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  • 简介:本文介绍了种用于PCR植物基因组DNA快速制备方法。该方法只需将少量(4~6mg)植物叶片、适量(200μL)TE缓冲液、和粒钨合金珠放入1个2mL离心管,在多功能组织细胞研磨器振动5min破碎组织后,直接取1μLDNA溶液作为PCR模板。本方法具有简单快速、操作效率高、成本低、扩增效果好等优点,特别适合于大量样品基因型检测。

  • 标签: 水稻 DNA制备 PCR
  • 简介:大豆是主要油料作物,起源于中国,在我国种质资源十分丰富。大豆孢囊线虫(SCN)(HeteroderoglycinesIchinohe)是种土传定居性内寄生线虫,不易防治,常引起大豆黄萎病等病害,是大豆生产上危害最大病害之。大豆孢囊线虫病生理小种多达十几种,在我国,大豆孢囊线虫病病原主要为3、4号生理小种。大豆抗孢囊线虫研究直是世界上大豆抗病育种研究热点之。在本课题前期研究,根据已克隆植物抗孢囊线虫病基因保守序列设计引物,对经常规鉴定为抗(感)孢囊线虫3号生理小种15个大豆品种基因组DNA进行PCR扩增,在大豆抗病品种获得条大豆抗孢囊线虫特异条带。本研究在此基础上利用该对引物,对高抗孢囊线虫3号小种北京小黑豆基因组DNA进行扩增,并克隆了特异扩增片段,命名为RSCN3,经测序及BLAST分析,发现其DNA序列与GenBank、EMBL、DDBJ、PDB大豆似受体激酶RHG4、水稻TMK(leucinerichprotein,receptor-likekinase)基因等均有80%以上同源性。根据该DNA序列推测其氨基酸序列,在其序列中共找到21个亮氨酸,将该序列与蛋白质序列同源性进行比较,结果发现与植物受体激酶、富含亮氨酸重复蛋白激酶有较高同源性。因此推测RSCN3克隆片断为个与受体激酶有类似作用抗病相关基因RGA,并将该序列登录到GenBank,登录号为:AY580161。

  • 标签: 大豆 孢囊线虫 抗病基因同源序列 基因克隆
  • 简介:为研究株诺丽内生真菌M50抗菌和抗肿瘤生物活性并鉴定此菌株,本研究对实验室保藏诺丽内生真菌M50,采用ITSrDNA测序鉴定内生真菌M50;以金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌和枯草芽孢杆菌为指示细菌,采用滤纸片扩散法对其次生代谢产物抗菌性进行测试;以新暗色柱节孢菌、辣椒疫霉、西瓜枯萎病菌和拟盘多毛孢为指示真菌,采用平板对峙法对其抑菌性进行测试;以肝癌细胞株SMMC-7721、Lewis肺癌、前列腺癌细胞株PC-3为指示癌细胞,采用MTT法对其次生代谢产物抗肿瘤活性进行测试。内生真菌M50鉴定为Leptoxyphiumfumago;金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌和枯草芽孢杆菌抑菌圈大小分别为(13.16±0.22)mm、(12.06±0.31)mm、(7.89±0.17)mm和(11.05±0.22)mm;新暗色柱节孢菌、辣椒疫霉、西瓜枯萎病菌和拟盘多毛孢抑制率分别为50.00%、18.36%、12.35%和46.91%;肝癌细胞株SMMC-7721、Lewis肺癌、前列腺癌细胞株PC-3半抑制浓度分别为45.46μg/mL、53.33μg/mL、80.48μg/mL。说明内生真菌M50具有广谱抗菌和抗肿瘤生物活性。本研究为解决药源问题带来新希望和契机,为开发诺丽新产品提供理论依据和技术支撑。

  • 标签: 诺丽 内生真菌 次生代谢产物 抑菌 抗肿瘤
  • 简介:本研究以普通小麦品种‘中国春’染色体组DNA为封阻,用生物素(biotin-16-dUTP)标记大麦染色体组DNA作为探针,通过基因组原位杂交法解析了来自杂交组合CS×(CS+Betzes2H)杂种后代X99-13遗传组成,此材料含有42条染色体,其中1条大麦染色体,2条小麦-大麦易位染色体和39条小麦染色体,鉴定为小麦-大麦代换易位系。以小麦第二部分同源群短臂探针psr131进行RFLP分析,结果表明此代换易位系是涉及小麦染色体2B和大麦染色体2H代换易位。为进步选育小麦-大麦2H纯合易位系及利用其上α-淀粉酶抑制蛋白基因打下了坚实物质基础。

  • 标签: 小麦 大麦 代换易位系 GISH RFLP
  • 简介:葡萄浆果颜色是由花色素苷量来决定,UFGT控制花色素苷合成,Myb相关基因通过时空表达调节UFGT,从而使花色素苷在葡萄发育不同阶段和不同部位表达。不同葡萄品种调节花色素苷合成强度和模式差异造成了有色葡萄品种果皮有多种颜色,白色葡萄品种果皮是由于没有花色素苷合成。Myb相关基因家族主要有八个成员,其中MybA三个种类VlmybA1-1,VlmybA1-2和VlmybA2以及MybB两个种类VlmybB1-1和VlmybB1-2得到了较深入研究。

  • 标签: 葡萄 花色素苷 MYB UFGT 色素形成
  • 简介:针对多浆旱生植物霸王富含多酚和多糖类物质特点,在常规异硫氰酸胍方法基础上进行改进,摸索出种霸王叶和根总RNA提取方法。本方法主要通过在提取缓冲液中加入4%β-巯基乙醇以去除多酚物质干扰;用2mol/L醋酸钠(pH4.0)、水饱和酚和氯仿:异戊醇(24:1)抽提以去除多糖和蛋白物质。采用该方法提取霸王总RNA纯度高、完整性好,电泳条带清晰,OD260/OD280值在1.8~2.0之间,其质量完全可以满足进步分子生物学研究要求。

  • 标签: 霸王 多酚 多糖 改进的异硫氰酸胍法 RNA提取
  • 简介:巨胚米富含γ-氨基丁酸(gamma-aminobutyricacid,GABA)具有缓解和预防血压上升功效。本研究对江苏地方巨胚种质10217巨胚基因进行了克隆,发现其GE基因编码区有三个位点发生突变,第1090个碱基由C突变为G;第1302个碱基由T突变为G;第1467个碱基由G突变为A,提前形成个终止密码子TGA。10217ge基因是个新ge等位基因。本研究根据ge基因突变位点设计了对共显性CAPS标记GE-2,对10217/日本晴F2分离群体进行分析后,证实GE基因突变导致了10217巨胚表型。本研究开发GE-2标记能区分GEGE、GEge和gege三种基因型,可直接用于ge基因分子标记辅助选择育种和基因聚合育种。

  • 标签: 水稻 巨胚基因 分子标记
  • 简介:本研究建立了以甘蓝型油菜下胚轴为外植体步不定芽再生培养和遗传转化体系。首先,以甘蓝型油菜双11号含部分子叶节下胚轴为外植体,从6-BA和NAA配比、AgNO3以及无菌苗苗龄等方面对影响油菜组织培养因素进行了研究,建立了甘蓝型油菜快速高频步不定芽再生培养技术体系。该技术体系为,切取5d苗龄含部分子叶节下胚轴置于添加4mg/L6-BAMS基本培养基培养,5d再生出不定芽,再生频率为100%。在此基础上,进行了甘蓝型油菜遗传转化,成功地将用pFGC5941双元载体构建BnTFL1基因干扰载体转入双11号。整个转化过程,芽诱导生成只需5d,接着完成抗性芽PPT筛选需要30d,整个转化周期从播种到得到生根抗性苗仅需大约70d,而传统转化方法抗性芽诱导筛选需要90d,整个转化周期需要130d左右,大大缩短了转化周期,简化了转化过程,提高了转化效率。

  • 标签: 油菜 下胚轴 子叶节 一步再生培养 遗传转化
  • 简介:利用甘蓝型油菜与播娘蒿融合杂种不育株与甘蓝型油菜杂交、回交,得到细胞质雄性不育系NJ65A。根据pol和nap雄性不育高度相关基因orf224和orf222设计兼并引物,从NJ65A植株克隆得到个长度为675bp基因,命名为orf224-NJ65A。该基因编码224个氨基酸,氨基酸序列与orf224、orf222和orf220序列相似性分别为:70%、53%、60%。RT—PCR表达分析表明:orf224-NJ65A在所检测组织中都有表达,但在花、花蕾和茎表达量较大。推测orf224-NJ65A与细胞质雄性不育有关。

  • 标签: 甘蓝型油菜 雄性不育 克隆 表达
  • 简介:普通洋葱(AlliumcepaL.)是种开放授粉重要蔬菜作物,在洋葱品种纯度鉴定因其亲本保有定程度异质性,所以杂交种纯度百分率难以确定。为了有效地控制杂交种纯度质量,本研究从收集于各文献89对引物筛选出了12对具有多态性引物,利用筛选出12对SSR引物对39份洋葱种质进行分析,检测到47条多态性带,平均有效等位基因数为7.25。可变类平均法(Flexiblegrouplinkage)聚类分析表明,SSR标记可将39份洋葱划分为三大类,聚类分析结果与洋葱自然属性是相符合。同时发现这些标记在常规品种、亲本自交系内,甚至在杂种代中都显示出很高遗传异质性。为了促进和提升繁育品种质量鉴定准确性,本研究所提出SSR分子标记辅助育种方案,可通过选定SSR位点纯和原种田,制出杂交种。该方案能在选育几个SSR位点检测出准确杂交率,还可以有效地监测洋葱F1代杂交种纯度质量,并且这个方案可以用于任何表现出严重近交衰退异花授粉作物SSR标记分子纯度鉴定,为促进和提升繁育品种质量鉴定准确性提供帮助。

  • 标签: 洋葱 SSR标记 遗传多样性 种内异质性 纯度鉴定
  • 简介:杂种不育性是繁殖隔离种主要形式,数年来,尽管繁殖隔离在广泛生物体体进化生物学已经成为个关键问题,但仅有几个基因在繁殖隔离中被鉴定。亚洲种分为两个亚种,籼稻(indica)和精稻(japonica)。这两个亚种杂交种通常为高度不育,水稻胚个特殊种群具有广泛亲和性,与籼稻和精稻进行回交时能产生高度育性杂交种。在本研究,我们利用图位克隆方法,

  • 标签: 繁殖障碍 杂交种 亲和性 籼稻 调控因子 杂种不育性
  • 简介:WRKY转录因子是高等植物中最重要转录因子基因家族之,在植物应对生物胁迫(病原菌和病毒等)和非生物胁迫(干旱,盐害,冷害和热害等)等系列逆境应答进程中发挥重要作用。目前高等植物WRKY转录因子在调控植物应答生物胁迫和非生物胁迫相关功能进行了总结。在目前已经报道WRKY转录因子功能基础上,分析了不同植物WRKY转录因子逆境应答模式和功能特征,为未来探索作物WRKY转录因子逆境应答调控机理奠定基础。

  • 标签: 植物 WRKY转录因子 胁迫应答 功能
  • 简介:松树是世界上分布最广且最具经济价值树种之。近年来随着DNA分子标记技术发展,分子标记已经广泛应用于松树遗传多样性、亲缘关系、遗传图谱构建、基因定位及分子标记辅助选择等方向。本文从遗传多样性、亲缘关系、遗传图谱构建、基因定位及标记辅助选择等角度,评述了松树遗传与进化上常用DNA分子标记如RFLP、RAPD、AFLP和SSR等应用情况和进展。在遗传多样性方面,DNA分子标记技术已成为鉴定松树种间、种内遗传多样性有效手段,并用于指导杂交育种;在亲缘关系判定方面,可以在分子水平上阐明生物系统演化及分类情况,揭示育种亲本选配和种质资源有效利用;在松树遗传图谱构建和基因定位及标记辅助选择方面也取得了显著进展,构建了二十多张连锁图谱,并对其生长、材性和抗性等性状进行了基因定位,获得了些重要与抗病相连锁标记。

  • 标签: 松树 分子标记 遗传 进化
  • 简介:寄主诱导基因沉默(hostinducedgenesilencing,HIGS)技术是基于RNAi而发展起来新技术,它既可以从反向遗传学方向鉴定植物病原真菌基因功能,又可以通过在寄主植物中表达沉默病原物特定基因HIGS载体,以达到控制病原菌扩展,提高作物抗病性目的。因此HIGS在研究植物病原真菌致病机理和作物抗病育种中极具应用前景。HIGS技术从报道以来在植物保护领域得到了广泛运用,其适用范围广,可以在多种病原真菌中进行应用,特别对于难培养和难以进行遗传转化真菌。并可以在植物抗病育种中发挥更大空间,为病害防治提供可靠策略。本综述总结概括了HIGS技术原理和它在植物病原丝状真菌研究最新进展,为该技术在更多植物病原真菌使用提供参考依据。

  • 标签: 寄主诱导基因沉默 丝状真菌 致病基因 抗病育种
  • 简介:水淹胁迫是植物遭受主要非生物胁迫之,对作物生长发育、产量、品质等都会带来严重影响,全面解析植物耐涝机制,对选育耐涝品种具有重要意义。高通量转录组测序技术以其数字化信息、高灵敏度、广泛检测范围及重复性好等优点,已被广泛用于生物体多种功能研究。目前在水稻、玉米、油菜、黄瓜、大豆等多个物种,已有从转录水平分析植物对水淹胁迫分子响应机制相关研究报道,这对于深度解析植物耐涝分子响应机制和加快作物耐涝品种选育具有重要意义。但目前尚未有转录组测序技术在植物水淹胁迫应用方面的综述。因此,本研究着重综述了植物水淹胁迫测序组织及时间点选择、各阶段基因表达水平、GO功能富集、小RNA功能特征几个方面,并展望了新代测序技术在植物抗逆机理研究应用前景。

  • 标签: 植物水淹胁迫 转录组测序 差异表达基因 GO功能富集
  • 简介:用DNA分子标记技术,对21份番茄种苗进行黄化曲叶病毒病(TYLCV,TY)抗病基因及病毒病感染检测。结果表明:9份材料携带ty-1/ty-1、ty-2/ty-2和Ty-3a/ty-3a抗性基因,1份材料携带ty-2/ty-2和Ty-3a/ty-3a抗性基因;自根苗欧迪斯、嫁接苗金棚/11-8、金棚/荣威和金棚/双飞8号已经感染TY。种苗进行田间种植,其中携带抗性基因番茄品种没有发生TY,抗性较强;在已感染TY4份材料中,欧迪斯田间表现感染TY,其余3份未发生TY。试验表明,TY分子标记技术检测可靠,可以在番茄育苗生产中推广应用。

  • 标签: 番茄 TYLCV 分子标记 抗性基因 检测
  • 简介:转运体是生物体内类跨膜蛋白,主要参与离子以及些小分子吸收、转运和隔离。百草枯是种联吡啶类速效触杀灭生性除草剂,主要作用于光系统Ⅰ光合膜系统,影响电子传递。在正常生理条件下,植物拥有解毒系统,能除去叶绿体活性氧。科学家针对生物对百草枯抗性进行了系列研究和假说,其常见抗性机制如抑制转运、隔离到液胞、增强氧自由基清除酶活性等。其中,抑制转运和隔离到液胞较为合理。深入研究转运体对百草枯关系,是培育转基因抗百草枯植物重要基础。本文主要综述了转运体在百草枯抗性可能作用。

  • 标签: 转运体 百草枯 除草剂 抗性机制
  • 简介:DNA分子标记为直接从遗传物质进行育种材料选择提供了有效手段,在玉米育种得到广泛应用。随着DNA分子标记技术不断发展,功能标记开发与应用成为个新发展方向。功能标记与重要农艺性状直接相关,具有育种材料选择直接性和准确性。为了在玉米育种更广泛地应用功能标记辅助选择,本综述简要介绍了功能标记含义和功能标记开发策略。在此基础上,对玉米功能标记开发与应用研究进展进行了综述。

  • 标签: 玉米 DNA分子标记 功能标记