简介：

简介：黑龙江检验检疫局技术中心承担并主持的国家质检总局科研项目一“黑龙江省马铃薯病毒病的鉴定及快速诊断技术的研究”，获得重大进展。继2003年在黑龙江省宾县发现马铃薯蕨叶病后，今年，黑龙江检验检疫局项目研究人员先后又在省内通河、方正、宾县和尚志发现该病害。经电镜观察、生物学测定、种薯传毒试验及血清学检测，确定致病病毒为番茄黑环病毒。这是国内首次对该病毒害进行检测。据了解，番茄黑环病毒在美国、土耳其、

简介：目的构建人survivin基因shRNA重组腺病毒载体,为缺氧性肺动脉高压（Hypoxicpulmonaryhypertension,HPH）的基因治疗研究提供实验基础。方法构建survivin-siRNA表达质粒,测序鉴定正确后,将survivin-siRNA表达质粒与含有腺病毒右臂的骨架质粒pBHGE3共转染至人293A细胞,包装成腺病毒Ad-survivin并扩增,TCID50法测定病毒滴度。将人肺动脉平滑肌细胞缺氧培养24h,并将细胞分为空白对照组（Con组）,阴性对照组（Ad-LacZ组）,不同Adsurvivin序列的干扰组（sh1组、sh2组、sh3组）。Ad-survivin感染缺氧人肺动脉平滑肌细胞,Westernblot检测survivin蛋白,验证重组腺病毒干扰效果。结果（1）将shRNA片段与pAd-U6-CMV连接后的质粒进行测序,结果提示目的基因片段插入成功;（2）TCID50法测定病毒Ad-survivin-shRNA1、Ad-survivin-shRNA2和Ad-survivin-shRNA3的滴度分别是1×1010,1.2×1010,1×1010;（3）sh2组缺氧人肺动脉平滑肌细胞内survivin蛋白表达明显低于其他4组（P〈0.05）。结论本研究成功构建人survivin腺病毒载体,为研究survivin基因在缺氧性肺动脉高压中的作用提供了实验基础。

简介：目的：构建并制备能够有效表达EB病毒BHRF1基因的重组慢病毒载体,观察BHRF1表达对人胚肺成纤维细胞（KMB17）凋亡的影响。方法：采用RT-PCR法,从B95-8细胞扩增EBVBHRF1基因,克隆至pWPIGW慢病毒载体上,与pVSVG及pSPAX质粒共转染人胚肾293T细胞,包装出重组慢病毒。将纯化后的重组慢病毒直接感染293T和KMB17细胞,荧光显微镜、实时定量RT-PCR、免疫印迹等方法检测BHRF1在细胞中的表达水平。流式细胞仪检测BHRF1表达对凋亡诱导剂或无血清培养诱发KMB17细胞凋亡的影响。结果：重组慢病毒介导BHRF1在293T和KMB17细胞内获得表达,能有效地抑制KMB17细胞的凋亡。结论：成功构建了表达BHRF1基因的重组慢病毒载体。

简介：本研究建立了检测与诊断猪圆环病毒的PCR方法，并对该方法进行了标准化研究。该方法快速、敏感、特异性强，可扩增10ng的阳性质粒的DNA．可以从30μL病料组织悬液或全血中扩增检测PCV，并且该方法可以区分PCV1和PCV-2，对其它病原微生物如PPV、PRRSV、SIV以及许多细菌不能检出。应用此方法对6省市的12个猪场的225份病料进行了检测，对阳性病料进行了病毒分离，对分离的病毒进行了电镜观察与序列测定，结果证实分离的病毒为PCV-2。

简介：采用田间结果树上的芽作为接穗进行茎尖嫁接，最终获得7株茎尖嫁接苗。对所获得的茎尖嫁接苗，应用指示植物腊斯克枳橙、墨西哥来檬和伊特洛格香橼亚利桑那861-S-1分别鉴定柑橘碎叶病、衰退病和裂皮病，用PCR检测技术鉴定柑桔黄龙病。结果表明：1、3、4、5、6号迟熟蕉柑单株不带碎叶病、衰退病、裂皮病和黄龙病，可用作繁殖无病毒苗木的备选材料。

简介：目的分离汉坦病毒并采用分子生物学方法进行基因鉴定.方法组织细胞培养法和RT-PCR法.结果在黑线姬鼠体内分离出一株汉坦病毒,分别用HTN型和SEO型的特异引物对其进行基因扩增,同时以76-118株和L99株作对照,结果分离株经HTN型引物扩增出一条明亮带并同76-118株结果一致.结论分离株经基因鉴定为HTN型病毒.

简介：摘要2019新型冠状病毒(2019 novel coronavirus，2019-nCoV)是新近分离鉴定的第7种可以感染人类的冠状病毒，已确认为目前正在暴发流行的COVID-19的病原体。2019-nCoV可在COVID-19患者的支气管肺泡灌洗液、鼻咽拭子、血液等样本中检出，细胞分离培养相对容易。鉴于病毒分离培养和病原学鉴定对病毒复制增殖、致病性、免疫、检测诊断和特异防治等都具有重要意义，此文就2019-nCoV分离、病原学鉴定以及根据宏基因组测序的反向病原学研究现状与进展做一综述。

简介：目的构建hTERT基因RNAi慢病毒载体,为大肠癌RNAi介导的基因治疗打下基础。方法化学合成3条靶向hTERT基因的siRNA,转染大肠癌细胞SW480,48h后采用RT-PCR方法筛选出一条对hTERTmRNA有明显抑制作用的siRNA。针对已经筛选确定的hTERT基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的OligoDNA,退火形成双链DNA,与经XhoⅠ和HpaⅠ酶切后的GP-SupersilencingVector载体[含U6启动子和绿色荧光蛋白（GFP）]连接产生LV-shhTERT慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。用LV-shhTERT、pGag/Pol、pRev和pVSV-G4质粒共转染包装细胞293T细胞,包装产生慢病毒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度。结果PCR和测序证实,成功构建hTERTshRNA的慢病毒载体LV-shhTERT。包装慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为1×108UT/ml。结论成功构建了hTERT基因RNAi慢病毒载体。

简介：摘要：随着全球气候变化和农业生产模式的演变，葡萄病毒病已成为影响葡萄产业健康发展的主要障碍之一。吐鲁番地区作为中国重要的葡萄产区，其独特的地理和气候条件使得该地区的葡萄病毒病防控面临特殊挑战。因此，深入研究吐鲁番地区葡萄病毒病的发生规律、传播机制及有效防控策略，对于保障葡萄产业稳定发展、提高农民收入具有重要意义。

简介：摘要目的构建大鼠RNAi-腺苷A2a受体(A2aR)慢病毒载体并进行鉴定。方法首先构建3对短发夹RNA(shRNA)-A2aR序列(shRNA-A2aR 1、shRNA-A2aR 2、shRNA-A2aR 3)，在shRNA慢病毒载体中分别插入3对双链shRNA oligo，shRNA慢病毒重组质粒构建成功后，将重组质粒、包装载体、穿梭载体共转染293T细胞，从而获得病毒液。实验Ⅰ　采用随机数字表法将大鼠原代心肌细胞分为3组(n＝6)：空载组(V组)、shRNA-A2aR 1组和shRNA-A2aR 3组，各组分别转染MOI为10的相应病毒液，转染48 h时，Western blot法检测A2aR表达水平，确定干扰效率，以筛选最佳慢病毒载体。实验Ⅱ　采用随机数字表法将大鼠原代心肌细胞分为5组(n＝36)：空载组(V组)、MOI5组、MOI10组、MOI15组和MOI20组，各组分别转染相应MOI的病毒液(最佳慢病毒载体)，于转染24、48和72 h时，采用CCK-8法测定细胞存活率，荧光显微镜下观察细胞活力和细胞死亡情况，Western blot法检测A2aR表达水平，确定干扰效率。结果实验Ⅰ　成功构建了2种shRNA-A2aR慢病毒载体(shRNA-A2aR 1、3)。shRNA-A2aR 3病毒液滴度为3.5×108 TU/ml。与V组和shRNA-A2aR 1组比较，shRNA-A2aR 3组心肌细胞A2aR表达下调(P<0.01)，shRNA-A2aR 3慢病毒载体干扰效率73%。实验Ⅱ　选择shRNA-A2aR 3慢病毒载体转染24 h时，各组细胞存活率均>85%；转染48 h时，MOI5组和MOI10组细胞存活率>80%；转染72 h各组细胞存活率<70%。倒置荧光显微镜下可见，MOI5组荧光密度稍低，MOI10组转染48 h及MOI20组转染24 h时，荧光密度较高且细胞状态较好；转染72 h时各组心肌细胞活力明显下降、死亡细胞增加。Western blot显示：MOI10组转染48 h、MOI15组转染48 h、MOI20组转染24和48 h时干扰效率均>70%。结论成功构建了大鼠shRNA-A2aR慢病毒载体，且MOI为10、转染48 h或MOI为20、转染24 h为最佳转染方案。

简介：目的探讨构建携带人pre—mir181a基因的重组腺病毒载体，为基因治疗研究提供一种新的方法，并观察其在神经胶质瘤细胞U251细胞中的表达。方法以从Genesil公司购买的含有mir181a的质粒为模板扩增pre—mir181a基因，将回收的PCR产物片段克隆入pGenesil载体，获得重组质粒pGenesil—pre—mir181a。从pGenesil—pre—mir181a上通过LR体外同源重组将mir181amicroRNA表达框转移至pGSadeno腺病毒表达载体上。在体外用不同感染复数（M·O·I）值rAd5-mir181ab分别转染神经胶质瘤细胞U251细胞。采用流式细胞仪、RT—PCR方法检测目的基因的转染效率和表达。结果PCR、酶切鉴定以及序列测定与比对分析表明，重组腺病毒rAd5-mir181a构建正确。神经胶质瘤细胞U251细胞转染rAd5-mir181a的最高效率可达99％，转染后的神经胶质瘤细胞U251细胞表达相应的mir181a。结论本实验成功构建了含mir181a基因的重组腺病毒rAd5-mir181a载体，在体外能高效转染神经胶质瘤细胞U251细胞。

简介：目的：阐明导致温郁金种质退化的原因。方法：以温郁金块茎、根茎和叶片作样本,采用NCM-ELISA方法进行检测。结果：在普通栽培的样品中发现甘薯病毒侵染,GAP栽培样品中未发现。块茎中检测到5种病毒复合侵染,根茎中检测到3种病毒复合侵染。叶片部分目前尚未测出甘薯病毒。结论：初步认定温郁金病毒病病原至少有5种,即SPFMV、SPFMMV、SPLV、SPMSV、C-6。其中SPMSV属首次在国内植物中测出。

简介：

简介：摘要：番茄黄化曲叶病毒是番茄上的重要病害之一，严重影响番茄产量和品质，给番茄生产造成巨大的经济损失。目前国内外对该病的防治主要依赖于化学药剂，但其有一定的抗药性、且会对环境造成污染，因此培育抗病品种是最有效的防治方法。我国具有丰富的番茄种质资源，是开展番茄黄化曲叶病毒抗性研究的良好材料。本研究对全国收集到的23份番茄材料进行了TYLCV检测，筛选出12份抗性较好的材料。为培育抗病品种及防治番茄黄化曲叶病毒病提供了新的种质资源。

简介：摘要目的在一代测序的基础上建立一种简易的肠道病病毒共感染鉴定方法。方法制备共感染的模拟样本，对其进行一代测序。使用Perl语言编写脚本对测序图谱进行分析，获得主峰和次峰序列。采用blastn与本地构建的肠道病毒数据库进行局部比对，同时采用stretcher进行全局比对，对主要和次要序列进行肠道病毒分型比较。结果编写了一个能够自动识别并分析一代测序色谱图结果中共感染状态并获得两个肠道病毒核苷酸序列的脚本。对于次要病毒DNA含量大于等于65ng的混合样本，只要次要病毒在混合样本中占比适中（如大于等于12.5%并小于等于25.0%）均能够顺利识别并准确分型。分型时，采用局部比对与采用全局比对的结果相当，但在1：1混合样本的分型时，局部比对的效果更好。结论本研究建立的肠道病毒共感染的简易鉴定方法可用于肠道病毒共感染的病毒识别与分型。

简介：猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）病毒属动脉炎病毒科动脉炎病毒属，是引起母猪繁殖障碍的重要病原之一。本研究以出现繁殖障碍的母猪并通过ELISA检测为抗体阳性者的血清为材料，于2000年首次从重庆地区分离出PRRS病毒。母猪血清接种Marc-145单层细胞，经盲传至第四代时出现典型的细胞痛变效应（CPE）；细胞培养物经电镜观察，发现其中有球形的病毒粒子，粒子大小为40～80nm，核心直径为20-40nm；病毒TCID50为10—4．46／0．05mL；用抗PRRSV特异性抗体能特异地中和病毒，中和指数为100，并将该地方分离株命名为PRRSV—SCQ株。根据Genbank中PRRSV北美洲株ATCCVR-2332的序列设计一对特异性引物，以PRRSV—SCQRNA为模板，通过RT—PCR扩增其GP5基因片段．并将该片段插入克隆载体pMD18一T的EcoRV住点；测序结果表明该GP5基因序列与PRRSV—VR2332、LV株的GP5基因核苷酸序列同源性分别为99．34％和62．14％，GP5蛋白氨基酸推导序列的同源性分别为97．51％和54．37％，揭示SCQ地方分离株与VR2332株在基因型上更为接近，应属于美洲型。

简介：目的探索构建针对人类核转运蛋白2(KPNA2)基因的重组慢病毒干扰RNA(shRNA)载体的方法,研究其对人骨肉瘤细胞株MG63的沉默效率。方法针对KPNA2基因设计小片段干扰序列。加入AgeⅠ酶和EcoRⅠ酶酶切位点,根据设计好的序列合成单链DNAoligo并退火合成双链DNAoligo。将合成好的双链DNAoligo与GV115载体重组,形成GV115-shRNA慢病毒载体。聚合酶链式反应(PCR)法鉴定筛选出阳性重组子,经测序后包装慢病毒载体。荧光法测定病毒滴度,重组慢病毒感染骨肉瘤细胞株MG63,通过显微镜观察细胞中绿色荧光蛋白(GFP)的表达来计算其转染效率。RT-PCR法检测重组慢病毒RNA干扰载体对人骨肉瘤细胞株MG63中KPNA2表达的沉默效率。实验结果数据以均数±标准差(sx±)表示,应用SPSS13.0统计软件分析,两组均数间的比较采用t检验,以P<0.05为差异有统计意义。结果经PCR分析和测序证实,成功构建KPNA2基因重组慢病毒RNA干扰载体;荧光法测定病毒滴度为4×108TU/ml;荧光显微镜下观察GFP,显示细胞感染效率达到80%以上;RT-PCR检测对照组及实验组KPNA2mRNA表达分别为0.991±0.087vs.0.216±0.012,差异有统计学意义(P<0.01)。结论KPNA2基因重组慢病毒RNA干扰载体构建成功,并有效干扰人骨肉瘤细胞株MG63中KPNA2mRNA的表达。

简介：本文主要介绍了生物学方法、电镜观察、免疫学、分子生物学技术方面在植物病毒检测方面的特点和应用情况，同时介绍了辣椒材料抗性鉴定的方法和评价标准。

简介：从广东新兴某鸭场大批发病和死亡的10日龄雏鸭肝、脾脏中分离到1株病毒，该病毒无血凝性，攻毒1日龄雏鸭能引起100％发病死亡，利用Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒标准血清进行中和试验、血清被动免疫保护试验、RT—PCR鉴定及序列分析表明该毒株为Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒。