简介:目的研究Wistar大鼠胰岛细胞分离、纯化和培养的改良方法和条件,为进行细胞电生理实验提供胞膜完整、活性良好的胰岛细胞。方法水合氯醛腹腔麻醉,采用胶原酶ⅴ逆行灌注、原位消化及Ficoll-400梯度离心的方法分离、纯化大鼠胰岛,并分离、培养胰岛单细胞。结果采用该方法分离、纯化胰岛的获得率稳定;急性分离、培养的胰岛细胞12h~24h贴壁,(4~5)d胰岛细胞生长状态最佳,胞膜完整,折光性好。结论逆行灌注、原位消化及Ficoll-400梯度离心为一种有效的分离、纯化胰岛细胞的方法,培养的胰岛细胞(4~5)d达到最佳状态,适合进一步研究的要求。