.17)%,P<0.01];克隆形成实验显示敲低lncRNA FOXD3-AS1组细胞的克隆形成能力显著低于阴性对照组[(26.33±2.40)个比(66.33±3.28)个,P<0.01]。Transwell迁移实验显示敲低lncRNA FOXD3-AS1组的细胞穿膜数量显著低于阴性对照组[(93.67±2.33)个比(170.3±3.48)个,P<0.01;(30.67±1.76)个比(103.00±3.79)个,P<0.01];划痕实验显示敲低lncRNA FOXD3-AS1组细胞较阴性对照组细胞更慢的靠近划痕区域(24 h,t=6.149,df=12,P<0.01;48 h,t=7.938,df=12,P<0.01)。结论lncRNA FOXD3-AS1在乳腺癌中高表达,并具有促进乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的能力。
简介:摘要目的研究长链非编码RNA(lncRNA) FOXD2-AS1在骨肉瘤组织及细胞株中的表达及对细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的作用与机制。方法采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测36例骨肉瘤组织与癌旁组织中FOXD2-AS1的表达量并分析其表达与临床特征的关系。检测FOXD2-AS1在骨肉瘤细胞株(MG63,Saos-2,U2-OS,143B)和人成骨细胞株(hFOB1.19)的表达,并选取两种高表达的细胞株敲降其表达,通过细胞计数试剂盒(CCK-8)实验、膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙锭(PI)流式细胞术、Transwell实验检测增殖、凋亡、侵袭和迁移,并通过RNA结合蛋白免疫沉淀(RNA-IP)、蛋白质印迹法(Western blot)和ChIP检测FOXD2-AS1对EZH2和p21的影响。结果FOXD2-AS1在骨肉瘤组织中的表达高于癌旁组织(t=17.900,P<0.01);并且在体积大、TNM分期高的骨肉瘤组织中表达量更显著(χ2=4.208、9.257,P<0.01)。FOXD2-AS1在骨肉瘤细胞株中的表达量均高于人成骨细胞株(t=14.540、9.970、5.890,P<0.01),尤其是在MG63和Saos-2细胞株中,敲降FOXD2-AS1的表达能够抑制增殖(P<0.05)、促进凋亡(P<0.01)和抑制侵袭和迁移(P<0.01)。RNA-IP、Western blot和ChIP结果显示FOXD2-AS1与EZH2互作,敲降FOXD2-AS1降低了EZH2和H3K27me3与p21启动子区的分子结合。结论FOXD2-AS1能够提示临床预后不良,促进骨肉瘤细胞的恶性生物学行为,其机制可能是通过与EZH2互作,从而抑制p21的表达实现的。
简介:你知道不莱梅吗?噢——它是一个美丽快乐的地方。不莱梅在哪儿呢?噢——有梦想的地方就有不莱梅。没错儿,不莱梅这个地方,早就存在于“很久很久以前”的童话里了……