ＲＰ－ＨＰＬＣ法测定复方金银花颗粒中绿原酸的含量

ＲＰ－ＨＰＬＣ法测定复方金银花颗粒中绿原酸的含量

付瑶１李超英２（通讯作者）赵娜１王迪涵１李雪１

付瑶１李超英２（通讯作者）赵娜１王迪涵１李雪１（１．东北师范大学人文学院吉林长春１３０１１７）（２．长春中医药大学吉林长春１３０１１７）

【中图分类号】Ｒ２８６．０【文献标识码】Ａ【文章编号】１５５０－１８６８（２０１４）１０

【摘要】目的：建立高效液相色谱法测定复方金银花颗粒中绿原酸含量的方法。方法：采用ＡｇｉｌｅｎｔＣ１８（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ）色谱柱，甲醇－水－冰醋酸（２０：８０：１）为流动相，流速为１．０ｍＬ／ｍｉｎ，检测波长为３２４ｎｍ。结果：绿原酸在７７．２８μｇ～７７２．８μｇ的范围内呈良好的相关性，相关系数为０．９９９８，平均回收率分别为９９．１０％，ＲＳＤ为０．３９％。结论：本方法操作准确、简便、快速，可有效用于复方金银花颗粒的质量控制。

【关键词】ＲＰ－ＨＰＬＣ法复方金银花颗粒绿原酸含量测定复方金银花颗粒是由金银花、连翘和黄芩３味中药制成的复方制剂，具有清热解毒、凉血消肿之功效，主要用于风热感冒、喉痹、乳蛾、目痛、牙痛及痈肿疮疖等症的治疗［１］。本品已收载于５卫生部药品标准６中药成方制剂第十册，其质量标准只有性状、鉴别、常规检查及含量测定，含量测定项分别对黄芩苷和连翘苷进行考察并将其作为评价指标，通过大量文献及相关资料表明金银花中的绿原酸也是有效成分之一，具有广泛的抗菌作用［２－３］。所以本研究将对复方金银花中绿原酸的含量进行测定，以确保本品的内在质量［４］。

１材料与方法１．１实验材料１．１．１仪器和设备高效液相色谱仪：美国安捷伦（１）１２００紫外检测器；美国安捷伦（２）１２００紫外检测器；ＭｅｌｔｔｅｒＡＥ２４０双量程电子天平（梅特勒－托利多仪器有限公司），ＡＢ２０４－Ｅ电子天平（梅特勒－托利多仪器有限公司）；紫外分光光度计ＵＶ－２４０１（日本岛津）。

１．１．２试剂与试药绿原酸对照品（批号：１１０７５３－２００４１３规格：约２０ｍｇ，供含量测定用），购自中国食品药品检定研究院；甲醇为色谱纯，乙酸为分析纯，水为重蒸水。

１．２实验方法１．２．１系统适用性试验及色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇－水－冰醋酸（２０：８０：１）为流动相；检测波长为３２４ｎｍ。理论板数按绿原酸峰计算应不低于６０００。

１．２．２对照品溶液的制备称取绿原酸对照品约１０ｍｇ，精密称定为９．６６ｍｇ，置１００ｍｌ棕色量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取１０ｍｌ，置２５ｍｌ量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得（每１ｍｌ含绿原酸３８．６４μｇ）。

１．２．３供试品溶液的制备精密量取本品２ｇ，置５０ｍｌ棕色量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。

１．２．４检测波长的选择取绿原酸对照品溶液适量，于２００～４００ｎｍ波长下测定光谱图。

２实验结果２．１检测波长的选择绿原酸对照品在３２４ｎｍ波长处有最大吸收峰，同时参考中国药典２０１０年版一部双黄连口服液质量标准中金银花的含量测定检测波长为３２４ｎｍ，故检测波长选定为３２４ｎｍ。

２．２线性关系范围精密吸取对照品溶液２、５、１０、１５、１８、２０μｌ，按上述色谱条件分别注入液相色谱仪，测定峰面积，以进样量为横坐标（Ｘ），以峰面积为纵坐标（Ｙ），绘制标准曲线方程为Ｙ＝１２０．４５ｘ－１０．６２（ｒ＝０．９９９８），表明绿原酸在７７．２８μｇ～７７２．８μｇ范围内呈良好线性关系。

２．３专属性试验取按处方比例缺金银花的阴性对照样品，按含量测定项下方法测定ＨＰＬＣ色谱图，同法测定绿原酸对照品、供试品及溶剂的ＨＰＬＣ色谱图。结果阴性对照样品的色谱图中，在与绿原酸吸收峰保留时间的相应位置上，无吸收峰出现，表明阴性对照无干扰，此方法专属性强。结果见图１、２、３、４。

图１绿原酸对照品溶液图２供试品溶液图３阴性对照溶液图４溶剂２．４稳定性试验取供试品溶液，分别在０、２、４、８、１２小时进样，记录峰面积，以供试品溶液中绿原酸的吸收峰面积的变化，考察其稳定性。结果显示样品溶液峰面积ＲＳＤ为０．３４％，表明样品在１２小时内稳定性良好。

２．５中间精密度试验取本品粉末约２ｇ，精密称定，按１．２．３项下制备供试品溶液，由不同人员、不同时间、使用不同高效液相色谱仪，按含量测定项下方法操作，测定绿原酸的含量。结果绿原酸峰面积ＲＳＤ为１．０８％，表明此方法精密度良好。

２．６重复性试验取本品粉末约２ｇ，共６份，精密称定，按１．２．３项下制备供试品溶液，进行含量测定。结果绿原酸峰面积ＲＳＤ为０．７２％，表明方法有良好的重现性。

２．７回收率试验取已知含量样品约１ｇ，精密称定，共６份，分别置于６只５０ｍｌ棕色量瓶中，精密加入绿原酸对照品溶液（浓度约为０．１００５ｍｇ／ｍｌ）１０ｍｌ，按１．２．３项下制备供试品溶液，进行含量测定，计算６次平均回收率为９９．１０％、ＲＳＤ为０．３９％。

表明此方法准确、可行。结果见表１。

３讨论３．１金银花中含绿原酸和异绿原酸，均为金银花中主要的抑菌有效化学成分，其中的绿原酸经常为衡量金银花药材和中成药制剂的内在评价指标。故绿原酸含量越高，说明其品质越好。在方法学考察过程中发现在室温条件下绿原酸１２小时内稳定性良好，若继续将时间延长，发现同一样品溶液中的绿原酸含量有所下降，有可能部分绿原酸转化成异绿原酸；而在冷藏条件下绿原酸２４小时稳定，所以测定绿原酸含量时要保证样品溶液适宜的保存或者即时测定，以保证含量测定结果可靠准确［５－７］。

３．２本研究为了更好的控制复方金银花颗粒的质量，对其绿原酸含量测定方法进行考察，并通过方法学验证了其可靠性。本品中绿原酸含量测定方法的建立，进一步完善了复方金银花颗粒的质量标准［８－１０］。

参考文献［１］国家药典委员会．中华人民共和国药典２０１０年版（一部）［Ｓ］．北京：中国医—３０７—药科技出版社，２０１０：６１４．［２］周凤琴，冉蓉，李佳，张永清，顾正位．山东１０个不同种质金银花中绿原酸含量及其品质评价［Ｊ］．山东中医杂志，２００７，２６（７）：４７８－４８０．［３］刘明斌，童巧珍，谢振宇．ＨＰＬＣ法测定金银花中绿原酸的含量［Ｊ］．医学临床研究，２００６，２３（５）：７５９－７６０．［４］廖艺，韦宁．高效液相色谱法测定复方金银花颗粒中绿原酸和黄芩苷［Ｊ］．中国药师，２００８，１１（８）：９３５－９３７．［５］陈钢，侯世祥，何宁，朱雅宁，曹伦．金银花提取物中绿原酸的稳定性研究［Ｊ］．中国中药杂志，２００３，２８（３）：２２３－２２６．［６］关炳峰，谭军，周志娣．金银花提取物的抗氧化作用与其绿原酸含量的相关性研究［Ｊ］．食品工业科技，２００７，２８（１０）：１２７－１２９．［７］张泽生，乌兰．金银花中绿原酸的体外抑菌和抗氧化性的研究［Ｊ］．天津科技大学学报，２００５，２０（２）：５－８．［８］翟少钦，曹国文，李成君．复方黄芪金银花颗粒的质量标准研究［Ｊ］．中国兽药杂志，２０１１，４５（６）：１６－１９．２０１１．［９］范全民，周慧娟，孙冬云．高效液相色谱法测定小儿清热宁颗粒中绿原酸和黄芩苷的含量［Ｊ］．中国药房，２００６，１７（１５）：１１７－１１８．［１０］黄新宏，安睿，等．双黄连片的多组分质量分析［Ｊ］．药学学报，２００１，３６（１２）：９１７．