简介：Humantumornecrosisfactorα(hTNFα),apleiotropiccytokinewithactivitiesrangingfromhostdefensemechanismsininfectionandinjurytoseveretoxicityinsepticshockorotherrelateddiseases,isapromisingtargetfordrugscreening.UsingtheSELEX(systematicevolutionofligandsbyexponentialenrichment)process,weisolatedoligonucleotideligands(aptamers)withhighaffinitiesforhTNFα.Aptamerswereselectedfromastartingpoolof40randomizedsequencescomposedofabout1015RNAmolecules.RepresentativeaptamersweretruncatedtotheminimallengthwithhighaffinityforhTNFαandwerefurthermodifiedbyreplacementof2'-OHwith2'-Fand2'-NH2atallribopurinepositions.ThesemodifiedRNAaptamerswereresistanttonuclease.ThespecificityoftheseaptamersforhTNFαwasconfirmed,andtheiractivitytoinhibitthecytotoxicityofhTNFαonmouseL929cellswasdetermined.Resultsdemonstratedthatfour2'-NH2-modifiedaptamersboundtohTNFαwithhighaffinityandblockedthebindingofhTNFαtoitsreceptor,thusprotectingtheL929cellsfromthecytotoxicityofhTNFα.OligonucleotideaptamersdescribedherearepotentialtherapeuticsanddiagnosticsforhTNFc-relateddiseases.

简介：目的探讨1mLTrizol试剂提取大鼠心室肌高质量RNA的最适取样量。方法分别用1mLTrizol提取80,60,40,20mg大鼠心室肌总RNA。结果心室肌取样量小于40mg时,提取的RNA完整性和纯度可满足后续实验要求。

简介：以田间幼嫩叶片为试材,建立枣RNA改良CTAB提取法,改良之处包括利用巯基乙醇和PVP联合去除多酚、CTAB与异硫酸氰胍联合促进RNA释放及加入糖原提高产率等。改良CTAB法提取液组成：2%CTAB,4mol/L异硫酸氰胍,100mmol/LTris-HCl（pH8.0）,20mmol/LEDTA（pH8.0）,2%PVP,4%β-巯基乙醇,250μg/ml糖原。进而采用Trizol试剂法、改良CTAB法、改进SDS-酚法、热硼酸法和异硫氰酸胍法5种方法分别对枣组培苗、幼叶、幼嫩枝皮、根皮和枣果5种器官和组织进行了总RNA提取。结果表明,组培苗RNA提取以Trizol试剂法为最佳,田间幼叶和成熟果实宜采用改良CTAB法,幼嫩枝皮和根皮宜采用改良CTAB法或改进SDS-酚法;本研究建立的改良CTAB法可作为枣不同器官和组织RNA提取的通用方法;根据季节可从不同器官和组织中获得高质量RNA;枣组织RNA含量相差较大,以幼嫩叶片含量最高,其次为组培苗、枝皮、枣果和根皮。

简介：

简介：摘要目的分析阿尔茨海默病（AD）小鼠脑组织长链非编码RNA（LncRNA）和信使RNA（mRNA）表达谱，构建竞争内源性RNA（ceRNA）调控网络，探讨差异表达LncRNA在AD发病机制中的潜在作用。方法选取3只10月龄雄性APP/PS1转基因小鼠作为AD组，3只年龄及体质量相匹配的普通C57小鼠作为对照组。使用基因芯片技术检测2组小鼠脑组织LncRNA和mRNA的表达，筛选出差异表达的LncRNA和mRNA。对部分差异表达的LncRNA进行实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）。对差异表达的mRNA进行基因本体论（GO）和京都基因、基因组百科全书（KEGG）通路分析。随机挑选6个差异表达LncRNA构建ceRNA网络，进行AD的靶基因功能预测分析。结果与对照组相比，AD组小鼠脑组织差异表达1.5倍以上的LncRNA有933个，其中上调222个，下调711个；差异表达1.5倍以上的mRNA有529个，其中上调189个，下调340个。qRT-PCR检测结果显示，AD组与对照组比较，7个差异表达的LncRNA上调或下调趋势与基因芯片结果一致，差异均有统计学意义（P值均<0.05）。GO和KEGG通路分析结果显示，差异表达基因主要参与氨基酸代谢、炎症反应和免疫反应。ceRNA调控网络靶基因的功能富集分析显示，LncRNA在胰岛素抵抗以及糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路中显著富集。结论AD小鼠脑组织LncRNA表达谱发生显著变化，由LncRNA Dgkb、Svip等构建的ceRNA调控网络有助于增进对AD发病分子机制的研究，差异表达的LncRNA或通路有可能成为潜在的治疗靶点。

简介：摘要目的检测DEAD盒RNA解螺旋酶5(DDX5)和微小RNA-205(miR-205)在前列腺癌(PCa)中的表达情况，并分析二者与PCa预后的关系。方法选取2015年4月至2017年4月于北京市朝阳区双桥医院行前列腺癌根治术或穿刺活检术的86例PCa患者为研究对象，取患者术中切除的癌组织及癌旁组织分别作为PCa组和对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测组织中DDX5 mRNA、miR-205的水平。采用免疫组化法检测组织中DDX5的表达情况。分析DDX5、miR-205表达水平与临床病理特征的关系。采用Kaplan-Meier生存分析DDX5、miR-205表达水平与PCa患者的预后关系。采用Cox回归分析PCa预后不良的影响因素。结果PCa组的DDX5 mRNA及蛋白表达水平均高于对照组(均P<0.05)，miR-205表达水平低于对照组(P<0.05)。PCa患者中DDX5、miR-205表达与肿瘤分期、血清PSA、Gleason评分、肿瘤转移均有相关性(均P<0.05)，而与患者年龄、切缘性质均无相关性(均P>0.05)。经Kaplan-Meier生存分析，DDX5阳性表达患者的3年累积生存率低于DDX5阴性表达患者(P<0.05)；miR-205高表达患者的3年累积生存率高于miR-205低表达患者(P<0.05)。多因素Cox分析结果显示，DDX5水平偏高、miR-205水平偏低是PCa不良预后的危险因素(HR＝2.598、3.342，均P<0.01)。结论在PCa患者癌组织中DDX5高表达，miR-205低表达，二者与PCa的多种临床病理及预后有关，是PCa患者预后不良的危险因素。

简介：摘要目的观察长链非编码RNA(lncRNA)H19靶向微小RNA(miRNA，miR)-675/EHZ2对结肠癌细胞增殖的影响。方法收集2013年7月到2018年7月郑州大学附属肿瘤医院结肠癌组织及其对应的癌旁组织各150例，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析LINC00052和miR-330-3p表达水平。待细胞完全贴壁后，采用lncRNAH19 shRNA、lncRNA control shRNA、miRNA Control和miR-675慢病毒感染SW480细胞，感染12 h更换含嘌呤霉素(1 mg/L)的杜尔伯科改良伊格尔(DMEM)培养基处理24 h，存活的细胞即为稳定细胞株，分别命名为Lnc Control组、lncRNAH19 KD组、miR-Control组和miR-675组。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析lncRNAH19和miR-675关系以及miR-675的靶基因。在结肠癌细胞株SW480建立lncRNAH19沉默细胞株和miR-765过表达细胞株，采用5-乙炔基-2’-脱氧尿嘧啶核苷(EdU)法和细胞计数试剂盒(CCK-8)法测定不同处理结肠癌细胞的增殖能力。体内异体移植瘤实验分析不同处理对成瘤的影响。采用t检验分析两组数据的统计学意义。结果与癌旁组织lncRNAH19和miR-675[(1.12±0.18)、(1.09±0.17)]比较，结肠癌组织中lncRNAH19表达水平(3.49±0.27)显著增加，miR-675表达水平(0.32±0.11)显著下调，差异均有统计学意义(t＝3.109、2.981，P<0.05)。与Lnc-Contrtol组和miR-Control组结肠癌细胞EdU阳性率[(89.44±10.25)%、(85.41±12.33)%]比较，lncRNAH19 KD组和miR-675组结肠癌细胞EdU阳性率[(30.14±6.89)%、(41.72±8.32)%]显著下调，差异有统计学意义(t＝2.981、2.981，P<0.05)。CCK-8实验显示，与Lnc-Contrtol组和miR-Control组结肠癌细胞增殖能力比较，lncRNAH19 KD组和miR-675组结肠癌细胞能力显著下调，差异有统计学意义(F＝2.441、2.592，P<0.05)。与Lnc-Contrtol组和miR-Control组结肠癌细胞体内增殖能力比较，lncRNAH19 KD组和miR-675组结肠癌细胞能力显著下调，差异有统计学意义(F＝1.980、2.019，P<0.05)。生物信息学和双荧光素酶分析显示lncRNAH19能与miR-675互补结合，EHZ2是miR-675的靶蛋白。与Lnc-Contrtol组和miR-Control组结肠癌细胞EHZ2蛋白表达水平[(1.19±0.13)、(1.04±0.14)]比较，lncRNAH19 KD组和miR-675组结肠癌细胞EHZ2蛋白表达水平[(0.32±0.13)、(0.47±0.13)]显著下调，差异有统计学意义(t＝3.109、3.011，P<0.05)。结论lncRNAH19通过靶向miR-675/EHZ2调控结肠癌细胞的增殖。

简介：摘要目的观察长链非编码RNA Linc00472(LncRNA Linc00472)靶向调控微小RNA-381(miR-381)对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响。方法收集2017年3月至2018年5月郑州大学第一附属医院收治的骨肉瘤患者29例为研究对象，实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测骨肉瘤组织和瘤旁组织中Linc00472的表达。将骨肉瘤U2OS细胞分为pcDNA3.1组、pcDNA3.1-Linc00472组、pcDNA3.1-Linc00472＋miR-NC组、pcDNA3.1-Linc00472＋miR-381组。甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞增殖；流式细胞术检测细胞凋亡；Transwell实验检测细胞迁移及侵袭。双荧光素酶报告实验鉴定Linc00472与miR-381的靶向关系。两组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析。结果Linc00472在骨肉瘤组织中的表达水平低于瘤旁组织(0.31±0.03比1.03±0.10，t＝37.138，P<0.05)，差异有统计学意义；与pcDNA3.1组比较，pcDNA3.1-Linc00472组细胞存活率[(100.29±10.12)%比(53.29±5.44)%]低于pcDNA3.1组(t＝12.272，P<0.05)，差异有统计学意义，迁移细胞数[(266.00±23.61)个比(124.00±12.01)个]与侵袭细胞数[(131.00±13.06)个比(62.00±6.24)个]少于pcDNA3.1组(t＝16.082，P<0.05；t＝14.301，P<0.05)，差异有统计学意义，而细胞凋亡率[(8.58±0.91)%比(26.61±2.64)%]高于pcDNA3.1组(t＝19.370，P<0.05)，差异有统计学意义；miR-381过表达可抑制野生型载体WT-Linc00472细胞的荧光素酶活性(t＝19.827，P<0.05)，差异有统计学意义；与pcDNA3.1-Linc00472＋miR-NC组比较，pcDNA3.1-Linc00472＋miR-381组可增强细胞增殖[(53.17±5.33)%比(85.26±8.62)%]、迁移[(122.00±12.31)个比(223.00±22.18)个]及侵袭[(64.00±6.36)个比(104.00±10.20)个]能力高于pcDNA3.1-Linc00472＋miR-NC组(t＝9.499，P<0.05；t＝11.945，P<0.05；t＝9.983，P<0.05)，细胞凋亡率[(26.11±2.62)%比(13.11±1.34)%]低于pcDNA3.1-Linc00472＋miR-NC组(t＝13.253，P<0.05)，差异有统计学意义。结论LncRNA Linc00472通过靶向调控miR-381可抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移及侵袭并诱导细胞凋亡。

简介：摘要目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)肿瘤蛋白翻译控制反义RNA 1(TPT1-AS1)在结肠癌组织中的表达和临床意义，及其对结肠癌细胞增殖、细胞周期、迁移和侵袭的影响。方法收集2016年7月至2017年9月于天津医科大学总医院胃肠外科进行结肠癌根治术的72例结肠癌患者的癌组织标本及相应的癌旁组织，采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测lncRNA TPT1-AS1在结肠癌组织的相对表达量，并分析其表达与结肠癌临床病理特征的相关性。构建lncRNA TPT1-AS1敲低和对照载体(si-TPT1-AS1、si-NC)，分别设为敲低组和对照组，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)细胞增殖实验、细胞周期分析实验、Transwell迁移侵袭实验检测结肠癌细胞SW620的增殖、细胞周期阻滞、迁移和侵袭能力。计量资料组间比较采用t检验，计数资料采用χ2检验。结果LncRNATPT1-AS1在结肠癌组织中的相对表达量显著高于对应的癌旁组织(3.99±0.21比1.78±0.09，t＝35.433，P<0.05)，且其表达与TNM分期(χ2＝9.000，P<0.05)和远处转移(χ2＝4.600，P<0.05)呈正相关，差异均有统计学意义。CCK-8实验结果显示，敲低TPT1-AS1 48 h(0.47±0.02比0.83±0.05，t＝10.543，P<0.05)、72 h后(0.69±0.02比1.23±0.09，t＝10.145，P<0.05)，SW620细胞的增殖能力均显著低于对照组，差异均有统计学意义。细胞周期分析显示，敲低TPT1-AS1可使G0/G1期细胞比例高于对照组[(68.47±2.79)%比(44.69±1.26)%，t＝14.672，P<0.05]，S期细胞比例低于对照组[(22.87±1.96)%比(37.48±1.57)%，t＝17.246，P<0.05]，G2/M期细胞比例低于对照组[(8.22±0.87)%比(20.78±0.45)%，t＝18.772，P<0.05]，差异均有统计学意义。Transwell迁移侵袭实验结果表明，敲低TPT1-AS1可使SW620细胞的迁移能力显著低于对照组[[(87±8)个比(177±10)个，t＝15.237，P<0.05]，侵袭能力显著低于对照组[(47±5)个比(122±8)个，t＝19.578，P<0.05]，差异均有统计学意义。结论lncRNA TPT1-AS1在结肠癌组织中表达升高，敲低TPT1-AS1可抑制结肠癌细胞增殖、细胞周期G1/S期转换、迁移和侵袭。

简介：摘要目的探讨长链非编码RNA(lncRNA) MYOSLID靶向微小RNA(miR)-339-5p调控肺癌细胞生物学行为的分子机制。方法收集2016年5月至2018年4月于本院接受手术治疗的肺癌组织及癌旁组织标本20例，采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测肺癌组织及癌旁组织中MYOSLID与miR-339-5p的表达。体外培养肺癌细胞株A549并分组转染，用噻唑蓝(MTT)、双荧光素酶报告实验验证MYOSLID对miR-339-5p的靶向调控作用；通过细胞转染及分组，流式细胞术检测细胞凋亡，Transwell实验检测细胞迁移及侵袭，双荧光素酶报告基因检测，蛋白质印迹法(Western blot)检测，细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)，负向调控因子P21(p21)，B淋巴细胞瘤2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)、金属蛋白酶2(MMP)-2、MMP-9蛋白表达用Image J软件分析各条带灰度值。结果抑制lncRNA MYOSLID表达对肺癌A549细胞活力及Cyclin D1蛋白相对表达量，si-MYOSLID组低于si-NC组[1.00±0.09比0.42±0.04，t＝17.667，P<0.05；0.74±0.06比0.31±0.03，t＝19.230，P<0.05]；p21蛋白si-MYOSLID组高于si-NC组[0.28±0.03比0.69±0.06，t＝18.335，P<0.05，]，差异有统计学意义。抑制lncRNA MY OSLID表达对肺癌A549细胞凋亡率(%)及bax的表达水平，si-MYOSLID组明显高于si-NC组[6.32±0.64比19.48±1.83，t＝20.317，P<0.05；0.32±0.03比0.71±0.07，t＝15.362，P<0.05]；bcl-2蛋白的表达水平，si-MYOSLID组明显高于si-NC组[0.62±0.06比0.23±0.03，t＝17.441，P<0.05]，差异有统计学意义。抑制lncRNA MYOSLID表达对肺癌A549细胞迁移与侵袭细胞数及MMP-2、MMP-9的表达水平，si-MYOSLID组低于si-NC组[0.22±0.06比0.43±0.01，t＝14.441，P<0.05；0.15±0.02比0.37±0.02，t＝10.410，P<0.05；0.36±0.02比0.48±0.02，t＝16.041，P<0.05]，差异有统计学意义。miR-NC组肺癌A549细胞增殖、凋亡率低于miR-339-5p组[(1.00±0.09)%比(2.58±0.25)%，t＝17.839，P<0.05；(7.32±0.74)%比(17.45±1.63)%，t＝16.041，P<0.05]；迁移细胞数及侵袭细胞数，miR-NC组高于miR-339-5p组(98.36±9.54比52.64±5.28，t＝12.579，P<0.05；84.33±8.41比44.69±5.17，t＝12.046，P<0.05)，差异有统计学意义。miR-339-5p过表达对肺癌A549细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭相关蛋白表达的影响-Cyclin D1蛋白表达，miR-NC组高于miR-339-5p组(0.76±0.07比0.38±0.03，t＝14.968，P<0.05)；p21蛋白表达miR-NC组低于miR-339-5p组(0.27±0.03比0.64±0.06，t＝16.546，P<0.05)；bcl-2蛋白表达，MMP-9蛋白表达，MMP-2蛋白表达，miR-NC组低于miR-339-5p组(0.61±0.06比0.28±0.03，t＝14.758，P<0.05；0.71±0.07比0.33±0.03，t＝14.968，P<0.05；0.88±0.08比0.43±0.04，t＝15.093，P<0.05)bax蛋白表达，miR-NC组低于miR-339-5p组(0.31±0.03比0.68±0.06，t＝16.546，P<0.05)，差异有统计学意义。干扰miR-339-5p表达逆转了抑制lncRNA MYOSLID表达对肺癌A549细胞凋亡、迁移、侵袭的作用，与si-NC组比较，si-MYOSLID组逆转miR-339-5p表达，凋亡率(%)及迁移细胞数最明显，si-MYOSLID和si-MYOSLID+anti-miR-339-5p差异有统计学意义[(2.41±0.24)比(1.53±0.14)，F＝119.730，P<0.05；(19.63±1.95)比(12.48±1.23)，F＝130.702，P<0.05；(43.16±4.38)比(82.64±8.26)，F＝141.749，P<0.05]；与si-MYOSLID+anti-miR-NC组比较，si-MYOSLID+anti-miR-339-5p凋亡率[(12.48±1.23)%，F＝130.027，P<0.05]干扰miR-339-5p表达逆转了抑制lncRNA MYOSLID表达对肺癌A549细胞凋亡、迁移、侵袭相关蛋白表达的作用，蛋白表达si-MYOSLID组和si-MYOSLID+anti-miR-339-5p组差异有统计学意义。结果显示抑制MYOSLID的表达可通过靶向miR-339-5p而抑制肺癌细胞增殖、迁移及侵袭，并可诱导细胞凋亡，MYOSLID可能为肺癌治疗的潜在新靶点。结论lncRNA MYOSLID通过调控miR-339-5p促进肺癌细胞的增殖、迁移及侵袭，抑制细胞凋亡。

简介：摘要目的探讨环状RNA circ0025847对结直肠癌细胞增殖的影响及其可能的作用机制。方法即时聚合酶链锁反应（real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR）法检测人结直肠癌细胞（HCT116，SW480）和人正常结肠上皮细胞（NCM460）中circ0025847和QK1的表达水平。CCK-8检测circ0025847和QK1对结直肠癌细胞增殖的影响。采用生物信息学方法筛选可与circ0025847结合的RNA结合蛋白（RNA-binding protein，RBP）。RNA pulldown和RNA结合蛋白免疫沉淀（RNA binding protein immunoprecipitation，RIP）实验检测circ0025847是否与QK1结合。蛋白免疫印迹法（western blot）分析过表达circ0025847后QK1的表达水平。设置阴性对照组（NC组），circ0025847过表达组和circ0025847过表达组+ QK1抑制组，CCK8法观察结直肠癌细胞增殖。结果circ0025847在NCM460、HCT116和SW480细胞中的表达水平分别为（1.01±0.05）、（0.49±0.08）和（0.45±0.10），QK1在NCM460、HCT116和SW480细胞中的表达水平分别为（0.98±0.07）、（0.50±0.07）和（0.47±0.09），二者均在结直肠癌细胞中低表达。过表达circ0025847和QK1可抑制结直肠癌细胞的增殖。RNA pulldown和RIP实验证实circ0025847和QK1可直接结合。circ0025847可正调控QK1的表达（7 199.20±12.44 vs 3 889.80±11.03）。circ0025847通过促进QK1表达抑制结直肠癌细胞的增殖。结论circ0025847通过正调控QK1表达来抑制结直肠癌细胞的增殖，circ0025847可能是治疗结直肠癌的潜在作用靶点。

简介：摘要目的探讨长链非编码RNA核富集转录体1(LncNEAT1)胰腺癌中的表达水平及其影响胰腺癌细胞侵袭和迁移能力的影响，分析胰腺癌转移与LncNEAT1、微小RNA-15b(miR-15b)之间的相关性，探讨LncNEAT1影响胰腺癌细胞生物学表型的机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测40例胰腺癌组织及胰腺癌细胞中LncNEAT1、微小RNA-15b(miR-15b)的表达水平，小干扰RNA转染至胰腺癌细胞SW1990中，Transwell实验检测转染后胰腺癌细胞的迁移和侵袭能力；过表达NEAT1后观察miR-15b的表达水平；双荧光素酶报告实验验证LncNEAT1与miR-15b的调控关系。结果胰腺癌组织中LncNEAT1表达水平(4.29±0.56)高于癌旁组织(2.21±0.30，t＝ 19.21 ，P<0.001)；miR-15b在胰腺癌组织中的表达水平(3.10±0.12)高于癌旁组织(2.01±0.35，t＝ 6.45，P<0.01)；LncNEAT1小干扰RNA转染至胰腺癌细胞SW1990后，胰腺癌细胞的迁移能力[(68.19±2.33)、(58.07±3.73)个/视野]显著低于对照组[(180.39±10.87)个/视野，t＝6.02、8.43，P<0.01，P<0.01]，转染后SW1990细胞侵袭能力[(50.01±5.73)、(49.68±8.86)个/视野]明显低于对照组[(112.20±10.93)个/视野，t＝5.38、6.95，P<0.05, P<0.01] 。NEAT1的表达与胰腺癌患者TNM分期、有无淋巴结转移密切相关(χ2＝3.92、5.74, P<0.05, P<0.05)；miR-15b的表达与胰腺癌患者TNM分期、有无淋巴结转移密切相关(χ2＝4.315、4.642，P<0.05, P<0.05)；双荧光素酶报告实验表明miR-15b可明显降低MUT-NEAT1-AS1荧光素酶活性(t＝11.53，P<0.01)，LncNEAT1可负向调控miR-15b。结论抑制LncNEAT1表达可能通过调控miR-15b抑制胰腺癌细胞的迁移和侵袭能力。

简介：摘要目的探讨间充质干细胞(MSC)在非小细胞肺癌(NSCLC)抵抗表皮生长因子受体抑制剂(EGFR-TKI)耐药过程中的作用及其机制。方法HCC827及PC-9肺腺癌细胞与MSC共培养后给予吉非替尼处理，检测肺癌细胞凋亡变化；应用荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测共培养刺激后MSC细胞表达生长因子及细胞因子的情况；收集培养癌旁和远端正常肺组织来源MSC并行微小核糖核酸(miRNA)表达谱检测，并采用miRNA模拟物及抑制剂进行功能验证；此外，行聚合酶链反应微阵列分析(PCR Array)检测进一步探讨MSC调控NSCLC细胞抵抗吉非替尼的机制。两组数值间比较应用非配对t检验。结果肺癌来源MSC的miR-26a表达组低于正常肺组织来源MSC的miR-26a表达组(53.3%，t＝4.626，P<0.01)，而肺癌来源MSC的miR-146a表达组高于正常肺组织来源MSC的miR-146a表达组(1.83倍，t＝4.895，P<0.01)。应用Transwell体系共培养肺癌细胞和MSC 48 h后发现，肺癌细胞(HCC827细胞)来源的miR-26a表达组明显低于MSC来源的miR-26a表达组(45.7%，t＝1.866，P<0.05)；且肺癌细胞(PC-9细胞)来源的miR-26a表达组也明显低于MSC来源的miR-26a表达组(62.0%，t＝1.728，P<0.05)，同时肺癌细胞(HCC827细胞)来源的肝细胞生长因子(HGF)表达组明显高于MSC来源的HGF表达组(3.88倍，t＝2.014，P<0.05);且肺癌细胞(PC-9细胞)来源的HGF表达组也明显高于MSC来源的HGF表达组(5.29倍，t＝2.197，P<0.05)。此外，MSC培养液可促进HCC827细胞可高表达转运蛋白和药物代谢基因三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2(ABCG2)(4.23倍)和细胞色素P450酶2C9(CYP2C9)(2.18倍)。结论肺癌来源的MSC通过异常表达miR-26a和miR-146a调控促肿瘤细胞因子增强NSCLC细胞对EGFR-TKI的抗药性。

简介：摘要目的本研究旨在探讨微小RNA(miR)-376b-3p和miR-654-5p在大肠癌中的表达水平及其临床意义。方法荧光定量PCR检测34组来自2018年6月至2019年1月淮安市肿瘤医院大肠癌及癌旁组织中miR-376b-3p和miR-654-5p的表达。利用肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库分析miR-376b-3p和miR-654-5p的表达与大肠癌患者临床病理因素以及生存预后的关系。应用SPSS 17.0软件对所有结果进行统计分析。结果相对于癌旁组织，大肠癌组织中miR-376b-3p表达下调，miR-654-5p表达上调，差异有统计学意义(P<0.001)。miR-376b-3p表达的降低和miR-654-5p表达的升高与肿瘤的转移和临床分期密切相关。此外，单因素分析结果显示miR-376b-3p的低表达或miR-654-5p的高表达的大肠癌患者总体生存率较低，差异有统计学意义(P<0.05)。多因素分析发现miR-376b-3p低表达和miR-654-5p高表达是大肠癌患者预后差的独立预测因子。结论miR-376b-3p的低表达和miR-654-5p的高表达可能与大肠癌的发生、发展明显相关。

简介：摘要探讨长链非编码RNA（LncRNA） PCBP1-AS1对口腔鳞癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其对微RNA-196a（miR-196a）的靶向调控作用。研究发现PCBP1-AS1在口腔鳞癌组织中低表达，而miR-196a表达上调；转染pcDNA-PCBP1-AS1或转染anti-miR-196a均可抑制细胞增殖、迁移及侵袭，并可诱导细胞周期停滞于G0-G1期；PCBP1-AS1可靶向调控miR-196a；miR-196a过表达可逆转PCBP1-AS1对细胞生物学行为的作用。PCBP1-AS1可通过下调miR-196a的表达从而抑制口腔鳞癌细胞增殖、迁移及侵袭。

简介：摘要目的探讨微RNA-19(miR-19)和微RNA-21(miR-21)在老年分化型甲状腺癌(DTC)患者中的诊断价值，分析其与老年DTC患者病理特征的关系。方法回顾性研究，入选2015年1月至2018年1月96例老年DTC患者，均行颈淋巴结穿刺和甲状腺癌根治手术，检测穿刺组织、DTC组织及癌旁组织的miR-21和miR-19表达水平，分析不同组织间miR-21和miR-19表达水平的相关性，观察不同临床病理特征的老年患者miR-21和miR-19表达水平的差异。结果miR-21的表达水平由低到高分别为癌旁组织(0.92±0.33)、淋巴结组织(3.41±0.64)及DTC组织(4.28±1.56)，差异有统计学意义(F＝296.683，P<0.01)；各组织中miR-19的表达水平差异无统计学意义(均P>0.05)。相关性检验结果显示，DTC组织miR-21表达水平与淋巴结组织、癌旁组织呈正相关(r值分别为0.724、0.801，均P<0.01)。DTC组织miR-19表达水平与淋巴结组织、癌旁组织无线性相关(r值分别为0.127、0.165，均P>0.05)。淋巴结组织miR-21的表达水平与癌旁组织呈正相关(r＝0.705，P<0.01)，而miR-19表达水平间无线性相关(r＝0.191，P>0.05)。不同性别、不同肿瘤直径的患者颈淋巴结miR-21表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。肿瘤分期Ⅲ期的患者颈淋巴结miR-21表达水平高于Ⅰ～Ⅱ期患者，差异有统计学意义(P<0.05)。存在腺体外浸润的患者颈淋巴结miR-21表达水平高于无腺外浸润的患者(P<0.05)。不同性别、肿瘤直径、肿瘤分期及肿瘤是否有腺外浸润的患者颈淋巴结miR-19表达水平差异无统计学意义(均P>0.05)。结论miR-19可能不参与老年DTC的发生、发展，而miR-21在老年DTC的发生、发展中具有重要作用，尤其是在肿瘤的周围浸润与转移过程中可能存在有促进作用。颈淋巴结穿刺检测miR-21能够早期对DTC进行诊断与评估，为治疗方案的选择提供依据。

简介：摘要目的探讨微小RNA(microRNA，miRNA)-34a和miRNA-204的异常表达是否能用于区别慢性胰腺炎(CP)与胰腺导管上皮内瘤变(PanINs)。方法用部分结扎大鼠胆胰管和置入7，12-二甲基苯并蒽(DMBA)的方法建立SD大鼠(华中科技大学实验动物中心提供)CP-胰腺癌模型，获得16个CP标本和26个PanINs标本。然后用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测4种与胰腺癌相关的miRNAs(miR-34a、miR-204、miR-107和miR-21)在这些标本中的表达。两组之间的差异用方差分析、Kruskal-Wallis检验或Student’s t检验进行统计学分析。结果miR-34a在PanIN-1(1.81±0.12比1.00±0.08，t＝2.032，P<0.05)、PanIN-2(1.72±0.11比1.00±0.08，t＝1.332，P<0.05)和PanIN-3(2.62±0.14比1.00±0.08，t＝4.135，P<0.05)标本中的表达显著高于CP组，差异有统计学意义。miR-204在PanIN-2(0.59±0.08比1.00±0.12，t＝5.037，P<0.05)和PanIN-3(0.51±0.07比1.00±0.12，t＝5.385，P<0.05)标本中的表达显著低于CP组，差异有统计学意义。miR-21只在PanIN-3(2.23±0.21比1.00±0.12，t＝4.485，P<0.05)标本中表达显著高于CP组，差异有统计学意义。结论miR-34a和miR-204在CP发展到胰腺癌的过程中表达异常，可用于区别CP与PanINs。

简介：摘要目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)人去泛素化酶含有卵巢肿瘤结构域的6B反义RNA 1(OTUD6B-AS1)通过微小RNA(microRNA，miR)-122-5p对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测2010年1月至2013年1月河南科技大学第一附属医院手术切除的98例肝癌组织标本及其配对的癌旁组织、肝癌细胞系(Hhu7、Hep3B、HCCLM3、MHCC97H)和人正常肝细胞(LO2)中OTUD6B-AS1的相对表达量。用脂质体2000(Lipofectamine™ 2000)分别将sh-NC(sh-NC组)和sh-OTUD6B-AS1(sh-OTUD6B-AS1组)转染入Hep3B细胞。克隆形成实验和细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖；Transwell检测细胞侵袭；细胞划痕实验检测细胞迁移。用TargetScan预测OTUD6B-AS1与miR-122-5p的互补结合位点，随后用双荧光素酶报告基因实验确定两者的靶向关系。为了进一步验证两者调控关系，将Hep3B细胞分别分为sh-NC＋miR-NC组、sh-OTUD6B-AS1＋miR-NC组、sh-OTUD6B-AS1＋anti-miR-122-5p组，比较3组细胞增殖、侵袭和迁移。两两比较采用t检验；多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验；生存分析采用Log-rank检验。结果肝癌组织中OTUD6B-AS1相对表达量为2.42±0.96，明显高于癌旁组织(0.92±0.39，t＝14.331，P<0.05)，差异有统计学意义。肝癌细胞系Hhu7(2.84±0.23)、Hep3B(3.80±0.68)、HCCLM3(1.89±0.25)和MHCC97H(2.01±0.71)的OTUD6B-AS1相对表达量明显高于正常肝细胞LO2(1.04±0.23，F＝51.827，P<0.05)，差异有统计学意义。sh-OTUD6B-AS1组细胞增殖、侵袭和迁移能力均低于sh-NC组(t＝5.556、2.454，P值均<0.05)，差异均有统计学意义。双荧光素酶报告基因实验结果证实OTUD6B-AS1可以靶向调控miR-122-5p。sh-NC＋miR-NC组和sh-OTUD6B-AS1＋anti-miR-122-5p组增殖、侵袭和迁移能力明显高于sh-OTUD6B-AS1＋miR-NC组(F＝111.908、0.301，P值均<0.05)，差异均有统计学意义。结论OTUD6B-AS1可能通过负调控miR-122-5p促进肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移。

简介：摘要目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)同源盒D基因簇反义生长相关长非编码RNA(HAGLR)对前列腺癌DU145细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及其机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测人前列腺癌DU145细胞和正常前列腺上皮RWPE-1细胞中HAGLR的表达水平。将体外培养的DU145细胞分为对照组(未转染)、siNC组(转染阴性对照)和siHAGLR组(转染靶向HAGLR的小干扰RNA)，采用实时荧光定量PCR检测各组细胞中HAGLR和微小RNA(miR)-6516-5p的表达水平，噻唑蓝(MTT)法、Transwell小室实验和流式细胞仪检测各组细胞增殖、侵袭和凋亡。采用双荧光素酶报告基因实验检测HAGLR和miR-6516-5p的靶向结合关系。将miR-6516-5p抑制剂(anti-miR-6516-5p)、miRNA抑制剂阴性对照(anti-miR-NC)分别与HAGLR-siRNA共转染后观察下调miR-6516-5p表达对HAGLR低表达的DU145细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。多组间比较使用单因素方差分析和LSD-t检验，两组间比较采用独立样本t检验。结果DU145细胞中HAGLR的表达水平(4.38±1.15比1.00±0.06，t＝8.727，P<0.05)明显高于RWPE-1细胞，差异有统计学意义。siNC组细胞吸光度值(1.01±0.08比0.98±0.06，t＝0.900，P>0.05)、穿膜细胞数[(119.75±8.86)个比(124.56±11.35)个，t＝1.002，P>0.05]和细胞凋亡率[(6.62±1.06)%比(6.85±1.12)%，t＝0.447，P>0.05]与对照组比较差异均无统计学意义。siHAGLR组细胞吸光度值(0.73±0.05比0.98±0.06，1.01±0.08，t对照＝9.603，tsiNC＝8.904，P<0.05)、穿膜细胞数[(55.64±4.28)个比(124.56±11.35)个，(119.75±8.86)个，t对照＝17.043，tsiNC＝19.543，P<0.05)]明显低于对照组、siNC组，而细胞凋亡率[(19.92±3.25)%比(6.85±1.12)%，(6.62±1.06)%，t对照＝11.406；tsiNC＝11.672，P<0.05]均明显高于对照组、siNC组，差异均有统计学意义。双荧光素酶报告基因实验证实miR-6516-5p可与HAGLR靶向结合降低细胞的荧光素酶活性(0.32±0.02比1.00±0.06，t＝32.255，P<0.05)，差异有统计学意义。siHAGLR+ anti-miR-6516-5p组细胞吸光度值(0.87±0.06比0.65±0.05，t＝8.450，P<0.05)、穿膜细胞数[(93.73±6.18)个比(54.05±3.83)个，t＝16.373，P<0.05]显著高于siHAGLR+anti-miR-NC组，细胞凋亡率[(9.32±1.15)%比(19.85±2.28)%，t＝0.575，P<0.05]显著低于siHAGLR+anti-miR-NC组，差异均有统计学意义。结论HAGLR低表达可通过靶向调控miR-6516-5p抑制前列腺癌DU145细胞增殖和侵袭并促进其凋亡。

简介：