简介：摘要目的建立高效的人肠三叶因子（ITF）重组表达及纯化策略，观察重组人ITF（rhITF）对烧伤小鼠肠黏膜损伤与修复的作用并探讨其机制。方法采用实验研究方法。采用新型酵母表达载体pGAPZαA和酵母菌X33重组表达ITF，并通过金属螯合亲和层析与阴、阳离子交换层析法纯化蛋白，行非还原十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）及蛋白质印迹法鉴定rhITF。rhITF与胃蛋白酶溶液、胰蛋白酶溶液按体积比1∶1混合，分别作用0.5、1.0、1.5、2.0 h和1.0、2.0、4.0 h后行非还原SDS-PAGE，分析rhITF的稳定性。按随机数字表法将105只6~8周龄BALB/c雄性小鼠分为假伤组（30只）、单纯烧伤组（45只）、烧伤+rhITF组（30只）。将单纯烧伤组和烧伤+rhITF组小鼠背部造成30%体表总面积Ⅲ度烧伤，假伤组小鼠模拟致假伤，烧伤+rhITF组小鼠伤后灌胃1 mg/kg rhITF，其余2组小鼠伤后给予等量生理盐水。伤后24 h，取15只单纯烧伤组小鼠，制备烧伤血清，用于细胞实验。伤后3、5、7 d，每组各取10只小鼠处死后取小肠组织，苏木精-伊红染色观察肠黏膜病理变化，分光光度法和酶联免疫吸附测定法测定肠组织二胺氧化酶（DAO）及乳酸脱氢酶（LDH）活性。取3批人结直肠腺癌HT-29细胞，分为阴性对照组、25 μg/mL rhITF组、50 μg/mL rhITF组（样本数为3），正常对照组、烧伤血清组、烧伤血清+rhITF组（样本数为3），CK869抑制剂组、CK666抑制剂组和溶剂对照组（样本数为2），分别进行相应处理，Transwell实验观察培养12 h后细胞移行。另取2批HT-29细胞，每批细胞均分为正常对照组、烧伤血清组和烧伤血清+rhITF组（样本数均为6），培养24 h后，蛋白质印迹法检测细胞腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）、磷酸化AMPK（p-AMPK）、Ras相关C3肉毒杆菌毒素底物1（Rac1）及肌动蛋白相关蛋白2/3（Arp2/3）复合亚基1B（ARPC1B）蛋白表达，活化磁珠下拉实验检测细胞Rac1活性。对数据行析因设计方差分析、单因素方差分析、SNK检验。结果每升发酵液获得rhITF 82.35 mg，蛋白纯度高达98%，且具有良好的抗原特异性。rhITF在胃蛋白酶和胰蛋白酶溶液中较稳定，与胰蛋白酶溶液作用2.0 h后仍有45%残余，与胃蛋白酶溶液作用4.0 h后仍有90%残余。假伤组小鼠伤后各时间点肠黏膜未见充血、水肿，单纯烧伤组小鼠伤后各时间点肠黏膜主要病理表现为充血、水肿、糜烂及出血。烧伤+rhITF组小鼠伤后3、5 d肠黏膜主要以充血、水肿为主，伤后7 d肠黏膜水肿和充血减轻。与单纯烧伤组比较，假伤组、烧伤+rhITF组小鼠伤后3、5、7 d肠组织DAO和LDH活性显著升高（P<0.05或P<0.01）。培养12 h后，25 μg/mL rhITF组细胞移行数为（58±12）个，显著多于阴性对照组的（16±5）个（P<0.01），显著少于50 μg/mL rhITF组的（123±9）个（P<0.05）。培养12 h后，烧伤血清组细胞移行数为（60±13）个，显著少于正常对照组的（143±11）个和烧伤血清+rhITF组的（138±8）个（P<0.05）。培养12 h后，溶剂对照组细胞移行数为（155±9）个，明显多于CK666抑制剂组的（33±5）个、CK869抑制剂组的（28±5）个（P<0.01）。培养24 h后，烧伤血清组细胞AMPK、Rac1蛋白表达量与正常对照组、烧伤血清+rhITF组相近（P>0.05），p-AMPK蛋白表达量明显高于正常对照组、烧伤血清+rhITF组（P<0.05或P<0.01），ARPC1B蛋白表达量明显低于正常对照组、烧伤血清+rhITF组（P<0.05）。培养24 h后，烧伤血清组细胞Rac1活性明显低于正常对照组、烧伤血清+rhITF组（P<0.05或P<0.01）。结论本研究获得的rhITF具有较高的纯度和超强的稳定性，能耐受极端pH和蛋白酶水解，减轻烧伤小鼠肠黏膜损伤。rhITF能通过抑制AMPK磷酸化维持Rac1-Arp2/3活性，促进肠上皮细胞移行，加速肠黏膜修复。

简介：摘要目的探讨恒定自然杀伤T(invariant natural killer T, iNKT)2细胞改善非酒精性脂肪肝(NAFL)肝脂质沉积的机制。方法高脂饮食喂养C57BL/6J小鼠建立NAFL模型。以全自动生化分析仪分析小鼠外周血中血清总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平。以苏木精-伊红(HE)进行常规肝病理染色。肝iNKT频率及iNKT1、iNKT2亚群频率采用流式细胞术检测。以Western印迹法检测肝脏组织中固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c)、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)-α、核因子-κB(NF-κB)表达情况。结果与对照组相比，NAFL小鼠体重增加，总胆固醇、HDL-C、LDL-C、ALT水平升高，肝脏脂质沉积增加，肝脏SREBP-1c、PPAR-α蛋白表达升高，NF-κB蛋白磷酸化水平升高(P<0.05或P<0.01)。腹腔注射α-半乳糖基神经酰胺(α-GalCer)后，NAFL小鼠总胆固醇、HDL-C、LDL-C水平降低，肝脂质沉积减少，肝脏SREBP-1c下调，PPAR-α表达上调，肝脏iNKT2亚群比例增加(P<0.05或P<0.01)。结论iNKT2细胞改善NAFL肝脂质沉积与下调肝组织SREBP-1c和上调PPAR-α有关。

简介：摘要目的研究内质网应激和NOD样受体蛋白3（NOD-like receptor protein 3，NLRP3）在重症中暑肠黏膜损伤中的作用及内质网应激抑制剂4-苯基丁酸（4-phenylbutyric acid，4-PBA）的保护效应。方法30只雄性BALB /c小鼠随机（随机数字法）分成对照组（control）、重症中暑组（heat stroke，HS）和4-PBA预处理组（4-PBA+HS，4-PBA 120 mg/kg，腹腔注射）。Control组置于室温，HS组和4-PBA+HS组置于高温气候动物培养箱[温度（35.5±0.5） ℃,湿度（60.0±5.0）%]，小鼠直肠温度达到42 ℃为重症中暑造模成功标准。中暑6 h后，采用比色法检测小肠匀浆丙二醛（MDA）及超氧化物歧化酶（SOD），ELISA法检测血清白介素-1β（IL-1β）及白介素-18 （IL-18），HE染色观察肠道组织病理，电镜下观察肠道超微结构，Western blot检测葡萄糖调节蛋白78（glucose regulated protein 78，GRP78）、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein，CHOP）、NLRP3和活化含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1（cleaved caspase-1）蛋白表达。计量资料多组间比较如满足方差齐性采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验；如不满足方差齐性采用Welch分析，组间两两比较采用Dunnett's T3检验，以P<0.05为差异有统计学意义。结果与control组相比，HS组小肠匀浆MDA升高（t=14.243，P<0.01）而SOD下降（t=7.781，P<0.01），血清IL-1β和IL-18显著升高（t=12.664，P<0.01；t=16.240，P<0.01），小肠绒毛广泛破坏伴有炎症细胞浸润，内质网扩张及线粒体肿胀空泡化，小肠组织GRP78、CHOP、NLRP3和cleaved caspase-1蛋白表达增加（t=14.824，P<0.01；t=12.667，P<0.01；t=9.298，P<0.01，t=6.588，P=0.001）。与HS组相比，4-PBA预处理降低MDA（t=9.167，P<0.01）并升高SOD（t=6.077，P<0.01），降低血清IL-1β和IL-18（t=4.889，P=0.001；t=5.693，P<0.01），减轻小肠黏膜的病理改变及超微结构的损伤，降低了GRP78、CHOP、NLRP3和cleaved caspase-1蛋白表达（t=9.080，P<0.01；t=7.152, P<0.01；t=4.249，P=0.005；t=3.650，P=0.011）。结论内质网应激和NLRP3参与重症中暑肠黏膜损伤，4-BPA通过抑制内质网应激及NLRP3炎症小体活化减轻重症中暑肠黏膜损伤。

简介：摘要目的评价过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)/NF-κB信号通路在丁酸钠减轻小鼠肠缺血再灌注损伤中的作用。方法SPF级健康成年雄性C57BL/6J小鼠32只，7~9周龄，体重20~25 g，采用随机数字表法分为4组(n＝8)：假手术组(Sham组)、肠缺血再灌注组(IIR组)、丁酸钠组(NaB组)和PPARγ抑制剂GW9662组(GW9662组)。采用夹闭肠系膜上动脉根部45 min后恢复灌注2 h的方法制备小鼠肠缺血再灌注损伤模型。GW9662组于缺血前1 h腹腔注射GW9662 2 mg/kg，NaB组和GW9662组于缺血前30 min腹腔注射丁酸钠500 mg/kg。于再灌注2 h时，心脏穿刺采集血标本，然后处死小鼠，取肠组织，光镜下观察肠黏膜损伤情况并行Chiu评分；采用ELISA法检测血清和小肠组织二胺氧化酶(DAO)、IL-6及TNF-α水平；采用Western blot法检测小肠组织PPARγ和NF-κB p65的表达水平。结果与Sham组比较，IIR组Chiu评分升高，血清和小肠组织DAO、TNF-α、IL-6水平升高，PPARγ表达下调，NF-κB p65表达上调(P<0.05)；与IIR组比较，NaB组小鼠Chiu评分、血清和小肠组织DAO、TNF-α、IL-6水平降低，PPARγ表达上调，NaB组及GW9662组NF-κB p65表达下调(P<0.05)；与NaB组比较，GW9662组Chiu评分、血清和小肠组织DAO、TNF-α、IL-6水平升高，PPARγ表达下调，NF-κB p65表达上调(P<0.05)。结论丁酸钠减轻肠缺血再灌注损伤的机制可能与激活PPARγ/NF-κB信号通路，抑制炎症反应有关。

简介：摘要目的评价氢对脓毒症相关性脑病(SAE)小鼠海马A1型星形胶质细胞活化的影响。方法清洁级健康雄性C57BL/6J小鼠164只，6~8周龄，体重20~25 g。采用随机数字表法分为4组(n＝41)：假手术组(Sham组)、假手术+氢气组(Sham+H2组)、SAE组和SAE+氢气组(SAE+H2组)。采用盲肠穿孔结扎法制备SAE模型。Sham+H2组和SAE+H2组分别于术后1和6 h时吸入2%氢气1 h。每组取20只小鼠，观察术后7 d生存率。于术后12 h处死其余小鼠，取脑组织，光镜下观察海马CA1区病理学结果，计算异常神经元比率；TUNEL法确定神经元凋亡率；采用免疫荧光染色法检测海马胶原纤维酸性蛋白(GFAP)与补体C3共表达情况；采用Western blot法测定海马C3表达水平，采用ELISA法检测海马TNF-α、IL-6、高迁移率族蛋白1(HMGB1)含量；于术后7 d，每组取6只小鼠行Y迷宫新异臂探索实验。结果与Sham组比较，SAE组术后7 d生存率降低，海马CA1区异常神经元比率和神经元凋亡率升高，TNF-α、IL-6、HMGB1含量升高，C3表达上调，GFAP/C3共表达细胞计数增多，新异臂探索时间缩短，偏好指数降低(P<0.05)。与SAE组比较，SAE+H2组术后7 d生存率升高，海马CA1区异常神经元比率和神经元凋亡率降低，TNF-α、IL-6、HMGB1含量降低，C3表达下调，GFAP/C3共表达细胞计数减少，新异臂探索时间延长，偏好指数升高(P<0.05)。Sham组和Sham+H2组各项指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论氢改善脓毒症小鼠SAE的机制可能与抑制海马A1型星形胶质细胞活化有关。

简介：摘要目的探讨参丹散结胶囊对炎症相关性结直肠癌(CAC)小鼠血管生成的作用及其机制。方法采用氧化偶氮甲烷和葡聚糖硫酸钠构建小鼠CAC模型。正常组、模型组、参丹散结胶囊组、MK-2206组、参丹散结胶囊+IGF-1组小鼠各10只，采用免疫组化法检测各组小鼠结肠组织中的微血管密度(MVD)，采用定量逆转录聚合酶链反应检测结肠组织中碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血管生成素2(Ang2)mRNA的表达，Western blot检测结肠组织中Akt、p-Akt、血管内皮生长因子A(VEGFA)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)蛋白的表达。结果模型组、参丹散结胶囊组、MK-2206组、参丹散结胶囊+IGF-1组小鼠结肠癌组织的MVD计数分别为(63.3±3.3)个、(36.6±2.3)个、(36.6±2.2)个和(50.3±2.5)个，均高于正常组[(2.0±0.1)个，均P<0.05]，参丹散结胶囊组、MK-2206组和参丹散结胶囊+IGF-1组均低于模型组(均P<0.05)，参丹散结胶囊+IGF-1组高于参丹散结胶囊组(P<0.05)。模型组、参丹散结胶囊组、MK-2206组和参丹散结胶囊+IGF-1组小鼠结肠癌组织中bFGF的mRNA相对表达量分别为4.55±0.31、2.46±0.37、2.49±0.33和3.34±0.21，Ang2的mRNA相对表达量分别为5.78±0.19、2.21±0.14、2.26±0.17和3.67±0.32，均高于正常组(1.01±0.05和0.99±0.07，均P<0.05)，参丹散结胶囊组、MK-2206组和参丹散结胶囊+IGF-1组均低于模型组(均P<0.05)，参丹散结胶囊+IGF-1组高于参丹散结胶囊组(均P<0.05)。模型组结肠癌组织中p-Akt/Akt、VEGFA和HIF-1α的相对表达量分别为4.75±0.18、4.64±0.22和4.84±0.12，均高于正常组[分别为1.01±0.07、0.95±0.08和0.98±0.05，均P<0.05]；参丹散结胶囊组结肠癌组织中p-Akt/Akt、VEGFA和HIF-1α的相对表达量分别为2.24±0.22、3.15±0.26和2.07±0.18，均低于模型组(均P<0.05)，与MK-2206组比较，差异均无统计意义(均P>0.05)；参丹散结胶囊+IGF-1组结肠癌组织中p-Akt/Akt、VEGFA和HIF-1α的相对表达量分别为3.37±0.15、4.02±0.11、3.52±0.24，均高于参丹散结胶囊组(均P<0.05)。结论参丹散结胶囊可能通过抑制Akt/HIF-1α/VEGFA信号通路，使促微血管生长因子bFGF和Ang2表达降低，从而抑制CAC的血管生成。

简介：摘要目的探讨参丹散结胶囊对炎症相关性结直肠癌(CAC)小鼠血管生成的作用及其机制。方法采用氧化偶氮甲烷和葡聚糖硫酸钠构建小鼠CAC模型。正常组、模型组、参丹散结胶囊组、MK-2206组、参丹散结胶囊+IGF-1组小鼠各10只，采用免疫组化法检测各组小鼠结肠组织中的微血管密度(MVD)，采用定量逆转录聚合酶链反应检测结肠组织中碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血管生成素2(Ang2)mRNA的表达，Western blot检测结肠组织中Akt、p-Akt、血管内皮生长因子A(VEGFA)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)蛋白的表达。结果模型组、参丹散结胶囊组、MK-2206组、参丹散结胶囊+IGF-1组小鼠结肠癌组织的MVD计数分别为(63.3±3.3)个、(36.6±2.3)个、(36.6±2.2)个和(50.3±2.5)个，均高于正常组[(2.0±0.1)个，均P<0.05]，参丹散结胶囊组、MK-2206组和参丹散结胶囊+IGF-1组均低于模型组(均P<0.05)，参丹散结胶囊+IGF-1组高于参丹散结胶囊组(P<0.05)。模型组、参丹散结胶囊组、MK-2206组和参丹散结胶囊+IGF-1组小鼠结肠癌组织中bFGF的mRNA相对表达量分别为4.55±0.31、2.46±0.37、2.49±0.33和3.34±0.21，Ang2的mRNA相对表达量分别为5.78±0.19、2.21±0.14、2.26±0.17和3.67±0.32，均高于正常组(1.01±0.05和0.99±0.07，均P<0.05)，参丹散结胶囊组、MK-2206组和参丹散结胶囊+IGF-1组均低于模型组(均P<0.05)，参丹散结胶囊+IGF-1组高于参丹散结胶囊组(均P<0.05)。模型组结肠癌组织中p-Akt/Akt、VEGFA和HIF-1α的相对表达量分别为4.75±0.18、4.64±0.22和4.84±0.12，均高于正常组[分别为1.01±0.07、0.95±0.08和0.98±0.05，均P<0.05]；参丹散结胶囊组结肠癌组织中p-Akt/Akt、VEGFA和HIF-1α的相对表达量分别为2.24±0.22、3.15±0.26和2.07±0.18，均低于模型组(均P<0.05)，与MK-2206组比较，差异均无统计意义(均P>0.05)；参丹散结胶囊+IGF-1组结肠癌组织中p-Akt/Akt、VEGFA和HIF-1α的相对表达量分别为3.37±0.15、4.02±0.11、3.52±0.24，均高于参丹散结胶囊组(均P<0.05)。结论参丹散结胶囊可能通过抑制Akt/HIF-1α/VEGFA信号通路，使促微血管生长因子bFGF和Ang2表达降低，从而抑制CAC的血管生成。

简介：摘要目的研究芳香烃受体抑制剂StemRegenin 1（SR1）对全身照射后小鼠造血系统辐射损伤的防护作用。方法采用随机化区组设计，将15只健康C57BL/6J小鼠分为3组：对照组、4 Gy照射组（简称照射组）和4 Gy照射+SR1组（简称照射给药组），每组5只。照射给药组在照射前5 d至照射后5 d连续灌胃给予SR1（50 mg/kg），4 Gy γ射线全身照射后第9天处死小鼠，取外周血和单侧股骨细胞，使用全自动血液分析仪检测外周血白细胞（WBC）、红细胞（RBC）、骨髓有核细胞（BMNC）等计数；采用粒细胞-巨噬细胞集落形成单位（CFU-GM）实验检测骨髓细胞增殖能力；使用流式细胞仪检测BMNC和造血干细胞（HSC）中的活性氧（ROS）水平、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4（NOX4）水平和外周血中免疫细胞百分比。组间两两比较采用Student t检验。结果与照射组相比，照射给药组小鼠外周血中WBC[（3.060±0.650）×109个/mL对（4.680±1.134）×109个/mL，t=2.770，P<0.05]和BMNC[（28.375±6.811）×109个/mL对（49.125±12.532）×109个/mL，t=3.231，P<0.05）]数量均明显增加；与对照组相比，照射给药组RBC数量明显减少（t=4.301，P<0.05）。与照射组相比，照射给药组CFU-GM明显升高（3.4±1.7对13.6±6.7），且差异有统计学意义（t=3.323，P<0.05）；照射给药组小鼠的BMNC和HSC中ROS水平明显降低（t=3.962、2.530，均P<0.05），同时BMNC和HSC中NOX4水平亦明显降低（t=2.310、2.848，均P<0.05）；照射给药组小鼠CD3+ T细胞百分比明显升高[（8.512±3.716）%对（16.140±1.969）%，t=4.056，P<0.05]，B220+ B细胞百分比亦明显升高[（0.608±0.267）%对（7.240±2.828）%，t=4.027，P<0.05]。结论芳香烃受体抑制剂SR1对全身照射造成的小鼠造血系统辐射损伤有一定的保护作用。

简介：无

简介：摘要目的探讨谷胱甘肽S-转移酶P1(GSTP1)对小鼠路易斯肺癌细胞放射敏感性的调控作用。方法使用shRNA干扰表达慢病毒和阴性对照病毒分别感染路易斯肺癌(LLC)细胞，并筛选出稳转株；应用RT-PCR和蛋白免疫印迹(WB)法检测LLC细胞GSTP1 mRNA和蛋白质表达水平，验证敲低效果；使用细胞增殖检测(CCK-8)法检测照射后细胞活力；使用克隆形成实验检测照射后细胞克隆形成能力；使用流式细胞术检测照射后细胞的凋亡水平。构建荷瘤小鼠并进行照射，检测照射后肿瘤体积变化；TUNEL染色检测照射后肿瘤细胞凋亡水平；免疫荧光检测照射后肿瘤内CD4+CD8+T细胞数量。结果RT-PCR和WB结果显示shRNA慢病毒干扰后，GSTP1的mRNA和蛋白表达水平均明显下降。下调GSTP1能降低照射后细胞活力及克隆形成能力，并提高照射后细胞凋亡率。GSTP1敲低组荷瘤小鼠照射后肿瘤体积明显小于对照组，而肿瘤凋亡水平高于对照组，肿瘤内浸润CD4+CD8+T细胞数量亦高于对照组。结论下调GSTP1能够显著增加LLC细胞的放射敏感性，并增加肿瘤组织中淋巴细胞的浸润。

简介：摘要目的探讨贝美前列素（BimP）对小鼠背部重构毛囊毛发生长的影响。方法自1日龄的新生C57BL/6J鼠皮肤分离培养表皮细胞和真皮细胞，用硅胶小室法在Balb/c-nu小鼠背部重构毛囊，术后将18只Balb/c-nu小鼠随机分为BimP组、米诺地尔组和对照组，每组各6只；2周后在小鼠背部的细胞移植区分别外涂0.03% BimP 100 μl、2%的米诺地尔溶液100 μl和生理盐水100 μl，每天涂药1次，连续2周；观察局部毛发生长情况；取小鼠背部移植区皮肤的新生毛发测量其长度；组织学观察新生毛囊的数目与生长周期；用实时荧光定量PCR和Western印迹法分别检测Wnt家族分泌蛋白3a（Wnt3a）、淋巴细胞增强因子（LEF1）、β-环连蛋白和Frizzled跨膜受体蛋白7（Frizzled7）mRNA和蛋白表达水平。免疫荧光检测毛囊细胞β-环连蛋白的分布与表达。结果BimP组毛干长度高于对照组［（0.57±0.07）比（0.36±0.05） cm，P<0.01］，BimP组与米诺地尔组差异无统计学意义；BimP组毛囊细胞Wnt3a （2.73±0.17比1.00±0.14，P<0.01）、LEF1（1.71±0.12比1.00±0.19，P<0.01）、β-环连蛋白（2.37±0.21比1.00±0.11，P<0.01）和Frizzled7（2.62±0.15比1.00±0.18，P<0.01） mRNA表达水平均高于对照组；Western印迹结果相同，BimP组毛囊细胞Wnt3a （1.44±0.21比1.00±0.13，P<0.05）、LEF1 （1.36±0.15比1.00±0.09，P<0.05）、β-环连蛋白 （1.60±0.13比1.00±0.16，P<0.01）和Frizzled7 （1.52±0.15比1.00±0.21，P<0.05）蛋白表达水平均高于对照组。免疫荧光染色发现β-环连蛋白在BimP组和米诺地尔组新生毛囊的毛球细胞和皮脂腺细胞强表达，而对照组几乎未见荧光染色存在。结论BimP可通过激活经典Wnt/β-环连蛋白信号通路促进小鼠重构毛囊的毛发生长。

简介：摘要目的探讨规律有氧运动对实验性结肠炎小鼠氧化应激、炎症反应及细胞凋亡的影响。方法采用随机数字表法将45只C57BL/6小鼠分为对照组、模型组及运动组，每组15只。模型组及运动组小鼠均自由饮用3.5%葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液进行结肠炎造模。实验进行7 d后对照组及模型组小鼠均置于鼠笼内安静饲养，运动组小鼠则给予8周自主跑轮运动。于末次实验结束48 h后处死各组小鼠，取结肠标本行HE染色并观察结肠组织病理学变化；将余下结肠标本匀浆后测定氧化应激、炎症反应及细胞凋亡情况。结果与对照组比较，模型组小鼠结肠组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、前列腺素E2(PGE2)、活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)含量、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和Caspase-3活性以及环氧合酶2(COX2)、核因子-κB(NF-κB)p65、凋亡诱导因子(AIF)、细胞色素c(Cyt C)、Bax蛋白表达量均显著增加(P<0.05)，IL-10、谷胱甘肽(GSH)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化酶(GPx)活性以及Bcl-2蛋白表达量均明显降低(P<0.05)；与模型组比较，运动组TNF-α、IL-1β、IL-6、PGE2、ROS、MDA和NO含量、iNOS和Caspase-3活性以及COX2、NF-κB p65、AIF、Cyt C、Bax蛋白表达量均显著降低(P<0.05)，IL-10、GSH含量、SOD和GPx活性以及Bcl-2蛋白表达量均显著升高(P<0.05)。结论规律有氧运动能通过改善氧化应激、炎症反应及细胞凋亡等途径对实验性结肠炎小鼠发挥保护作用。

简介：摘要目的观察促肾上腺皮质激素(ACTH)对小鼠骨髓间充质干细胞(D1细胞系)成骨分化的影响。方法将D1细胞分成6组，对照组、对照组+低浓度ACTH组、对照组+高浓度ACTH组、成骨组、成骨组+低浓度ACTH组、成骨组+高浓度ACTH组；各组孵育细胞6 d后通过茜素红染色法评价成骨分化；分别孵育细胞1、3、6 d后，采用聚合酶链反应(PCR)技术定量分析核心结合蛋白因子-2(Runx2)、碱性磷酸酶(ALP)、黑皮质素受体-3(MC3R)和血管内皮生长因子a(VEGFa)成骨相关基因的表达水平；孵育细胞3、6 d后，采取蛋白质印迹法(Western blot)技术分析成骨分化相关基因Runx2和骨涎蛋白(BSP)表达水平。两样本均数比较采用独立样本t检验，多样本均数比较采用单因素方差分析。结果RT-PCR检测结果发现，第3天成骨组+高浓度ACTH(1×10-8 mol/L)组黑色素3蛋白受体(MC3R)表达(1.33±0.01)低于成骨组(1.82±0.11)，差异有统计学意义(t＝5.039，P<0.05)；第6天成骨组+高浓度ACTH(1×10-8 mol/L)组Runx2表达(0.72±0.01)低于成骨组(1.16±0.08)，差异有统计学意义(t＝5.542，P<0.05)；成骨组+高浓度ACTH(1×10-8 mol/L)组血管内皮生长因子(VEGFa)表达(0.58±0.02)显著低于成骨组(2.23±0.06)，差异有统计学意义(t＝7.238，P<0.05)；成骨组+高浓度ACTH(1×10-8 mol/L)组茜素红染色吸光度(A)值(0.270±0.012)显著低于成骨组(0.361±0.015)，差异有统计学意义(t＝4.435，P<0.05)；在蛋白水平，Runx2、BSP基因蛋白表达都有下降的趋势；成骨组+低浓度ACTH(1×10-9 mol/L)组茜素红染色A值(0.363±0.013)同成骨组(0.360±0.016)比较差异无统计学意义(t＝1.345，P>0.05)，且对成骨基因和蛋白表达作用差异无统计学意义。结论高浓度ACTH(1×10-8 mol/L)对小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化有抑制作用，而且在基因和蛋白水平对成骨特异性转录因子Runx2有明显的抑制作用。

简介：摘要目的评价脊髓哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/核糖体蛋白S6激酶1(S6K1)/Gli1信号通路在小鼠慢性吗啡耐受中的作用。方法健康雄性昆明小鼠，8～10周龄，体重23～25 g。实验Ⅰ　取小鼠50只，采用随机数字表法分为2组：生理盐水组(S组，n＝10)和吗啡组(M组，n＝40)。M组和S组分别皮下注射吗啡和生理盐水10 mg/kg，2次/d，连续7 d。于给药前1 d和每天最后1次给药后30 min测定热痛阈，计算最大镇痛效应百分比(MPE)。M组于给药后1、3、5和7 d热痛阈测定结束后、S组于最后1次热痛阈测定结束后随机处死10只小鼠，取脊髓组织。实验Ⅱ　取小鼠40只，采用随机数字表法分为4组(n＝10)：KU-0063794+吗啡组(KU+M组)、二甲基亚砜(DMSO)+吗啡组(DM+M组)、吗啡+KU-0063794组(M+KU组)和吗啡+二甲基亚砜组(M+DM组)。4组皮下注射吗啡10 mg/kg，2次/d，连续7 d。于第1～3天每天吗啡注射前30 min时，KU+M组腹腔注射mTOR特异性抑制剂KU-0063794 200 μl(1 μg/μl)，DM+M组腹腔注射10%DMSO 200 μl，2次/d；于第5～7天每天吗啡注射前30 min时，M+KU组腹腔注射KU-0063794 200 μl (1 μg/μl)，M+DM组腹腔注射10%DMSO 200 μl，2次/d。于吗啡注射前1 d和每天最后1次给药后30 min测定热痛阈，计算MPE。最后1次热痛阈测定结束后处死大鼠，取脊髓组织。采用Western blot法检测脊髓mTOR、p-mTOR、S6K1、p-S6K1和Gli1的表达水平。结果实验Ⅰ　与S组比较，M组给药后各时点MPE升高，给药后第3、5和7天时脊髓p-mTOR、p-S6K1和Gli1表达下调(P<0.05)，mTOR和S6K1表达差异无统计学意义(P>0.05)。实验Ⅱ　与DM+M组比较，KU+M组注射吗啡后第3～7天时MPE降低，脊髓p-mTOR、p-S6K1和Gli1表达下调(P<0.05)，mTOR和S6K1表达差异无统计学意义(P>0.05)；与M+DM组比较，M+KU组注射吗啡后第6和7天时MPE升高，脊髓p-mTOR、p-S6K1和Gli1表达下调(P<0.05)，mTOR和S6K1表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论脊髓mTOR/S6K1/Gli1信号通路参与了小鼠慢性吗啡耐受的形成和维持。

简介：摘要目的评价三叉神经节10-11易位蛋白3(TET3)在小鼠颌面部炎性痛中的作用。方法SPF级健康雄性C57BL/6J小鼠40只，8～10周龄，体重19～23 g，采用随机数字表法分为5组(n＝8)：对照组(C组)、炎性痛组(IP组)、对照+TET3-siRNA组(C+siTET3组)、炎性痛+TET3-siRNA组(IP+siTET3)和炎性痛+阴性对照Scrambled-siRNA组(IP+siNC)。分别于小鼠颞下颌骨关节内注射生理盐水或完全弗氏佐剂(CFA)10 μl，于注射后1、4、8和12 d(T1-4)时测定机械痛阈(MWT)；C+siTET3组、IP+si-TET3组和IP+siNC组于注射生理盐水或CFA前，三叉神经节内分别注射0.75 μl siTET3或siNC，于T2时处死小鼠取三叉神经节，采用Western blot法检测TET3的表达。结果与C组比较，IP组T1-3时MWT降低，三叉神经节TET3表达上调(P<0.05或0.01)；与IP组和IP+siNC组比较，IP+siTET3组T2，3时MWT升高，三叉神经节TET3表达下调(P<0.05或0.01)。结论三叉神经节TET3参与了小鼠颌面部炎性痛的形成。

简介：摘要目的研究小鼠巨细胞病毒(murine cytomegalovirus，MCMV)感染C57BL/6小鼠诱导自然杀伤(natural killer，NK)细胞免疫应答的最佳剂量和最佳时间。方法分别根据剂量和时间效应进行分组，剂量效应：无特定病原体( specific pathogen free，SPF)级8周龄C57BL/6雌鼠15只，根据MCMV滴度分为四组，未感染的0个蚀斑形成单位(plaque forming unit，PFU)组(3只)、2.5×104PFU组(4只)、5.0×104PFU组(4只)和10.0×104PFU组(4只)，随后常规饲养7天；时间效应：将8周龄C57BL/6雌鼠14只随机分为四组，分别为0天组(4只)、3天组(4只)、7天组(4只)、14天组(2只)，建模0天腹腔注射5.0×104PFU的MCMV感染各组小鼠。在感染后对应天数处死各组小鼠，取小鼠脾脏制成单细胞悬液，并用流式细胞术分析各种组NK细胞比例、Ly49H及颗粒酶B(granzyme B，GZMB)、NK细胞溶酶体相关膜蛋白-1(CD107a)和γ-干扰素(interferon-γ，IFN-γ)的表达。结果MCMV感染7天后，与0 PFU组相比，2.5×104PFU组、5.0×104PFU组和10.0×104PFU组脾脏NK细胞占淋巴细胞的比例明显下降{(1.90±0.32)%比[(0.91±0.14)%，(0.62±0.16)%，(0.85±0.26)%]，F＝21.271，P<0.05}，CD27＋CD11b＋NK细胞比例显著下降{(22.40±4.55)%比[(13.20±1.29)%，(10.78±1.21)%，(11.38±1.76)%]，F＝17.272，P<0.05}，CD11b＋NK细胞比例显著增加{(59.87±5.33)%比[(71.08±1.82)%，(74.25±1.95)%，(70.90±2.49)%]，F＝14.641，P<0.05)}，CD43＋KLRG1＋NK细胞占NK细胞的比例增加{(39.40±5.73)%比[(77.00±0.67)%，( 81.23±2.21)%，( 76.63±7.36)%]，F＝55.282，P<0.05)}，Ly49H＋NK细胞亚群数量显著增加{(42.07±1.21)%比[(63.50±1.30)%，(63.58±3.71)%，(61.68±4.84)%]，F＝32.273，P<0.05)}，组间差异具有统计学意义。在NK细胞功能方面，MCMV感染7天后，与0 PFU组相比，2.5×104PFU组、5.0×104PFU组和10.0×104PFU GZMB的表达显著增加{(287.00±30.79)%比[(384.25±63.91)%，(529.75±66.08)%，(466.50±83.38)%]，F＝8.730，P<0.05}，IFN-γ分泌减少{(36.00±5.33)%比[(4.88±3.35)%，(3.03±1.56)%，(3.61±2.18)%]，F＝87.663，P<0.05}。时间效应的比较结果显示，MCMV感染3天后，NK细胞CD107a和颗粒酶B表达与0天相比显著升高[(22.98±4.58)%比(6.32±0.75)%，(5969.25±1159.86)%比(788.50±88.17)%，F值分别为41.072和67.448，P值均<0.05]，差异具有统计学意义。结论本研究表明，MCMV感染C57BL/6小鼠模型可选择的最佳感染剂量为5×104PFU，最佳建模时间为感染后3天。

简介：摘要目的研究嵌合腺病毒35型载体和痘苗病毒载体SIVenvT疫苗通过不同策略联合免疫小鼠所诱导的细胞和体液免疫应答。方法通过PCR和Western blot方法对表达SIV mac239株SIVenvT基因的重组嵌合腺病毒35型(rAd5F35-SIVenvT)和重组痘苗病毒安卡拉株(rMVA-SIVenvT)进行体外鉴定。采用两种不同的策略联合免疫BALB/c小鼠，即同源载体免疫和异源载体免疫。通过ELISPOT方法检测小鼠脾脏中分泌SIV Env特异性IFN-γ的淋巴细胞数量，ELISA方法检测血清SIV gp120抗体滴度，比较两种免疫策略诱导小鼠产生细胞和体液免疫应答的差异。结果rAd5F35-SIVenvT和rMVA-SIVenvT均能在HEK293细胞中有效表达SIVenvT蛋白。初次免疫后第4周，两组SIV Env特异性细胞免疫应答和SIV gp120抗体均达到峰值，随后呈波动下降趋势。异源免疫组诱导小鼠的应答水平高于同源组，其中第4周和第16周异源组细胞免疫应答强度显著高于同源组，第4周异源组SIV gp120抗体滴度显著高于同源组。结论rAd5F35-SIVenvT和rMVA-SIVenvT两种载体疫苗联合免疫策略能诱导小鼠产生较强细胞和体液免疫应答。

简介：摘要目的评价对乙酰氨基酚对小鼠脓毒症相关性脑病的影响及其与铁死亡的关系。方法清洁级健康成年雄性C57BL/6J小鼠160只，6周龄，体重22～24 g，采用随机数字表法分为4组(n＝40)：假手术组(Sham组)、假手术+对乙酰氨基酚组(Sham+APAP组)、脓毒症相关性脑病组(SAE组)和脓毒症相关性脑病+对乙酰氨基酚组(SAE+APAP组)。采用盲肠结扎穿孔法制备小鼠脓毒症相关性脑病模型，Sham+APAP组和SAE+APAP组分别于模型制备前1 h时腹腔注射对乙酰氨基酚100 mg/kg。记录术后7 d生存情况；于术后24 h时观察小鼠脑组织海马CA1区神经元病理学结果，于造模后24 h时透射电镜下观察超微结构，采用比色法测定活性氧(ROS)、MDA和还原型谷胱甘肽(GSH)含量，Western blot法检测谷胱甘肽过氧化物酶(GPX4)、胱氨酸/谷氨酸反向转运体(xCT)和4-羟基-2-壬烯醛(4-HNE)的表达。结果与Sham组比较，SAE组和SAE+APAP组术后7 d生存率降低，海马ROS和MDA含量升高，GSH含量降低，GPX4和xCT表达下调，SAE组4-HNE表达上调(P<0.05)，Sham+APAP组上述指标差异无统计学意义(P>0.05)；与SAE组比较，SAE+APAP组术后7 d生存率升高，海马ROS和MDA含量降低，GSH含量升高，GPX4和xCT表达上调，4-HNE表达下调(P<0.05)。SAE+APAP组海马病理学和超微结构损伤较SAE组减轻。结论对乙酰氨基酚可有效减轻小鼠脓毒症相关性脑病，机制与其抑制铁死亡有关。

简介：摘要目的探讨不同浓度2，4-二硝基氯苯（DNCB）诱导的特应性皮炎（AD）样小鼠模型特点及皮肤菌群改变。方法将30只雄性、无特定病原级BALB/c小鼠按随机数字表法等分为3组：阴性对照组小鼠背部涂抹200 μl丙酮和橄榄油（体积比为3∶1）每周2次，连续6周；高、低浓度DNCB组小鼠于第1周的第1、3天均涂抹1% DNCB 200 μl，第2周起分别涂抹0.5%、0.1% DNCB 200 μl，每周2次，连续5周。末次给药24 h后评估皮损严重程度，测量经表皮水分丢失和角质层含水量。实验结束后处死小鼠，切取背部皮肤行组织病理学检查。每组取3只小鼠背部全层皮肤组织样本，通过Illumina Miseq PE300型高通量测序仪检测小鼠背部皮肤菌群16S rRNA基因V3-V4可变区，并分析皮肤菌群的组成结构及不同菌属相对丰度变化。采用单因素方差分析比较3组间各指标的差异，Games-Howell法进行两两多重比较。结果高、低浓度DNCB组小鼠皮损严重程度评分分别为（9.83 ± 2.45）分、（2.71 ± 0.56）分，均显著高于阴性对照组[（0.51 ± 0.12）分]，t值分别为-7.19、-2.85，均P < 0.05。高、低浓度DNCB组经表皮水分丢失值均显著高于阴性对照组（t值分别为-7.72，-2.68，均P < 0.05），而角质层含水量显著低于阴性对照组（t值分别为6.77、5.99，均P < 0.05）；高浓度DNCB组经表皮水分丢失值显著高于低浓度DNCB组（t=2.76，P < 0.05），而高、低浓度DNCB组间角质层含水量差异无统计学意义（P > 0.05）。3组间棒状杆菌属相对丰度差异有统计学意义（F=249.85，P < 0.001），高浓度DNCB组棒状杆菌属丰度显著升高。3组小鼠皮肤样本observed species和Chao1指数差异均无统计学意义（均P > 0.05），而高浓度DNCB组Shannon指数显著低于阴性对照组和低浓度DNCB组（t值分别为6.96、-6.37，均P < 0.05）。结论DNCB可诱导小鼠皮肤形成AD样皮炎，其皮损严重程度、屏障功能受损程度与DNCB浓度相关；高浓度DNCB组小鼠皮肤菌群物种多样性明显下降，高浓度DNCB造模对研究AD的微生物学变化更具优势。

简介：摘要目的探讨芍药苷激活自噬对PD小鼠运动能力及多巴胺能神经元的影响。方法将40只C57BL/6小鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、芍药苷组和芍药苷+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组，每组10只。后3组小鼠连续7 d腹腔注射1-甲基-4苯基-1，2，3，6-四氢吡啶(MPTP)[30 mg/(kg·d)]制备成亚急性PD模型，期间芍药苷组和芍药苷+3-MA组小鼠分别腹腔注射芍药苷[30 mg/(kg·d)]和芍药苷[30 mg/(kg·d)]+3-MA[2 mg/(kg·d)]。第8天时采用爬杆实验和悬挂实验评估各组小鼠的运动能力，之后取中脑黑质，采用TUNEL染色检测神经细胞凋亡情况，采用免疫组化染色检测酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞数及α-突触核蛋白(α-Syn)、溶酶体相关膜蛋白2A(LAMP2A)、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)表达，采用Western blotting实验检测LAMP2A、LC3-Ⅱ蛋白水平。结果与模型组比较，芍药苷组小鼠的爬杆时间明显缩短，悬挂实验评分明显升高，凋亡神经细胞数量明显减少，TH阳性细胞数及LAMP2A、LC3-Ⅱ表达明显升高，α-Syn表达明显减少，LAMP2A、LC3-Ⅱ蛋白水平明显升高，差异均有统计学意义(P<0.05)。与芍药苷组比较，芍药苷+3-MA组小鼠的爬杆时间明显延长，悬挂实验评分明显降低，凋亡神经细胞数量明显增多，TH阳性细胞数及LAMP2A、LC3-Ⅱ表达明显减少，α-Syn表达明显升高，LAMP2A、LC3-Ⅱ蛋白水平明显降低，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论芍药苷通过诱导自噬清除α-Syn，保护多巴胺能神经元，从而改善PD小鼠的运动障碍。