简介：摘要目的评价重组流感病毒H7N9血凝素(hemagglutinin，HA)亚单位疫苗在动物中的免疫效果。方法利用杆状病毒系统表达分泌型的HA片段，单独或联合Al(OH)3佐剂腹腔注射免疫BALB/c小鼠后，对小鼠进行H7N9毒株的攻击。分析重组H7N9 HA(rH7HA)的免疫保护效果。结果rH7HA加Al(OH)3佐剂与rH7HA单独免疫相比，在血清中诱导了更高的IgG滴度。最高剂量(1.500 μg)rH7HA加佐剂组诱导IgG滴度达215，单独诱导IgG滴度达213。但两者之间差异无统计学意义，说明免疫小鼠的rH7HA量达到1.5 μg即能够对同源病毒的感染提供保护。结论杆状病毒系统表达的分泌型HA通过腹腔注射能够保护小鼠抵抗致死性剂量的同源病毒的感染。

简介：摘要目的构建跨膜蛋白(transmembrane protein，TMEM)240慢病毒载体，并在人神经母细胞瘤细胞中表达。方法提取人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的RNA，逆转录成cDNA并作为模板，聚合酶链反应(polymerasechain reaction，PCR)扩增TMEM240的CDS序列，与pLVX-EGFP-N1载体连接，转化、验菌送公司测序，pLVX-TMEM240-EGFP-N1质粒与慢病毒包装质粒共转染293Ta细胞，收取上清，感染SH-SY5Y，嘌呤霉素筛选，获得表达TMEM240的SH-SY5Y细胞，将感染pLVX-EGFP-N1的SH-SY5Y细胞作为对照组，感染pLVX-TMEM240-EGFP-N1的SH-SY5Y细胞为实验组。通过共聚焦显微镜、实时定量聚合酶链式反应(real-time quantitative PCR，Real-time PCR)和Western blot检测细胞中TMEM240表达。结果测序结果显示pLVX-TMEM240-EGFP-N1质粒构建成功；共聚焦显微镜下，表达TMEM240的细胞内出现点状绿色荧光；Real-time PCR及Western blot结果表明细胞内TMEM240表达。结论成功构建TMEM240慢病毒载体，慢病毒在基因和蛋白水平均引起TMEM240表达升高。

简介：摘要目的总结人类免疫缺陷病毒（HIV）相关的杆状体肌病（NM；HIV-NM）的临床、病理和肌肉磁共振成像（MRI）特点。方法报道1例23岁男性HIV感染患者，出现进行性肢体近端无力、萎缩10个月余，于2021年6月初收入首都医科大学附属北京地坛医院神经内科。肌电图检查提示肌源性损害。血清肌酸激酶为202.4 U/L，CD4+淋巴细胞计数为585×106/L。血清单克隆免疫球蛋白（M蛋白）阴性。对该患者进行双大腿肌肉MRI检查、左侧肱二头肌活组织检查及基因检测。复习文献报道的HIV-NM患者的临床、病理和MRI改变。结果该患者的双大腿肌肉MRI显示水肿改变；肌肉活组织检查显示部分肌纤维内出现杆状体结构，伴随肌纤维萎缩和再生改变；基因二代测序未发现与NM相关的基因突变。给予静脉注射免疫球蛋白联合口服泼尼松治疗，患者无力症状明显改善。已报道的17例患者（含本例）年龄为（33.7±9.1）岁，男女比例15∶2，均出现肢体近端无力。肌酸激酶正常或轻度升高；血清M蛋白阳性患者3例（3/7）；免疫抑制治疗有效。结论HIV-NM的主要临床特征为进行性肢体近端无力和肌肉萎缩，肌肉病理特点为萎缩肌纤维内出现大量杆状体，肌肉MRI可见肌肉水肿。这是首次报道的国内HIV-NM病例，该病可能为免疫性肌肉病的一个特殊亚型。

简介：摘要：为了构建新城疫病毒（NDV）HN基因与人Survivin反义核酸共表达质粒。试验以前期克隆NDV HN基因为基础，将pMD18-HN通过BamHⅠ和NotⅠ酶切后，与重组质粒pcDNA3.1-Survivin ASODN通过T4连接酶连接，然后利用多种限制性内切酶酶切鉴定。结果表明：酶切鉴定证实正确地构建了pcDNA3.1-Survivin ASODN\HN共表达质粒。该共表达质粒的构建有助于HN质粒抗肿瘤机制的深入研究。

简介：摘要2019年底的新冠疫情加速了全球各研究机构对新冠疫苗的研发。正在进行临床试验的多种技术平台的新冠疫苗中，重组病毒载体类疫苗表现出较好的免疫原性优势和效力，但同时出现的疫苗安全性和载体预存抗体等问题也不容忽视。本文将概述重组载体疫苗的设计理念和发展历程，梳理当前不同重组病毒载体新冠疫苗的临床研究进展，并阐述其面临的主要挑战和未来的发展方向，以期为重组载体类疫苗的研究提供借鉴。

简介：摘要目的利用AdEasy腺病毒载体系统构建G蛋白信号调节蛋白5(regulator of G-protein signaling 5，RGS5)重组腺病毒载体，初步探讨RGS5在神经元发育过程中的作用。方法以C57BL/6小鼠大脑皮层神经元cDNA为模板，利用PCR扩增RGS5基因，构建腺病毒重组质粒pAD-Track-RGS5。重组质粒pAD-Track-RGS5经PacI酶切线性化后与pADEasy-1骨架质粒共同转化BJ5183感受态细胞，筛选重组成功的质粒，命名为pAD-RGS5。用293A细胞包装重组腺病毒AD-RGS5，并纯化病毒，以pAD-Track包装的腺病毒(AD-EGFP)作为对照组检测重组腺病毒RNA水平RGS5表达情况。将重组腺病毒AD-RGS5感染培养的原代皮层神经元，以AD-EGFP作为对照组检测RGS5对原代皮层神经元发育的影响。结果与Neuro 2a、CATH.a和C17.2细胞系比较，大脑原代皮层神经元RGS5相对表达量明显升高，差异具有统计学意义(t值分别为7.40、7.58和7.60，P值均<0.05)。pAD-Track-RGS5转染Hela细胞中RGS5表达量较pAD-EGFP组明显升高，差异显著具有统计学意义(t＝7.58，P<0.05)，成功构建了过表达RGS5基因的腺病毒载体。与AD-EGFP腺病毒组相比，AD-RGS5腺病毒组神经元对突触囊泡内吞的能力变弱，荧光染色变弱，差异具有统计学意义(t＝5.372，P<0.05)，提示RGS5对皮层神经元的突起发育具有明显的抑制作用。结论成功构建了RGS5过表达的AD-RGS5腺病毒载体，RGS5对原代皮层神经元胞吞突触囊泡的能力有抑制作用。

简介：摘要：腺相关病毒如今被普遍应用在医学领域中的各个专业中，其作为基因治疗载体，重要性不言而喻。目前，临床中开展了大量的关于以腺相关病毒为载体的基因治疗药物研究，目前已有3款腺相关病毒载体药物上市，体现出了良好的治疗效果，被认为是目前为止最安全的病毒载体之一。但最新的临床试验结果表明，采用静脉高剂量注射腺相关病毒载体被证明存在严重的肝和神经元毒性，且与腺相关病毒的血清型无关。因此，以腺相关病毒为基因治疗载体的治疗安全性仍然需要进一步研究。腺相关病毒的特点就是具有器官靶向性，容易在靶器官上分布，但是，其也会分布在非靶器官上。腺相关病毒短暂分布在生殖系统上，会对生殖功能造成一定的影响。从目前来看，腺相关病毒不会在生殖细胞上整合，也不会影响后代。本文，通过分析腺相关病毒在生殖系统中的分布，对生殖系统功能的影响，进而提出展望。

简介：摘要基因治疗在眼部疾病中的应用逐渐从单基因遗传性疾病扩展至多基因、多因素、常见病和慢性疾病中，这一新兴治疗方式仍处于早期探索阶段，预期获益和风险仍然存在很大的不确定性。在基因治疗药物的递送过程中，病毒载体是目前最成熟和应用最广泛的载体之一，其相关免疫的发生程度将影响基因治疗近期和远期效果，甚至造成永久性的视功能严重损伤。由此，载体相关免疫反应是基因治疗中安全性和长期疗效维持的重点和挑战，因此在基因治疗的围手术期和随访中应该重视载体相关免疫炎症监测，并采取积极、恰当的处理措施，从而取得最佳视功能获益。

简介：【论文摘要】幼儿阶段是语言能力培养的关键时期，丰富的语言思维能力能够为幼儿一生的长远发展奠定坚实的基础。绘本可以通过色彩丰富的图片与精练生动的文字激发幼儿的想象力,促使幼儿更加直观形象地理解语言词汇, 并能在加强

简介：摘要：智能核算是保证电费核算准确，推动电费及时回收，实现集抄集收管理的重要手段。智能化核算采用了统一收费、集中运维的思维，是适应大营销体系的重要技术手段。在全面提高电力企业集约化管理背景下，还要探索智能核算系统的建设方法，重点解决信息化集成度不高，无法保持与客户有效沟通等问题，切实形成智能化电费控制系统，全面提高电费风险管控的能力水平。

简介：

简介：摘要：在幼儿教学中传统的教学方式不能让儿童进入学习的氛围，但语言表达与游戏活动结合后，这种游戏活动教学方法不仅能提升幼儿的学习积极性，同时能让幼儿在学习过程中感受到游戏的乐趣。基于幼儿的语言能力现状与游戏产生的积极作用，本文主要是从创设轻松的游戏活动氛围、深入游戏内容、创设情境、自制游戏活动等方面进行对中班幼儿语言表达能力的实践研究。

简介：摘要：在幼儿教学中为他们创造良好的语言环境，不断地激发幼儿对学习的积极性，在直接感受中去丰富知识和发展语言，为幼儿创设多看、多听、多说以及多练的语言环境，在潜移默化中帮助幼儿成长，获得丰富的语言词汇和练习的机会，不断地发展幼儿的语言表达能力。

简介：江苏省特种设备安全监督检验研究院南通分院 江苏南通 226500摘要：国家在长期发展中，一直将有机热载体锅炉及系统安全作为一项重要的内容。将有机热载体锅炉列入《特种设备名录》中，这表明有机热载体锅炉安全性能的重要性。通过分析造成有机热载体锅炉系统管道安全事故的主要问题，研究保证有机热载体锅炉系统管道安全运行的方法。

简介：摘要目的探讨血红素氧合酶1(HO-1)和骨形态发生蛋白-2(BMP-2)在酒精作用下对成骨细胞凋亡的影响。方法利用腺病毒载体分别构建HO-1、HO-1+BMP-2过表达成骨细胞株H-FOB1-19、HB-FOB1-19及空载载体对照组NC-FOB1-19，实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测成骨细胞中BMP-2和HO-1的表达水平；蛋白质印迹法(Western blot)检测H-FOB1-19、HB-FOB1-19 HO-1、NC-FOB1-19中HO-1及表达水平。90 mmol/L酒精分别处理上述3组成骨细胞，流式细胞术(FCM)检测酒精处理后各组成骨细胞的凋亡率。两组比较采用t检验。结果qRT-PCR表明H-FOB1-19、HB-FOB1-19组HO-1表达量高于NC-FOB1-19组(3.872±0.286、3.940±0.653比1.010±0.139，t＝10.220、6.206，P<0.05)]；HB-FOB1-19组中BMP-2的表达量明显高于NC-FOB1-19组(3.573±0.744比1.183±0.025，t＝4.678，P<0.05)；Western blot表明HO-1在HB-FOB1-19、H-FOB1-19中的表达量为NC-FOB1-19中表达量的(2.03±0.24)、(1.75±0.16)倍，BMP-2在HB-FOB1-19、H-FOB1-19中的表达量为NC-FOB1-19中表达量的(1.92±0.21)、(1.18±0.09)倍；流式细胞术检测90 mmol/L乙醇处理NC-FOB1-19、H-FOB1-19、HB-FOB1-19组成骨细胞，NC-FOB1-19组凋亡率明显高于H-FOB1-19、HB-FOB1-19组[(23.12±0.14)%比(18.17±0.19)%、(13.59±1.30)%，t＝7.073、12.670，P<0.05] ，HB-FOB1-19组的凋亡率低于H-FOB1-19组[(18.17±0.19)%比(13.585±1.295)%，t＝6.640，P<0.05]。结论成骨细胞中过表达HO-1可降低酒精作用后成骨细胞凋亡率，同时上调HO-1和BMP-2表达上述作用效果更明显。

简介：摘要目的研究两种支原体快速检测方法在病毒载体制品中的适用性和影响因素。方法采用基于PCR技术的两种支原体核酸扩增检测方法，对分别表达Ⅱ型单纯疱疹病毒抗原gD和ICP27的重组仙台病毒载体疫苗(SeV-dF/HSV-2 gD、SeV-dF/HSV-2 ICP27)收获液及纯化液进行支原体检测，探究其特异性和最低检测限，并对多个批次的收获液及纯化液进行测定。结果普通PCR法在对本制品病毒收获液检测时无明显PCR抑制现象，但对病毒纯化液检测时发生明显的PCR抑制，并且未能检出100 CFU/ml限度的口腔支原体和肺炎支原体。实时荧光定量PCR法在对本制品病毒收获液和纯化液的支原体检测中均无PCR抑制发生，且该方法对口腔支原体、肺炎支原体等多种支原体的检测灵敏度可达到10 CFU/ml，其中对口腔和肺炎支原体核酸拷贝数检测灵敏度可达到每毫升50基因组拷贝。结论实时荧光定量PCR法具有更高特异性和灵敏性，适用于作为质量内控方法快速检测病毒载体制品，及时发现支原体的污染，保证制品质量。

简介：摘要目的构建并鉴定表达新型冠状病毒核衣壳(nucleocapsid，N)蛋白的基因重组BCG。方法利用PCR技术从质粒pUC57-N(Kan+抗性)中获得新型冠状病毒N蛋白全长基因。将N基因连接到大肠埃希菌-BCG穿梭表达质粒pMV261，进行酶切、PCR及测序鉴定。重组质粒经电转化导入感受态BCG，通过蛋白印迹法鉴定目的基因在重组BCG中的表达。结果经过PCR扩增获得1 260 bp的N基因，构建的重组表达质粒pMV261-N序列完整，插入的基因片段与美国国家分子生物学信息资源中心报道的新型冠状病毒N蛋白全长基因的大小及序列一致。重组质粒能够在BCG中表达相对分子质量约为46 000的目的蛋白，蛋白印迹法显示该蛋白能被抗新型冠状病毒N蛋白单克隆抗体识别。结论构建的重组BCG能稳定表达新型冠状病毒N蛋白，为开发新型冠状病毒N基因重组BCG疫苗奠定了基础。

简介：摘要目的探讨肽/组氨酸转运蛋白溶质载体家族15成员4（SLC15A）在SLE患者的PBMCs中的表达及其临床意义。方法选取55例SLE患者，根据SLEDAI评分标准，分为活动期SLE组和稳定期SLE组，以13例健康志愿者作为健康对照组，采用蛋白质印迹法检测各组外周血PBMCs中SLC15A4的表达情况，并记录SLE患者的临床资料及实验室指标。3组间SLC15A4的表达量的比较采用单因素方差分析（one-way ANOVA），SLC15A4表达水平与临床指标的相关性分析采用Pearson相关分析。结果活动期SLE组、稳定期SLE组、健康对照组中SLC15A4的表达水平分别为（0.96±0.19）、（0.88±0.14）、（0.78±0.24），活动期SLE组中SLC15A4的表达水平高于健康对照组（F=4.47，P=0.015）；SLE患者PBMCs中SLC15A4表达水平与抗dsDNA抗体定量（r=0.29，P=0.031）、ESR（r=0.36，P=0.007）、SLEDAI评分（r=0.32，P=0.017）呈正相关，与尿蛋白定量（24 h）（r=0.45，P=0.127）和C3（r=0.20，P=0.133）无相关性。结论SLC15A4参与了SLE的发病，其在SLE患者PBMCs中的表达情况可作为临床评估SLE患者疾病活动程度的指标。

简介：摘要：语言表达能力是幼儿必须具备的基本能力之一，将绘本故事应用到幼儿教育当中，能够以符合幼儿兴趣爱好和身心健康发展规律的方式，集中幼儿的注意力，让幼儿在参与活动中积极调动自身的思维，从而有效提高幼儿的语言表达能力。本文以中班幼儿为主要研究对象，着重对以绘本为载体提高中班幼儿语言表达能力的实践进行了研究和分析。

简介：摘要本文报告了1例超声提示胎儿四肢异常及超声软指标异常、诊断为杆状体肌病的病例。孕妇孕1产0，因孕13周+5超声提示胎儿颈项透明层增厚进行产前诊断。孕18周+2行羊水细胞染色体核型分析、单核苷酸多态性微阵列检测等未见明显异常。孕23、28周超声复查仍可见颈背皮肤皱褶增厚和四肢异常。该孕妇选择于孕29周+2引产。对引产胎儿及家系全外显子组测序（whole exon sequencing，WES），结果WES检出KLHL40基因c.602G>A（p.W201*）和c.1516A>C（p.T506P）复合杂合变异，导致杆状体肌病8型，分别遗传自母亲和父亲。