简介:目的探索构建针对人类核转运蛋白2(KPNA2)基因的重组慢病毒干扰RNA(shRNA)载体的方法,研究其对人骨肉瘤细胞株MG63的沉默效率。方法针对KPNA2基因设计小片段干扰序列。加入AgeⅠ酶和EcoRⅠ酶酶切位点,根据设计好的序列合成单链DNAoligo并退火合成双链DNAoligo。将合成好的双链DNAoligo与GV115载体重组,形成GV115-shRNA慢病毒载体。聚合酶链式反应(PCR)法鉴定筛选出阳性重组子,经测序后包装慢病毒载体。荧光法测定病毒滴度,重组慢病毒感染骨肉瘤细胞株MG63,通过显微镜观察细胞中绿色荧光蛋白(GFP)的表达来计算其转染效率。RT-PCR法检测重组慢病毒RNA干扰载体对人骨肉瘤细胞株MG63中KPNA2表达的沉默效率。实验结果数据以均数±标准差(sx±)表示,应用SPSS13.0统计软件分析,两组均数间的比较采用t检验,以P<0.05为差异有统计意义。结果经PCR分析和测序证实,成功构建KPNA2基因重组慢病毒RNA干扰载体;荧光法测定病毒滴度为4×108TU/ml;荧光显微镜下观察GFP,显示细胞感染效率达到80%以上;RT-PCR检测对照组及实验组KPNA2mRNA表达分别为0.991±0.087vs.0.216±0.012,差异有统计学意义(P<0.01)。结论KPNA2基因重组慢病毒RNA干扰载体构建成功,并有效干扰人骨肉瘤细胞株MG63中KPNA2mRNA的表达。
简介:小华向班主任请假说:'我被KS病毒感染了,想请假三天。'班主任问:'这病毒没听说过啊,严重吗?会不会传染?'小华说:'很严重,但这病毒只有学生会感染。'班主任感到很惊讶,问:'KS到底是什么病毒?'小华小声地说:'考试。'
简介:摘要笔迹检验鉴定意见作为科学证据的一种,具有双重价值——法律价值和科学价值。对笔迹检验鉴定意见的审查站在不同的价值视角会有完全不同的具体审查内容,而实践中常常不注重这两种证据价值的区分,导致审查内容的不完善和具体审查过程的混乱。将笔迹检验鉴定意见的审查内容在科学性和法律性两方面分别细化明确,既能保证鉴定意见的形成过程符合相关法律法规的程序性规定,又能保证鉴定意见的高度科学性。
简介:主持人:一场网络攻击席卷全球,多家机构成了攻击目标,其中包括英国国家健康体系、中国的多所大学,以及美国联邦快递公司。攻击者是为了谋财,要求支付赎金。阿尔蒂,知道这次事件是怎么开始的吗?阿尔蒂(记者):我们目前还不清楚每一次攻击的确切时间,也不清楚这些攻击是单独行动还是联合作案,不过我们确实了解到这次攻击的范围很广——在一张攻击热点地图上,橙色的小光点遍布欧洲、美国、印度、巴西、俄罗斯和中国。我们收到来自西班牙和英国的报告。在英国国家健康体系中,多家医院无法正常运作,机能陷入瘫痪。你知道,医生和护士被彻底“关在门外”了,他们无法调用患者的档案。我之所以这么说……之所以说“关在门外”,我的意思是,这是一起勒索软件攻击。勒索软件是一种黑客技术。黑客利用这种技术,找到潜入你电脑的办法,比如给你发封邮件——那其实就是个自带恶意软件的木马病毒。你瞧,拿到你的文件后,黑客会突然下手,对文件进行加密,让你再也无法读取这些文件。文件都被锁起来了,若想解锁,你就需要一把破译的密匙。黑客会突然在你的电脑屏幕上弹出一个窗口说:“嘿,如果你想再次看到文件,就给我们支付多少多少比特币吧。”
简介:1998年,南京艺术学院中国美术史教授、博士生导师、著名美术史学家林树中先生主持的《海外藏中国历代名画》八卷本的编撰工作已经进入关键阶段。林先生担任全书总主编,众多弟子共同参与,或担任分卷主编、副主编,或撰写文字说明。我是辽金西夏元分卷主编。为了解决作品真伪、流传等问题,林先生特地约请故宫博物院研究员、著名书画鉴定家徐邦达先生担任全书鉴定顾问,徐先生欣然允诺。5、6月间,我们在南京和徐先生多次见面,聆听他对海外收藏中国古画的鉴定意见。其间,我本人有多次机会向他请教书画文物鉴定、美术史研究等学术问题。徐先生当时已是87岁高龄,但是一身仙风道骨,神采奕奕,清瘦而健康,讲话时面带微笑,思维敏捷,从容、洒脱而不失威严。先生所言,字字珠玑。弥足珍贵,是古画鉴定和画史研究的宝贵资料。