简介:目的:建立高转移肝癌细胞株,研究其肿瘤干细胞生物学特征,为靶向人肝癌干细胞治疗提供有价值的细胞模型。方法:肝癌细胞系Bel7402接种裸鼠皮下,成瘤后,取小鼠肺部转移灶,通过机械分离法,获取肺部肝转移细胞,体外扩大培养后,再次接种裸鼠。如此反复接种裸鼠,获得稳定肺转移肝癌细胞株Bel7402-V13。采用无血清悬浮培养及PKH26染色确定Be17402-V13中肿瘤干细胞的存在。流式细胞术分析亲本Bel7402和Bel7402-V13中肿瘤干细胞标志物ESA的表达情况,分选Bel7402和Bel7402-V13中ESA+细胞并进行体外生物学特征研究及裸鼠致瘤实验。结果:建立高转移Bel7402-V13细胞株,Bel7402-V13细胞无血清悬浮培养7d后形成的细胞球体中存在单个PKH26阳性细胞。与Bel7402中ESA+细胞相比,流式分析显示干细胞标志物[3人比例高转移丑<;17402-V13显著提高5.67倍(17.6±0.4¥33.1±1.5)。3(;17402-V13中ESA+细胞具有更强的自我更新能力[成球率:(94.8±7.5)%vs(52.3±6.9)%,P<0.01],侵袭能力提高1.51倍(397.7±79.4v262.0±40.1,P<0.01),耐药能力也显著增强(IC5。:0.286v0.196,P<0.01),ESA+细胞Bel7402-V13在裸鼠皮下接种2xl02个细胞3月即可致瘤(3/6),而接种2xl02个ESA+细胞Bel7402细胞3月才能致瘤(1/6)。结论:获得高转移肝癌细胞株Be17402-V13,伴随ESA+细胞增加,其体内外功能显著增强,为肝癌干细胞的靶向治疗提供有价值的细胞模型。
简介:目的探讨青藤碱(SIN)对肾移植大鼠Th1细胞生物学特性的影响,为SIN在器官移植免疫治疗的临床应用提供理论依据。方法用F344→Wistar建立同种异体肾移植急性排斥反应实验动物模型36只,术后按施加的处理因素不同将其分为3组,每组12只:(1)NS组,术后仅予生理盐水,每天3mL/kg;(2)SIN组:术后第1天起每天应用SIN30mg/kg;(3)CsA组:术后第1天起每天应用CsA2.5mg/kg。3组给药方法均为腹腔注射。另建立Wistar→Wistar同基因肾移植模型12只,作为对照组,术后每天予以生理盐水3mL/kg腹腔注射。从每组中随机抽取6例,观察受体鼠的存活时间,每日尿量及泌尿的持续时间。另6例于术后第7天处死,取下腔静脉血检测血肌肝(Cr)及尿素氮(BUN)水平;应用ELISA法检测静脉血TNF-β、IFN-γ,IL-2表达水平;完整留取移植肾行病理切片,观察病理改变。结果对照组受体鼠长期存活,均>180d,NS组受体鼠在术后10d内死亡。平均存活8.00±2.10d,SIN组受体鼠平均存活10.67±1.21d,SIN组与NS组相比,存在显著性(P<0.05)。其他组与NS组相比较,尿量增加。泌尿持续时间延长。肾功能指标(Cr、BUN的水平):对照组水平最低,NS组Cr、BUN均明显高于SIN、CsA组,差异有显著性。静脉血、TNF-β、IFN-γ,IL-2的表达水平,在对照组中不能检出或很低。NS组的水平最高,与SIN组、CsA组比较存在显著性差异。结论SIN通过影响Th1细胞主要生物学特性,使TNF-β、IFN-γ,IL-2的表达水平降低可能是其对同种异体肾移植大鼠急性排斥反应起免疫抑制作用的新机制。
简介:摘要目的探讨沉默肝细胞生长因子受体c-Met表达对结肠癌细胞生物学特性的影响。方法利用HCT116结肠癌细胞,通过RNA干扰技术建立c-Met瞬时转染的细胞模型,同时设阴性对照(siRNA-NC)和空白对照。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot检测细胞中c-Met的表达,通过细胞增殖实验、细胞周期和凋亡测定、细胞侵袭实验、细胞迁移实验等观察沉默c-Met对HCT116结肠癌细胞生物学特性的影响。结果siRNA-Met组、siRNA-NC组和空白对照组细胞c-Met mRNA的表达水平分别为0.32±0.26、1.05±0.23和1.01±0.03,c-Met蛋白的表达水平分别为0.24±0.03、1.18±0.11和1.23±0.06,siRNA-Met组均显著降低(均P<0.05)。转染后72 h,siRNA-Met组的吸光度值为1.13±0.05,低于siRNA-NC组(1.53±0.07,P<0.01)和空白对照组(1.48±0.08,P<0.01)。siRNA-Met组G2/M期细胞比例为(14.65±1.41)%,高于siRNA-NC组[(5.63±0.71)%,P<0.05]和空白对照组[(5.07±0.70)%,P<0.05],并且siRNA-Met转染后,细胞周期调节蛋白Cdc25c和cyclin B1的表达水平显著下降。siRNA-Met组细胞凋亡率为(5.85±0.35)%,显著高于siRNA-NC组[(0.91±1.14)%,P<0.05]和空白对照组[(1.00±0.17)%,P<0.05],并且siRNA-Met转染后,凋亡相关蛋白Bcl-2的表达水平显著下降,Bcl-2关联X蛋白(BAX)表达水平显著升高。siRNA-Met组的细胞迁移率为(51.33±8.62)% ,显著低于siRNA-NC组[(102.33±6.43)%, P<0.05]和空白对照组[(100.00±3.72)%,P<0.05]。siRNA-Met组穿透至基底膜下室面的细胞数为(47.50±10.60)个,少于siRNA-NC组[(102.50±10.61)个,P<0.05]和空白对照组[(100.00±5.33)个,P<0.05],并且siRNA-Met转染后,侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9的表达水平显著下降。结论c-Met在维持结肠癌细胞生物学特性中发挥重要作用,c-Met抑制剂可能在结肠癌治疗中具有重要价值。
简介:柳婉与另外九位姐妹,终于找到了一份推销人寿保险的工作。保险公司可不再是前些年的吃太平饭的大热门单位,推销寿险并不轻松,日子也并不好过。不过话又说回来,如果还是像以往一样日子好过的话,又无论如何也轮不到小柳她们的。才上班一个星期,柳婉就在电话里向我诉苦:“四处吃闭门羹,有时推销保险的比买保险的人还多。眼看一个星期就白白地滑过去了,还一笔业务也没做成。公司是按效益发工资的,没有效益不仅没有工资,而且到三个月的试用期满时,如果其业绩还不行就要你走人。”一个月之后的一天,柳婉在电话里情绪低沉地说有事要见我。在咖啡屋里,她一边用小茶匙搅动着苦咖啡,一边叹气,诉说她今天就差点被一个道貌岸然的色狼客户占了便宜,“这做寿险工作真比这苦咖啡还要苦。这工作我已无法继续干下去了。”她已写好辞职书,今天她约我见面就是为了最后征求我的意见。她把我当成大哥哥,觉得我的社会阅历、社会经验要比她丰富些。我劝她,这个社会上毕竟是好人多,心术不正的毕竟是极少数。同时给她出主意:害人之心不可有,防人之心不可无。为防不测,你不妨始终约一名女同伴,两人结伴而行,而不要单枪匹马。不要怕同伴抢了你的业务,这样你们两人既有安全感,又可相互打圆场,有利于业务...
简介:目的:观察人脐带间充质干细胞(humanumbilicalcordderivedmesenchymalstemcells,hUCMSCs)体外长期传代扩增后形态表型、增殖及分化特性的变化。方法:分别以双酶消化及组织块法分离培养hUCMSCs;细胞传至18代(P18),观察细胞形态、生长曲线、克隆形成、细胞周期、干细胞表型、多向分化能力的变化,全面评测连续传代对hUCMSCs生物学特性的影响。结果:双酶消化结合组织块法可高效分离获得大量hUCMSCs,细胞稳定传代并保持间充质干细胞特性;早期细胞多呈长梭形或纺锤形,至P18时呈多角不定型且细胞体积变大,胞浆增加明显。传代至P18后,hUCMSCs的群体倍增时间增加至60h以上,绝大多数细胞处于G0/G1期,且成纤维细胞集落形成单位(colony-formingunit-fibroblast,CFU-F)形成降低,克隆集落减小。hUCMSCs可表达且不因持续传代丢失间充质干细胞标记,但仅早期传代细胞表达多能干细胞标记Oct-4及SSEA-4。特异性染色及相关基因表达检测提示P18hUCMSCs的成脂肪、成软骨及成骨诱导分化能力较早期传代细胞减弱。结论:hUCMSCs是具备高增殖活性和多向分化特性的间充质干细胞群,体外长期传代扩增的hUCMSCs呈现一定的复制性衰老趋势,但不会丢失干性,可稳定表达间充质干细胞特异性表面标记并保持分化活性。
简介:目的探讨人腹膜中是否含有间充质干细胞(Mesenchymalstemcells,MSC),并研究其生物学特性。方法腹膜取自接受胃大部切除及腹腔淋巴结清扫术的胃癌患者。将腹膜剪碎,Ⅰ型胶原酶消化后以低密度接种,2周后计算细胞群中成纤维细胞集落形成单位(Colony-formingunit-fibroblast,CUF-F)数量;流式细胞分析贴壁细胞表型;定向诱导2周后,碱性磷酸酶和油红O染色,观察细胞体外成骨和成脂肪能力。结果贴壁的细胞呈成纤维细胞样,消化的腹膜细胞群中,CFU-F比例平均为0.574‰(0.26‰~0.84‰)。流式分析显示,细胞均一表达CD29、CD44和CD73,不表达CD31、CD34和CD45。成骨细胞定向诱导后,细胞呈现碱性磷酸酶活性;成脂诱导后细胞内出现脂肪滴,油红O染色阳性。结论人腹膜中富含MSC,可作为一个含有生物支架的干细胞来源。