简介:目的:建立并改良磁珠提取基因DNA的方法,以应用于HLA常规测序分型。方法:使用磁珠法自动提取系统从全血中提取基因组DNA,利用DNA定量仪测定DNA浓度与纯度,利用测序仪对PCR扩增产物进行测序及相关的分析软件进行HLA分型结果分析。比较改良前后DNA浓度与纯度、HLA分型结果成功率、信噪比及测序胶图的反应格局。结果:改良后96份DNA浓度的均一性、纯度均优于改良前;32份HLA分型结果中HLA-A、B位点成功率改良后高于改良前,差异有统计学意义(P〈0.01);改良后32人份HLA-B第二外显子信噪比(N/S)合格率均高于改良前,差异有统计学意义(P〈0.01);改良后32份分型胶图反应格局均优于改良前。结论:改良磁珠提取DNA法能稳定、可靠地应用于HLA测序分型,具有快速、高通量化的特点和广泛的应用前景。
简介:目的检测组织相容性白细胞抗原G(HLA-G)在结肠癌外周血单个核细胞(PBMC)中的表达并探讨其临床应用价值.方法采用实时荧光定量PCR相对定量检测结肠癌患者、结肠良性病变患者和健康对照外周血单个核细胞HLA-GmRNA的表达.结果外周血单个核细胞HLA-GmRNA在结肠癌、结肠良性病变和健康对照中的相对表达量95%可信区间(CI)分别为[1.15,2.68]、[0.56,1.51]和[0.66,1.41].结肠癌患者外周血单个核细胞HLA-GmRNA的表达高于结肠良性病变(P=0.02)和健康对照(P=0.03).结论结肠癌患者外周血单个核细胞HLA-G与结肠癌发生密切相关,在结肠癌早期诊断中具有重要作用.
简介:摘要目的分析1例白血病患者人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)杂合性丢失情况。方法采用聚合酶链反应序列特异性寡核苷酸探针法和聚合酶链反应测序方法对患者移植后外周血、头发毛囊、口腔黏膜拭子及其父母外周血进行HLA分型。采用23位点短串联重复序列(short tandem repeat, STR)测定试剂盒和本实验室建立的HLA区域内的6个STR位点方法对患者移植后的外周血、口腔黏膜拭子及其父母外周血进行STR位点检测。结果患者经父亲源单倍型造血干细胞移植后,外周血标本HLA基因型与父亲完全一致。患者头发毛囊标本HLA结果为HLA-A*02:01,24:02, C*03:03,03:04, B*13:01,15:01, DRB1*08:03,12:02, DQB1*03:01,06:01。口腔黏膜拭子为HLA纯合子,只存在父亲单倍型HLA-A*24:02-C*03:03-B*15:01-DRB1*08:03-DQB1*06:01,丢失了母亲单倍型HLA-A*02:01-C*03:04-B*13:01-DRB1*12:02-DQB1*03:01。患者移植后外周血23个STR位点与父亲完全一致。口腔黏膜拭子23位点短串联重复位点无丢失,但6号染色体上HLA区域的6个STR位点至少有4个发生了丢失。结论发现1例单倍型造血干细胞移植白血病患者的口腔黏膜拭子发生HLA杂合性丢失。
简介:目的调查汉族骨髓供者中常见的HLA-Cw等位基因.方法对115例骨髓捐献者采用PCR-SSP方法进行HLA-Cw低分辨和高分辨分型.结果115例汉族骨髓捐献者中,HLA-Cw位点基因频率分布由高至低依次为Cw*03(0.2598)、Cw*01(0.2142)、Cw*07(0.1978)、Cw*08(0.1154)、Cw*12(0.0582)、Cw*14(0.0399)、Cw*15(0.0399)、Cw*06(0.0399)、Cw*04(0.0309);进一步检测到16种等位基因,其中Cw*0101、Cw*0304、Cw*0302、Cw*0401、Cw*0602、Cw*0702、Cw*0801、Cw*1202、Cw*1402、Cw*1505、Cw*1502为对应抗原最为常见的等位基因.结论本研究在DNA水平上,提供了中国汉族人群中HLA-Cw位点基因分布频率及常见等位基因资料.
简介:摘要目的为了探讨HLA-B27抗原检测的临床价值。方法用流式细胞术检测本院及外院送检的1050例患者及100例健康人群的外周血淋巴细胞HLA-B27抗原,分析其抗原表达情况与强直性脊柱炎(AS)的关系。结果1150例检测人群中疑诊AS者582例,症状不典型患者468例,健康体检者100例。在疑诊AS者中HLA-B27阳性率313/582(53.7%),临床最后确诊为AS者288例(占阳性的92.0%),症状不典型者中HLA-B27阳性率89/468(19.0%),临床最后确诊为AS者70例(占阳性的78.7%),健康体检者中HLA-B27阳性率4/100(4.0%),且4例均为同一家庭成员,临床无1例确诊为AS。所有HLA-B27阴性患者中有12例最终为AS者(占阴性的1.6%)。结论HLA-B27与AS高度相关,对AS的辅助诊断具有重要价值,灵敏度为96.8%,特异度为93.5%,阳性预测值89.0%,阴性预测值98.1%,采用流式细胞仪进行HLA-B27的检测具有简便、快速、易于标准化及质量控制、结果准确可靠等优点,有利于临床推广应用。
简介:表1 HLA-DR和DQ等位基因与SLE临床指标的相关性等位基因 临床指标 N1/N2 N3/N4 χ2值 P值 Pc值 DQA1*0101 淋巴细胞减少 10/64 16/49 4.45 0.03+ >0.05 DQA1*0102 狼疮细胞阳性 15/25 2/11 8.04 0.013- >0.05 DQA1*0501 蛋白尿 19/69 5/44 4.20 0.04- >0.05 DQB1*0201 贫血 5/51 18/62 6.38 0.01+ >0.05 白细胞减少 8/65 15/48 6.11 0.01+ >0.05 尿素氮增高 16/51 1/11 7.00 0.03- >0.05 DQB1*0301 蛋白尿 27/69 3/44 14.39 0.000 1- <0.01 血尿 29/90 1/23 7.30 0.007- >0.05 C3降低 20/51 9/55 7.66 0.02- >0.05 DQB1*0302 血肌酐增高 7/55 4/7 8.84 0.01+ >0.05 DQB1*0303 C3降低 10/51 17/55 8.50 0.01+ >0.05 DQB1*0401 血肌酐增高 1/55 2/7 8.81 0.01+ >0.05 DQB1*0601 浆膜炎 21/99 8/14 8.30 0.03+ <0.05 DRB1*1501 CNS损害 19/99 5/13 6.03 0.049+ >0.05 狼疮细胞阳性 11/25 0/11 10.96 0.01- >0.05 DRB1*1502 血小板减少 0/55 6/58 6.01 0.01+ >0.05 DRB3*0202 蛋白尿 19/69 3/44 7.36 0.007- >0.05 DRB3*0301 蛋白尿 12/69 2/44 4.08 0.04- >0.05 血尿 14/90 0/23 4.08 0.04- >0.05 DRB1*0302 淋巴细胞减少 1/64 5/49 4.12 0.04+ >0.05 管型尿 4/104 2/9 5.56 0.02+ >0.05 DRB1*1101 蛋白尿 11/69 1/44 5.29 0.02- >0.05 DRB1*1202 血小板减少 0/55 5/58 4.96 0.03+ >0.05 注,重型SLE相关基因主要为DQA1*0101、DQB1*0201、DQB1*0302、DQB1*0303、DQB1*0401、DQB1*0601和DRB1*1501,因此DQB1*0303是个重要的SLE相关基因
简介:本研究探讨HLA新的等位基因HLA-B*4061的分子基础。采用盐析法抽提样本DNA,利用PCR方法扩增先证者HLA-B基因的第1-8外显子,PCR产物直接经TOPO克隆到质粒载体中得到单链,对所得克隆进行HLA-B基因第2、3、4外显子双向测序分析。应用PCR-SSP方法证实测序所发现的突变。结果表明:先证者样本克隆测序得到2个等位基因,其中1个等位基因为B+4601,另1个经blast验证其为新的等位基因,新的等位基因序列已递交GenBank(DQ089628,DQ089629,DQ089630)。与最接近的B*400101等位基因序列相比,新的等位基因仅在第2外显子上有1个核苷酸不同,即第272位C→A,导致第67位氨基酸Ser→Tyr。结论:HLA-B*4061等位基因为新的HLA-B等位基因,已荣获世界卫生组织HLA因子命名委员会正式命名。
简介:摘要小儿急腹症是小儿外科常见病及多发病,常因病情重、就诊不及时或误诊误治而致病情加重,同时由于缺血、缺氧、酸中毒以及炎症介质等多种因素的共同作用而引发内源性感染,病情严重者可引起全身炎症反应综合症(systemicinflammatoryresponsesyndrome,SIRS),甚至引发多器官功能衰竭(MODS)。本文就单核细胞表面HLA-DR/CD14及其在感染等疾病发展过程中的临床意义予以如下综述。
简介:我们用流式细胞术(FCM)检测了以腰腿痛为主诉的初诊患者280例的HLA—B27抗原表达,探讨HLA—B27抗原对腰腿痛患者的诊断和鉴别诊断的临床意义。
简介:目的研究单纯疱疹病毒2型(HSV-2)对人单核细胞表达HLA-Ⅱ类抗原(HLA—DR、HLA-DQ)的影响,探讨单核细胞及HLA-Ⅱ类抗原在单纯疱疹病毒2型感染中的作用。方法用单纯疱疹病毒2型(333株)感染人单核细胞,于感染后1、3、5、7天分别收集细胞,用APAAP法检洲单核细胞HLA—DR、HLA-DQ表达水平。结果单纯疱疹病毒2型感染后1天,单核细胞表达HLA-KR、HLA—DQ抗原水平明显降低,以后逐渐升高,至7天达到对照组水平。结论单纯疱疹病毒2型感染早期能抑制单核细胞表达HLA—Ⅱ类抗原,HSV-2抑制单核细胞表达HLA-Ⅱ类抗原可能是HSV-2入侵机体的手段之。HLA-Ⅱ类抗原在单纯疱疹病毒2型致病及免疫过程中可能起重要作用。
简介:ToinvestigatetheHLA-A,-BallelepolymorphisminHanpopulationofShandongprovinceandtoexplorethepossibilitytofindouttheHLA-A,-B-matchedcordblooddonorsforstemcelltransplantationtobeusedinotherareainChina,5844umbilicalcordbloodsamplesweretakenfromHanpopulationdonorsofShandongprovince,andassayedwithPCR-sequence-oligonucleotide(PCR-SSO)assay.InShandongHandonors,20allelesatHLA-Alocusand46allelesatHLA-Blocuscouldbedetectedasrevealedinthepresentstudy.Amongthe20allelesatHLA-Alocus,themostprevalentfiveallelesincludedA*02(0.3041),A*11(0.1443),A*24(0.1434),A*30(0.0975)andA*33(0.0859),while,thealleleswithlowergenefrequenciesincludedA*34(0.0006),A*25(0.0005),A*66(0.0005),A*74(0.0004)andA*(0.0001).Ofthe46HLA-Ballelesdetected,themostprevalentfivealleleswereB*13(0.1348),B*51(0.0713),B*62(0.0712),B*61(0.0676)andB*60(0.0642);whilealleleswithlowergenefrequenciesincludedB*77(0.0001),B*76(0.0002),B*47(0.0003),B*42(0.0003)andB*72(0.0004).IncomparisonwiththoseoftheotherHanpopulationinChina,theHLA-A,-BgenefrequenciesintheumbilicalcordbloodofShandongprovincepossessuniquedistributionfeaturesamongtheinvestigatedpopulationsfromvariousregionsofthesameraceorigin,andthedifferencesinvariousregionsofthesameracewerelessthanthoseamongthedifferentrace.ItisevidentthattheHLA-A,-BallelesoftheumbilicalcordbloodtakeninShangdongprovinceshowhighdegreeofpolymorphism,anditmightbepartofthoseofNorthernHanpopulationinChina.So,itisreasonableforpatientsofNorthernChinesetoreceiveHLAclassI-matchtransplantofcordbloodstemcellsfortissueandorgantransplantationfromShangdongumbilicalcordbloodbank.
简介:目的对我国南方地区3911例等候肾脏移植的患者进行HLA-A,B,DRB1基因表达的回顾性研究,以探讨在因肾脏疾病导致患者最终并发终末期肾功能衰竭(EsRD)进程中的HLA免疫遗传易感性及其相对风险作用。方法采用聚合酶链反应-序列特异性引物扩增(PcR-SSP)技术进行HLA-A,B,DR基因分型,应用SPPS13.0软件包统计分析ESRD患者中HLA抗原频率、基因频率、HLA—A,B,DR三个位点的单倍型频率(HF)、连锁不平衡参数、相对危险度(RR)及优势比(OR)。结果ESRD患者中表达出HLA-A抗原19个,HLA-B抗原40个,HLA-DR抗原14个;其中呈现抗原频率显著增高(Pc〈O.0001,Pc值即P值乘以所检测的某一位点的抗原数)的是HLA-B75(RR=1.222,OR=1.479)、DR4(RR=1.146,OR=1.294),DR17(RR=1.541,OR=2.639);呈现出抗原频率显著降低(Pc〈0.0001)的是HLA-DR8(RR=0.812,DR=0.697)、DR9(RR=0.878,OR=0.793);ESRD患者中具有显著连锁不平衡单倍型(HF〉0.5%)10条,分别为A1-B37.DR10,A2-B7-DR17,A29-B7-DR10,A30-B13-DR7,A33-B13-DR17,A33-B44-DR17,A33-B46-DR17,A33-B58-DR17,A33-B60-DR17和A33-B75-DR17,其中A33-B75-DR17、A33-B58-DR17频率高达7.93%和11.74%。结论研究发现HLA-B75、DR4和DR17可能对南方地区肾脏疾病患者最终并发ESRD具有独立易感关联,而表达HLA-DR8、DR9的肾脏病患者将可能不易并发ESRD;单倍型A33-B75-DR17高频率出现说明HLA-B75,DR17不仅具有独立易感作用还可能对肾脏病患者最终并发ESRD具有集合易感作用。这个发现对于等候肾脏移植患者选择合适供体以提高移植后患者生存时间和远期移植效果具有临床指导意义。
简介:摘要目的分析人白细胞抗原(HLA)在卵巢恶性肿瘤发生、发展中的作用。方法收集我院2013年2月-2014年6月期间的54份卵巢恶性肿瘤组织设为恶性组,选同期的54份卵巢良性肿瘤组织设为良性组,另选同期的54份正常卵巢组织设为对照组,对三组均应用RT-PCR和流式细胞分析技术进行检测,分析其HLA-G、HLA-E的表达情况。结果与良性组和对照组相比,恶性组的HLA-G、HLA-E阳性表达率明显更高(P<0.05)。同时,HLA-G、HLA—E表达与患者的病理分级、临床分期有明显的联系,而与肿瘤组织类型没有明显的关系。结论人白细胞抗原(HLA)在卵巢恶性肿瘤的发生、发展中均有参与。
简介:目的:了解河北汉族人群人类白细胞抗原(HLA)-C位点基因多态性及分布特征。方法:对1912例河北地区汉族人群献血者采用基于测序的分型技术(SBT)进行HLA-C位点高分辨基因分型,直接计算等位基因频率,并与中国其他地区人群进行比较。结果:1912例河北汉族献血者中共检出41个HLA-C等位基因,其中频率大于0.050的常见等位基因共7个,分别为C*07:02(0.13546),C*06:02(0.118985),C*08:01(0.101726),C*03:03(0.10068),C*01:02(0.09022),C*03:04(0.089174),C*04:01(0.071391)。与我国其他文献中汉族人群数据进行群体比较后发现,河北汉族人群HLA-C位点频率除与最高的常见基因与中国造血干细胞捐献者均为C*07:02外,与其他地区无论是分布规律还是常见等位基因的频率均存在显著差异,四川、广东、湖南岳阳3省市与中国南方汉族人群基因分布规律却较为相近。结论:获得了河北地区汉族人群HLA-C位点基因分布规律和特征,与南方汉族人群差异显著,本研究为中国人群HLA-C位点基因研究和应用提供了参考数�
简介:目的:研究HLA配型不相合异基因造血干细胞移植联合亲缘单倍体相合骨髓输注,探讨降低急性移植物抗宿主病发生率的方法及其临床的意义。方法:亲缘半相合及非亲缘HLA不全相合造血干细胞移植联合亲缘单倍体相合骨髓输注共30例,其中急性髓系白血病(AML)8例(其中1例为骨髓增生异常综合征转化AML),急性淋巴细胞白血病(ALL)17例(其中合并BCR/ABL融合基因阳性者1例),骨髓增生异常综合征RAEB2例,急性混合细胞白血病3例。第一供者来源亲缘单倍体相合移植20例,非血缘不全相合移植10例。预处理方案采用改良马利兰/环磷酰胺(马利兰、阿糖胞苷、司莫司汀、环磷酰胺/氟达拉滨)+抗人胸腺T细胞免疫球蛋白。移植物抗宿主病预防采用短程甲氨蝶呤+环孢素A或吗替麦考酚酯的方案。结果:30例患者均获得造血重建。中性粒细胞≥0.5×10~9/L及血小板≥20×10~9/L的时间分别为14(8-26)d及11.5(10-24)d,植入证据检测为100%第一供者造血,100d内Ⅰ-ⅡaGVHD的累计发生率是22.3%(95%CI9.9%-34.7%),Ⅱ-Ⅳ和Ⅲ-ⅣaGVHD累积发生率分别为22.7%(95%CI,10%-35.4%)和12.7%(95%CI6.9%-15.5%)。11例1-2个位点不合移植患者中有4例发生Ⅱ-Ⅳ度aGVHD(13.3%),19例3-5个位点不合移植患者中有5例发生Ⅱ-ⅣaGVHD(16.7%)。发生急性移植物抗宿主病组和无急性移植物抗宿主病组复发率、2年无病生存率差异无显著性意义(P>0.05)。Ⅰ-Ⅱ和Ⅲ-ⅣcGVHD累积发生率为13.3%(95%CI,1.4%-26.8%)和3.3%(95%CI,0%-12.2%),其中1例(3.3%)为广泛慢性GVHD。2年预计总生存率(OS)及2年无病生存率(DFS)分别为68.2%(95%CI51.0%-85.4%)和81.1%(95%CI66.0%-96.2%)。结论:两种HLA不全相合异基因造血干细胞aGVHD发生率低,在缺乏HLA相合供者时,联合亲缘单倍体相合骨髓移植治疗恶性血液病的方法安全有效。