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  • 简介:为建立简单高效黄瓜转基因技术体系,本研究以携带有抗除草剂Bar基因农杆菌工程菌浸泡处理开花期黄瓜嫩梢,进行活体植株转基因方法研究。研究结果表明最佳转化体系为:表面活性剂silwet-77适宜浓度0.01%-0.05%;菌液浸泡最佳位置为顶部以下10cm嫩梢,最适子房发育时期为开花前5-12d子房;农杆菌菌株EHA105浸染效果优于LBA4404;3次重复浸泡处理有利于提高转化频率。黄瓜苗期除草剂抗性筛选适宜浓度为17%草胺膦1100倍稀释液。研究获得除草剂抗性植株1320株,PCR阳性植株36株,其中30株经Southern斑点杂交后有阳性信号,最高转化效率为9.5%。

  • 标签: 黄瓜 转基因 活体植株 抗除草剂
  • 简介:简要介绍5种传统、最常用DNA分子标记(RFLP、RAPD、AFLP、SSRSNP)技术原理及它们优缺点,也总结了TRAP这种新产生分子标记技术原理、优点及应用前景。综述这几类分子标记在花生种质进化、遗传多样性分析、分子图谱构建及抗虫、抗病等方面的研究。利用SSRRAPD标记能够发现野生种栽培种多态性进而实现分子标记花生遗传多样性分析,可以将许多花生品种分为不同品种群,能够花生进行种质进化研究。RFLPAFLP技术利于花生图谱构建,利用DNA中特定限制性酶切位点碱基改变及酶切位点之间分予重排,可以发现花生品种间DNA许多多态性位点,进而绘制分子标记图谱。AFLP技术花生青枯菌花生抗黄曲霉研究方面有很大进展。RAPD技术花生根瘤菌、花生线虫病等方面已有显著进展。最后对分子标记在花生育种中应用前景进行了简单展望。

  • 标签: 花生 分子标记 辅助育种
  • 简介:为探索菜用甘薯抗寒机理,以‘宁菜3号’、‘CH-2’、‘福薯18’、‘福薯10号’4个菜用甘薯品种为试验材料,采用温室越冬人工气候室模拟低温胁迫方法,菜用甘薯抗寒性与POD、SOD活性及可溶性蛋白质含量间关系进行了研究。结果表明:受低温胁迫后,‘宁菜3号’、‘CH-2’POD活性增加速度快、活性强、酶活力持久,SOD活性高,SOD活性及可溶性蛋白质含量下降幅度相对较小。低温胁迫后,POD、SOD活性变化及可溶性蛋白质含量不同可能是引起菜用甘薯抗寒性差异原因之。本研究菜用甘薯栽培品种选择具有指导意义,为进步探索菜用甘薯抗寒机理提供参考。

  • 标签: 菜用甘薯 越冬存活率 低温胁迫 POD活性 SOD活性
  • 简介:利用转sck基因高代稳定水稻亲本组合为材料,研究外源sck基因遗传表达特性。结果表明:外源sckhpt基因都能自交连锁稳定遗传到T11并表达,且连锁基因表达活性可杂交转移到不育系杂交组合中,外源sck基因在杂种F2代以单基因显性遗传3:1模式进行分离,但也出现自交hpt基因丢失,杂交hpt基因甚至sck基因未获得成功转移现象。田间抗虫性观测表明,转sck基因水稻钻蛀性螟虫抗性不足,卷叶螟具有定抑制作用。外源sck基因在转化或杂交转育亲本及组合中均获得表达,且具有空间分布特性基因累加效应,基本为叶片表达活性高于叶鞘。

  • 标签: 转基因水稻 sck基因 hpt基因 遗传表达
  • 简介:为了从蛋白质分子生物学方面研究白菜型冬油菜不同抗寒品种低温逆境及恢复条件下相关蛋白响应机制,揭示大田生产中冬油菜抵御突发骤变低温伤害抗寒机理,以超强抗寒冬油菜品种陇油7号弱抗寒品种天油2号为材料,培养箱培养至幼苗五叶期时,模拟北方寒旱区冬油菜返青期倒春寒环境,运用双向电泳结合质谱技术,分析其幼苗低温(4℃)-恢复(20℃)-低温(4℃)-恢复(20℃)过程中存在蛋白及其差异表达量。研究表明低温胁迫与恢复过程中,有2个蛋白点发生了显著差异丰度变化,它们分别是半胱氨酸型氧化还蛋白过氧化物酶(定义为1号蛋白)种未知蛋白(2号蛋白)。且不同抗寒性品种存在2种不同蛋白差异表达机制,1号蛋白抗寒性较弱天油2号低温胁迫恢复过程中表现出上调-下调-上调变化趋势,抗寒性较强陇油7号中此蛋白次低温胁迫后消失,而出现另外种未知蛋白(蛋白2),且低温胁迫恢复过程中也表现出上调-下调-上调变化趋势,并且表达量高于天油2号中蛋白1,因此,这种未知蛋白2可能是陇油7号抗寒性强于天油2号原因之

  • 标签: 白菜型冬油菜 低温胁迫 双向电泳 蛋白质
  • 简介:利用RT-PCR技术从海岛棉品种新海21中克隆1个WRKY基因,GenBank数据库中比对发现其与陆地棉GhWRKY32序列高度同源,因此命名为GbWRKY32。该基因ORF为1077bp,编码358氨基酸,预测分子量为39.288kD,等电点为5.02。序列分析表明该基因含有个WRKY保守结构域,锌指结构为:C-X5-C-X23-H-X1-H,属于WRKY转录因子家族Ⅱ类D组成员。GbWRKY32蛋白为疏水性蛋白,不具有跨膜区信号肽结构。GbWRKY32转录因子不具有转录自激活活性。本研究成功构建GbWRKY32基因植物表达载体并转入根癌农杆菌EHA105菌株中,这有助于该基因功能后续研究。

  • 标签: 海岛棉 GbWRKY32 转录自激活活性 植物表达载体
  • 简介:以番茄为试材,研究热处理番茄硬度、Vc含量、可滴定酸含量、可溶性固形物含量贮藏期影响。结果表明:55℃处理番茄硬度最大,其次是38℃52℃。说明热处理会减少番茄果实水分,增加果皮韧性;热处理32℃52℃贮藏期番茄可溶性固形物保存效果较好;高温短时热处理贮藏期番茄Vc保存效果较好;55℃热处理可滴定酸含量较高。52℃番茄热处理延长番茄贮藏时间效果明显。

  • 标签: 热处理 番茄 品质 耐贮性
  • 简介:为研究株诺丽内生真菌M50抗菌抗肿瘤生物活性并鉴定此菌株,本研究实验室保藏诺丽内生真菌M50,采用ITSrDNA测序鉴定内生真菌M50;以金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌枯草芽孢杆菌为指示细菌,采用滤纸片扩散法其次生代谢产物抗菌性进行测试;以新暗色柱节孢菌、辣椒疫霉、西瓜枯萎病菌拟盘多毛孢为指示真菌,采用平板对峙法其抑菌性进行测试;以肝癌细胞株SMMC-7721、Lewis肺癌、前列腺癌细胞株PC-3为指示癌细胞,采用MTT法其次生代谢产物抗肿瘤活性进行测试。内生真菌M50鉴定为Leptoxyphiumfumago;金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌枯草芽孢杆菌抑菌圈大小分别为(13.16±0.22)mm、(12.06±0.31)mm、(7.89±0.17)mm(11.05±0.22)mm;新暗色柱节孢菌、辣椒疫霉、西瓜枯萎病菌拟盘多毛孢抑制率分别为50.00%、18.36%、12.35%46.91%;肝癌细胞株SMMC-7721、Lewis肺癌、前列腺癌细胞株PC-3半抑制浓度分别为45.46μg/mL、53.33μg/mL、80.48μg/mL。说明内生真菌M50具有广谱抗菌抗肿瘤生物活性。本研究为解决药源问题带来新希望契机,为开发诺丽新产品提供理论依据技术支撑。

  • 标签: 诺丽 内生真菌 次生代谢产物 抑菌 抗肿瘤
  • 简介:本研究以广西野生金线莲为材料,对植株形态授粉特性进行了观测,研究蒴果成熟度、培养基无机盐浓度、植物生长调节剂及有机添加物无菌播种萌发影响。结果表明:广西金线莲植株外形优美,人工授粉结实率达到84.8%;蒴果成熟度灭菌消毒种子萌发有显著影响,授粉后生长75~90d蒴果为最佳外植体材料;相较于MS1/4MS,1/2MS培养基种子萌发最快;培养基中细胞分裂素6-BA、ZTKT种子萌发作用不明显,生长素NAA为0.3mg/L时种子萌发有明显促进作用;添加香蕉汁种子萌发及之后生长具有显著促进效果。

  • 标签: 广西金线莲 种源特性 无菌播种 萌发
  • 简介:以阿蒂擎天凤梨乙烯处理不处理植株为材料建立抑制性差减杂交文库中,筛选到个被乙烯诱导并与已知植物谷胱甘肽-S-转移酶(GST)同源cDNA片段,通过RACE技术得到该基因全长eDNA序列。序列分析表明,该基因可能属于thioredoxin-1ikesuperfamilyGSTC_familysuperfamily两个超家族中成员。利用半定量RT—PCR检测该基因表达量乙烯处理后先会在1h显著升高,然后随时间逐步降低,说明乙烯作为种逆境胁迫相关激素,可在短时诱导凤梨中GST表达。推测其受到外源乙烯信号诱导后,方面可能参与植物体内解毒作用,另方面可能参与花青素合成调控运输。本实验中GST作为观赏凤梨中个新发现GSTs家族成员,对于研究热带花卉中GSTs家族特点提高其抗逆性品质具有重要理论意义实用价值。

  • 标签: 谷胱甘肽-S-转移酶 阿蒂擎天凤梨 乙烯 表达分析
  • 简介:葡萄浆果颜色是由花色素苷量来决定,UFGT控制花色素苷合成,Myb相关基因通过时空表达调节UFGT,从而使花色素苷葡萄发育不同阶段不同部位表达。不同葡萄品种调节花色素苷合成强度模式差异造成了有色葡萄品种果皮有多种颜色,白色葡萄品种果皮是由于没有花色素苷合成。Myb相关基因家族主要有八个成员,其中MybA三个种类VlmybA1-1,VlmybA1-2VlmybA2以及MybB两个种类VlmybB1-1VlmybB1-2得到了较深入研究。

  • 标签: 葡萄 花色素苷 MYB UFGT 色素形成
  • 简介:针对多浆旱生植物霸王富含多酚多糖类物质特点,常规异硫氰酸胍方法基础上进行改进,摸索出种霸王叶根总RNA提取方法。本方法主要通过提取缓冲液中加入4%β-巯基乙醇以去除多酚物质干扰;用2mol/L醋酸钠(pH4.0)、水饱和酚氯仿:异戊醇(24:1)抽提以去除多糖蛋白物质。采用该方法提取霸王总RNA纯度高、完整性好,电泳条带清晰,OD260/OD280值1.8~2.0之间,其质量完全可以满足进步分子生物学研究要求

  • 标签: 霸王 多酚 多糖 改进的异硫氰酸胍法 RNA提取
  • 简介:β-1,4-葡聚糖内切酶(endo-β-1,4-glucanase,EGase)植物组织生长、开花、果实成熟、器官脱落等方面都具有非常重要作用。本研究克隆个新水稻β-1,4-葡聚糖内切酶家族基因OsGLU16。序列分析表明该基因位于水稻第8号染色体,cDNA全长1827bp,包含个1572bp开放阅读框,编码523个氨基酸残基。蛋白质同源性分析表明,OsGLU16基因编码蛋白第54~第516个氨基酸残基区域具有高度保守GH9催化结构域。本研究成功构建了OsGLU16基因过表达载体pCaMV35S—OsGLU16-EGFP,并获得了转基因水稻植株。植株表型分析表明,与野生型相比,过表达株系表现为株高穗长显著下降。本研究初步探明了OsGLU16基因过表达转基因水稻植株表型特征,这为进步丰富β-1,4-葡聚糖内切酶基因家族水稻生长发育过程中作用提供理论基础。

  • 标签: β-1 4-葡聚糖内切酶 水稻 OsGLU16 克隆 过表达
  • 简介:高干率、高胡萝卜素甘薯新品种福薯604是以广薯87为母本计划集团杂交选育而来,2016年通过国家甘薯新品种鉴定委员会鉴定,鉴定编号为国品鉴甘薯2016008。通过福薯604形态特征、生产力、生长动态、品质特性及抗病性等生理特点进行多年多点研究,结果表明:福薯604鲜薯产量薯干产量分别比对照广薯87分别增产17.15%21.69%,薯块干物质含量达到30.43%,食味、外观品质优,同时富含多种营养物质,其中胡萝卜素含量达到7.6mg/100g,中抗蔓割病I型薯瘟病,适于中国南方甘薯种植区域种植。

  • 标签: 甘薯 高淀粉 高胡萝卜素 福薯604
  • 简介:为了探讨脲类细胞分裂素PBU嘌呤类细胞分裂素6-BA尾叶桉愈伤分化、愈伤组织POD基因表达及酶活性影响,将尾叶桉幼苗下胚轴切段接种添加PBU+IAA、6-BA+IAAPBU+6-BA+IAA三种激素组合SPCa培养基中,通过统计愈伤组织分化情况、检测POD基因表达差异酶活性变化来开展研究。6-BA+IAA组合条件下,愈伤组织褐化率高达84.71%;PBU+IAA组合下,愈伤组织褐化率为30.56%;PBU+6-BA+IAA组合时,褐化率最低,为24.09%,胚性愈伤组织时比例最高,达47.73%。与6-BA相比,PBU诱导出愈伤POD酶活性显著升高。通过实时定量PCR(real-timequantitativePCR,qPCR)检测6个POD基因表达变化,设6-BA+IAA诱导所得愈伤相对表达量为1,PBU+IAA诱导所得愈伤中BP1,BP4,BP5表达上调,分别为1.88、1.63、2.01;PBU+6-BA+IAA诱导所得愈伤中BP3、BP4、BP6表达上调,分别为1.88、1.96、1.93。从实验结果分析,PBU6-BA有协同效应,通过增强POD酶活性,减轻褐化、促进胚性愈伤分化。PBU6-BA不同POD同工酶表达影响不同。本研究可为深入研究PBU6-BA协同作用分子机理提供参考。

  • 标签: 尾叶桉 PBU 6-BA POD 基因表达差异
  • 简介:本实验形态学分析基础,采用5中国传统菊花芽变品种2组形态相似品种,运用随机扩增DNA多态性(randomamplifiedpolymorphicDNA,RAPD)分子标记方法其进行了品种鉴定。通过反复试验,建立了稳定RAPD反应体系;从22个20碱基随机引物中筛选出4个高效引物,扩增出13条带,扩增多态性片段多在501~1000bp之间,其中有2个引物(ch1.21ch1.25)能将试验中7组材料全部清楚地区分开。研究结果表明:4个高效引物RAPD分析能够有效地将选定样本区分开。因此作者提出RAPD分析方法可以应用到菊花芽变及相似品种鉴定中。这就为进步开发更多RAPD随机引物,开展菊花品种鉴定保护工作提供参考资料。

  • 标签: 菊花 芽变 相似品种 RAPD
  • 简介:番茄颜色色素含量是决定果实品质两个重要特性本研究中,使用绿色紫色番茄植株分别作为母本父本,分别产生了6个遗传群体,即P1、P2、F1、BC1、BC2F2。通过数量性状多代联合分析研究果实颜色色素含量遗传规律。结果表明,绿色紫色果之间果实颜色最佳遗传模型为MX1-AD-ADI。BC1、BC2F2代色度值主基因遗传率分别为82%、59%77%,多基因遗传率分别为8%、10%13%。番茄红素含量遗传符合MX2-ADI-AD模型,BC1、BC2F2主基因遗传率分别为64%、74%93%,而多基因遗传率分别为20%、0%0%。叶绿素遗传模型为MX1-AD-ADI,BC1、BC2F2主基因遗传率分别为59%、74%59%,多基因遗传率均为0%。胡萝卜素遗传符合MX2-ADI-ADI模型,BC1、BC2F2主基因遗传率分别为76%、4%/5%54%,而多基因遗传率分别为0%、0%13%。

  • 标签: 番茄(Solanum lycopersicum) 果实颜色 色素 遗传率 遗传模型
  • 简介:不同种皮颜色花生即彩色花生,是由普通花生通过多世代分离选育而成,种皮颜色包括深紫条纹、浅紫条纹、红色、红-白相间、紫黑色等类别。由于彩色花生营养丰富,并且富含花色苷类物质而倍受人们喜爱,市场前景广阔。但是,目前彩色花生加工品质特性并不清楚。外形性状评价实验表明,5种花生种皮颜色、百果重、百仁重出仁率具有较大差异;脂肪脂肪酸评价发现,5种花生都不是最适宜油用花生品种选择,但其均富含油酸、亚油酸花生烯酸,具有较好食用价值;蛋白质含量最高是‘铜仁珍珠’花生,其次是‘黑珍珠’,含量最低为‘紫魁’,且其富含氨基酸也有着显著差异;此外,种皮花生生品感官评价影响加大,深色种皮花生种皮香味影响大,甜味脆度影响小。本研究选用贵州地方特色品种‘铜仁珍珠’引进‘黑珍珠’、‘红-白花’、‘四粒红’‘紫魁’5种种皮颜色差异较大花生,营养成分、质构特性、生品及烘烤制品挥发性风味物质,以及种皮色素进行综合研究,旨在进步了解不同种皮颜色花生品质特征特性,为彩色花生更好地推广开发利用提供科学依据。

  • 标签: 彩色花生 品质特性 感官评价
  • 简介:采用农杆菌介导法将含有ipt基因bar基因双价表达元件导入籼稻R527及粳稻EY105。对转化植株进行PCR检测、RT—PCR鉴定及抗除草剂特性遗传分析,获得稳定遗传转基因株系。转基因植株除草剂草胺磷表现出良好抗性,分蘖数增加,植株矮化,生育后期叶片叶绿素含量及过氧化物酶活性高于对照,转基因植株茎叶衰老延缓,植株抗冷性提高,并稳定遗传至T4代。

  • 标签: 水稻 ipt—bar双价基因 转基因 叶片衰老
  • 简介:SSRSNP被推荐为玉米品种DNA指纹鉴定优选标记技术。本研究选用大面积推广11套玉米杂交种及其亲本作为试验材料,基于SNP芯片分型平台SSR荧光毛细管电泳平台分析比较两种标记在玉米品种真实性鉴定中应用。基于上述两种检测平台获得3072个SNP位点40SSR引物基因型数据,分析比较各个参数。结果显示:(1)两种标记数据获得率均较高,3072个SNP位点平均数据获得率为98.4%,40SSR引物平均数据获得率为99.47%。(2)两种标记均具备较高品种区分能力,3072个SNP位点平均MAF(minorallelefrequency)值为0.357,MAF值大于0.30占71%,平均DP(discriminationpower)值为0.515,DP大于0.5占56%;40SSR引物平均PIC(polymorphisminformationcontent)值为0.605,PIC大于0.51有32,平均DP值为0.745,DP值大于0.71有29。(3)两种标记位点鉴定样品杂合率、亲子关系方面结果是,样品杂合率均介于0.4~0.6之间,平均杂合率分别为0.5250.514;SNP数据显示符合亲子关系位点百分比介于95.2%~99.9%之间,SSR数据显示符合亲子关系位点介于36~40个之间。综上所述,SSRSNP两种标记在数据完整性、区分品种能力、位点稳定性等方面差别较小。

  • 标签: 玉米 SSR SNP 真实性鉴定