简介:目的:对在LPS、TNF-α刺激下,人β-防御素-2基因5'-端转录调控机制进行初步分析.方法:将HBD-2基因5'-端上游序列连接入无启动子的pEGFP-1质粒,构建了系列5'端缺失的pEGFP-1/HBD-2报告质粒.pEGFP-1/HBD-2质粒转染细胞后给予LPS、TNF-α刺激,用RT-PCR检测pEGFP的mRNA浓度.结果:显示HBD-2基因上游-241段有较强的启动子活性;LPS、TNF-α刺激后,即使上游序列缩短至-241位点时,报告基因pEGFP的mRNA表达量仍明显增高.说明HBD-2基因上游-241区域含有LPS、TNF-α刺激后激活的转录因子作用位点.计算机分析表明-232/-222区域有一同源性极高的NF-kB结合元件,提示NF-kB结合元件可能调控HBD-2的增强表达.
简介:家蚕由野桑蚕驯化而来,而野桑蚕sericin1及其上游调控序列的相关研究较少。本研究以家蚕sericin1及其上游调控序列设计引物克隆野桑蚕sericin1及其上游调控序列,将克隆得到的野桑蚕Sericin1序列翻译后用muscle软件与家蚕Sericin1蛋白序列比对,结果表明预测的野桑蚕Sericin1氨基酸序列与家蚕Sericin1A’(Ser1A’)氨基酸序列相似性很高,达98%。野桑蚕丝胶1基因上游调控序列与家蚕一样也存在多态性,克隆得到了106Ibp和636bp的两条序列,中间存在425bp的插入序列,与家蚕丝胶1基因上游调控序列相似性分别为98%和97%。
简介:目的:对人类PPARγ基因5'-非翻译区进行生物信息学的分析。方法:通过搜索网络数据库,得到PPA脚基因翻译起始点上游约2kb的序列。运用PROMOTERSCAN分析该序列可能的启动子区域,利用在线分析软件EMBOSS、MethPrimer和CpGIslandSearcher分析该序列潜在的CpG岛,运用TFSEARCH软件分析该序列潜在的转录因子结合位点。结果:人类PPARγ基因5'-非翻译区转录起始位点上游反向链2425到2175区具有启动子活性,在启动子上具有TATA盒。PPARγ基因5'-非翻译区转录起始位点上游2kb序列存在包括MyoD、HSF和Nkx-2等19个转录因子的潜在结合位点,不存在CpG岛。结论:该实验为后续的PPARγ基因的转录调控研究奠定基础。
简介:以黑果枸杞为研究对象,利用RT-PCR方法从黑果枸杞cDNA中克隆一个bHLH的转录因子-LrJAF13,通过生物信息学的分析,发现该基因的全长为1890bp,编码624个氨基酸的亲水蛋白,其分子式是C3O12H4843N853O978S24,分子量为6.94kD,脂肪指数(Aliphaticindex)为85.45,等电点pI为5.24,亲水性(Grandaverageofhydropathicity)为-0.497,不稳定指数(Instabilityindex)为50.13,推断出该基因编码的蛋白位于细胞核中,蛋白质三维结构复杂,包含多个α-螺旋和β-折叠结构,与矮牵牛拟南芥bHLH基因编码的蛋白序列的一致性为88%,进化树的分析表明黑果枸杞的LrJAF13与矮牵牛的bHLH的转录因子petunia_JAFl3的亲缘关系比较接近。通过上述分析,为解析黑果枸杞果实中高花青素含量的分子遗传机理、优异资源筛选和新品种选育提供了理论依据。
简介:摘要甲状腺癌是内分泌系统最常见的恶性肿瘤,且发病率逐年上升,严重威胁人们的身体健康。自噬是一种程序性死亡方式,能够作为抗肿瘤治疗潜在的作用靶点,发挥重要的调控作用。富含亮氨酸重复序列激酶2(LRRK2)是由PARK8基因编码的一种蛋白激酶。最近研究证实,细胞自噬和甲状腺癌关系密切。文章就LRRK2通过自噬影响甲状腺癌的可能调控机制进行分析,为甲状腺癌的基础研究和临床诊疗提供新思路。
简介:摘要目的探讨糖蛋白A为主重复序列蛋白(glycoprotein A repetitions predominant,GARP)通过调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)参与调控结核病发病的作用,以期为结核病治疗提供新靶点。方法纳入2021年1月至9月复旦大学附属华山医院和无锡市第五人民医院收治的60例活动性肺结核患者,同时招募6例结核潜伏感染患者和16名健康对照者。应用流式细胞术检测入组对象外周血淋巴细胞中Treg的占比,以及Treg上GARP和转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的表达。统计学分析采用曼-惠特尼U检验。结果60例活动性肺结核患者中,23例未进行抗结核药物治疗,17例患者治疗<3个月,10例患者治疗3~<6个月,10例患者治疗≥6个月。活动性肺结核未治疗组CD4+CD25+叉头样转录因子3(forkhead box protein 3,Foxp3)+Treg占外周血淋巴细胞总数的7.50%(5.67%, 9.00%),高于健康对照组的5.57%(5.03%,6.09%),差异有统计学意义(U=95.00, P=0.010)。活动性肺结核未治疗组中,表达GARP的CD4+CD25+Foxp3+ Treg占CD4+CD25+Foxp3+ Treg总数的10.37%(7.79%,12.90%),分别高于结核潜伏感染组的7.02%(5.15%,8.81%)和健康对照组的5.33%(4.26%,6.67%),差异均有统计学意义(U=31.00,P=0.040;U=36.00,P<0.001);而结核潜伏感染组与健康对照组之间差异无统计学意义(U=25.00,P=0.095)。活动性肺结核未治疗组中,表达TGF-β1的CD4+CD25+Foxp3+ Treg占Treg总数的7.13%(4.25%,8.89%),高于健康对照组的3.59%(2.10%,5.17%),差异有统计学意义(U=71.00,P=0.001)。抗结核治疗<3个月组、治疗3~<6个月组、治疗≥6个月组活动性肺结核患者的CD4+CD8-CD25+Foxp3+Treg中GARP的表达量分别为7.82%(3.94%,13.17%)、6.92%(5.61%,9.47%)和7.26%(5.82%,9.64%);3组中在CD4+CD8-CD25+Foxp3+Treg中TGF-β1表达量分别为11.16%(7.91%,15.23%)、8.66%(5.43%,12.54%)和7.82%(6.01%,9.53%),其中治疗<3个月组TGF-β1的表达量高于治疗≥6个月组,差异有统计学意义(U=37.50,P=0.024)。结论Foxp3/GARP/TGF-β1通路可能参与Treg调控结核病发病的免疫机制,GARP有可能成为抗结核治疗的新型靶点。