食品中沙门氏菌检测方法比对

食品中沙门氏菌检测方法比对

王腾腾

山东中质华检测试检验有限公司  山东济宁  272000

摘要：本实验采用国标、VIDAS和快速测试片三种检测方法，对ACAS组织的冻干粉（模拟食品）中沙门氏菌的测定能力验证样品进行检测，证明VIDAS和快速测试片具有检测灵敏度高、特异性强、时耗短和效率高等特点。

关键词：GB 4789.4-2016； VIDAS；  快速测试片；沙门氏菌

沙门氏菌是一群寄生于人或动物肠道内的革兰氏阴性肠道杆菌，是一种重要的人畜共患病原菌。主要通过动物的消化道传染致病，可引起伤寒、食物中毒、急性肠胃炎等多种疾患，由于沙门氏菌在自然界广泛存在，且对人类健康具有很大的威胁，故世界各国普遍规定食品中不得检出沙门氏菌。我实验室在2022年ACAS组织的“冻干粉（模拟食品）中沙门氏菌的测定的能力验证”中应用 VIDAS、快速测试片和GB 4789.4-2016三种不同的检测方法检出了四例沙门氏菌，现报告如下：

１．材料和方法

1.1 供试样品

ACAS提供的四份能力验证样品、一份自制阳性质控样品和一份自制阴性质控样品。

1.2 仪器

VIDAS：购于法国生物梅里埃公司。

生化培养箱：购于上海一恒科技公司。

实验菌株：沙门氏菌标准菌株和粪肠球菌标准菌株，由CICC菌种保藏中心提供。

1.3 试剂

VIDAS沙门氏菌试剂盒：购于法国梅里埃公司。

沙门氏菌生化鉴定试剂盒：购于北京陆桥技术股份有限公司。

沙门氏菌诊断血清：购于兰州生物制品研究所。

1.4 培养基

沙门氏菌增菌培养基:BPW、SC、TTB、RVS和M肉汤。

沙门氏菌选择性培养基：BS、XLD和沙门氏菌显色培养基。

沙门氏菌初步鉴别培养基：三糖铁琼脂（TSI）。

沙门氏菌快速测试片，以上培养基均购于北京陆桥技术股份有限公司

1.5 检测方法

1.5.1 VIDAS法：按VIDAS工业试剂培训手册执行

1.5.2国标法：GB 4789.4-2016

1.5.3快速测试片法：快速测试片使用说明

1.6 检测步骤

1.6.1 GB 4789.4-2016检测步骤

1.6.1.1无菌操作吸取25mL样品于225mL灭菌BPW中，拍打均质1min，36℃培养18h。

1.6.1.2轻轻摇动培养过的样品混合物，取1mL，转种于10mL TTB内，42℃培养24h。同时，另取1mL，转种于10mL SC内，36℃培养24h。

1.6.1.3用3mm接种环分别取TTB和SC增菌液1环，划线接种一块BS琼脂平板、一块XLD琼脂平板和一块显色培养基平板，BS琼脂平板36℃培养48h,XLD平板和显色平板36℃培养24h。

1.6.1.4挑取典型和可疑菌落进行生化鉴定。

1.6.1.5最后进行血清学鉴定。

1.6.2 VIDAS检测步骤

1.6.2.1无菌操作吸取25mL样品于225mL灭菌BPW中，拍打均质1min，37℃培养20h。

1.6.2.2吸取上述菌液0.1mL接种到10mL RVS中，41.5℃培养8h。

1.6.2.3吸取RVS菌液1mL接种到10mL M肉汤中，41℃培养20h。

1.6.2.4取1mL M肉汤于无菌试管中，100℃ 水浴灭活15min。

1.6.2.5取灭活后的增菌液500μL用于VIDAS检测，45min后完成检测。

1.6.3快速测试片法检测步骤

1.6.3.1无菌操作吸取25mL样品于225mL灭菌生理盐水中，拍打均质1min。

1.6.3.2将测试片置于平坦超净台上，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1mL上述样品匀液慢慢均匀滴加到测试片上，将上层膜缓慢盖下，静置5min使培养基凝固，轻轻按压。

1.6.3.3将测试片叠放一起放入无菌袋，堆叠片数不能超过六片，36℃培养24h。

2. 结果与讨论

2.1 结果

三种方法检测结果如下：

GB 4789.4-2016 检测结果为：四份样品和阳性质控样品：BS上有黑色带金属光泽菌落，XLD上有黑色菌落，显色平板上有紫红色菌落；TSI斜面产碱、底层产酸、产H2S、产气，尿素酶、靛基质、KCN和ONPG试验均为阴性，赖氨酸脱羧酶试验阳性，山梨醇试验阳性，甘露醇试验阳性。生理盐水凝集试验为无自凝性，A-F多价“O”血清玻片凝集试验阳性，多价“H”血清玻片凝集试验阳性，最后判定为全部检出沙门氏菌；阴性质控样品：三种平板上均无菌落生长，判定为未检出沙门氏菌。

VIDAS法结果：四份样品和阳性质控样品为Positive，阴性质控样品为Negative。

快速测试片结果：四份样品和阳性质控样品测试片上均有紫红色菌落生长，判定为检出沙门氏菌；阴性质控样品测试片上无任何菌落生长，判定为未检出沙门氏菌。

三种方法对比如下：

准确性：GB 4789.4-2016、快速测试片和VIDAS检测结果完全一致，但 VIDAS的灵敏度更高,特异性更强。

时耗：国标法耗费时间为120h；VIDAS只需经历增菌、样品处理（100℃水浴15min）、上机，耗费时间为49h；快速测试片耗费时间为24h。

检测步骤：国标法经前增菌、选择性增菌、选择性分离、生化鉴定、血清学鉴定五步，步骤复杂；VIDAS法经增菌、样品处理、上机三步，步骤简单；快速测试片只经一步培养，操作快速、简便。

2.2 讨论

目前，国标法主要是依靠生化反应和血清学反应对沙门氏菌进行检验鉴定，检测周期长、生化鉴定复杂、所需试剂繁多。 VIDAS则是应用ELISA（酶联荧光免疫分析）技术，应用酶联免疫法，最后测蓝色荧光（ELFA），试验结束时，计算机自动分析结果，得出检测值，并打印出每份样品的结果报告。VIDAS为我们提供了一种快捷、方便和准确的检测方法，被检样品经增菌后无需分离纯化，灭活后可直接上机。上机后的试验可于45min内结束，最后自动打印检测结果。

3．结束语

国标法是一种传统的检测方法，在国际上被广泛认可，是沙门氏菌检验的基准方法；VIDAS操作步骤简单，时耗短，灵敏度高，特异性强；快速测试片准确、高效；在进行能力验证样品和关键性样品检测时，建议国标法、快速测试片法和VIDAS同步进行，以确保检测结果准确可靠。建议国标更新换版时将快速测试片和VIDAS写入新版标准推广使用。

参考文献:

[1]食品微生物学检验-沙门氏菌检验.GB 4789.4-2016.食品安全国家标准.

[2]VIDAS工业试剂培训手册.

[3]雷质文.食品微生物实验室质量管理手册[M]．北京：中国标准出版社，2006，114